胰腺癌组织中S100A11、TGF-β1蛋白的表达变化及其相关性

纪易斐，江枫，刘肇修，倪温慨，管程齐，肖明兵，陆翠华，倪润洲(南通大学附属医院，江苏南通226001)



胰腺癌组织中S100A11、TGF-β1蛋白的表达变化及其相关性

纪易斐，江枫，刘肇修，倪温慨，管程齐，肖明兵，陆翠华，倪润洲
(南通大学附属医院，江苏南通226001)

目的 观察钙囊素(S100A11)蛋白、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白在胰腺癌组织中的表达变化，并探讨两者的相关性。方法 采用免疫组化法分别检测S100A11蛋白、TGF-β1蛋白在56例胰腺癌组织中和22例胰腺癌癌旁组织中的表达情况，采用Pearson法对两者进行相关性分析，并分析二者表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系。结果 免疫组化结果显示，S100A11及TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中表达均高于癌旁组织(P均<0.05)；Pearson相关分析显示，胰腺癌组织中S100A11和TGF-β1蛋白表达呈正相关(r=0.674，P<0.05)；S100A11、TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中的表达与患者临床病理特征间均无明显相关性(P均>0.05)。结论 S100A11、TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中呈高表达，二者呈正相关关系。

胰腺癌;钙囊素；转化生长因子β1

胰腺癌是高度恶性的消化系统肿瘤，占癌症相关病死率的第四位[1]，胰腺癌发病机制复杂，涉及多条信号通路及相关蛋白[2]。转化生长因子β1(TGF-β1)是一种多功能的细胞因子，在肿瘤发生发展过程中扮演肿瘤抑制基因和癌基因的双重角色[3]。钙囊素(S100A11)隶属于EF手型的S100蛋白家族成员，通过钙离子依赖性信号传导，参与细胞的增殖、分化、凋亡及癌症的形成与发展，与肿瘤的发生、浸润和转移密切相关。TGF-β1与S100A11均可能与胰腺癌的发生发展相关，但两者的关系鲜见报道。本研究通过检测S100A11蛋白、TGF-β1蛋白在胰腺癌和癌旁组织中的表达，探讨两者的相互关系，为后续的研究提供参考。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选择南通大学附属医院普通外科2006～2014年手术切除并经病理检查证实为胰腺癌患者的石蜡切片标本56例份，患者男30例、女26例，年龄35～78(62.64±10.27)岁。胰头癌40例，胰体尾癌16例；高分化8例，中分化32例，低分化及未分化16例；胰腺周围淋巴结转移22例，未转移34例；肿瘤直径≤3 cm 20例，>3 cm 36例；以国际抗癌协会2013年胰腺癌TNM分期标准，Ⅰ期9例，Ⅱ期25例，Ⅲ期12例，Ⅳ期12例。另取相应癌旁(距离癌组织>5 cm)正常胰腺组织22例份，均经组织学检查证实。

1.2 胰腺癌组织及癌旁组织中S100A11蛋白、TGF-β1蛋白表达检测 采用免疫组化法。切片标本经脱蜡、微波抗原修复、过氧化氢消除内源性过氧化物酶活性，分别滴加一抗S100A11及TGF-β1(浓度1∶100)，阴性对照采用PBS替代第一抗体，4 ℃过夜，复温后滴加二抗，37 ℃孵育30 min，最后DAB显色、苏木精复染、封片。结果判断：对每张切片具有代表性的肿瘤区域，在光学显微镜400倍的视野下，用目镜随机选择5个视野。通过计数每个视野内的细胞来分别计算S100A11及TGF-β1的阳性细胞百分比，同时观察各细胞染色强度。S100A11在胞质及核内均有表达，以胞质为主；TGF-β1以细胞质表达为主，可出现淡黄色至棕褐色的阳性颗粒。①染色强度评分(根据显色程度评分)：0分：无染色；1分：浅黄色，呈弥散的胞浆到胞膜分布；2分：棕黄色，细颗粒状分布；3分：棕黄色或棕褐色，粗颗粒状胞质到胞膜及细胞核区域均有分布。②阳性细胞百分比评分：0分：<5%；1分：5%～25%；2分：26%～50%；3分：51%～75%；4分：>75%。每例患者得分为染色强度评分+阳性细胞百分比评分，0～2分为阴性表达(-);3分以上为阳性表达(+)。

2 结果

2.1 S100A11和 TGF-β1蛋白在胰腺癌及癌旁组织中的表达比较 免疫组化检测结果显示，与癌旁组织相比，TGF-β1及S100A11在癌组织中均有较强表达，染色呈棕黄色或棕褐色。胰腺癌组织及癌旁组织中S100A11蛋白表达评分分别为(3.95±1.28)、(1.73±0.93)分，TGF-β1蛋白表达评分分别为(4.02±1.20)、(1.77±0.81)分，与癌旁组织相比，癌组织中S100A11和TGF-β1蛋白表达均得分较高，差异有统计学意义(P均<0.05)。

2.2 S100A11和TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中表达的相关性分析 Pearson相关分析显示，胰腺癌组织中S100A11和TGF-β1蛋白表达呈正相关(r=0.674，P<0.05)。

2.3 S100A11及TGF-β1蛋白表达与胰腺癌患者临床病理特征的关系 胰腺癌组织中S100A11及TGF-β1蛋白表达与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期等临床病理特征无明显相关性(P均>0.05)，见表1。

3 讨论

胰腺癌的发生发展由多种致癌基因及抑癌基因参与，这些基因通过各种信号转导通路调节细胞增殖、控制细胞周期及细胞凋亡。TGF-β1是一种多功能的细胞因子，在肿瘤发生发展中扮演双重角色，在肿瘤发生早期其作为肿瘤抑制因子起作用，但随着肿瘤的发展，肿瘤细胞逐渐耐受TGF-β1信号的抑制作用，甚至肿瘤细胞反过来利用TGF-β1信号通路来促进肿瘤发展。有研究发现，血浆高水平表达TGF-β1可预测胰腺癌的发生风险，且与胰腺癌的预后不佳相关[4，5]。本研究发现胰腺癌组织中TGF-β1高表达，与既往研究结果相似。随着对S100蛋白家族研究的进一步深入,发现S100蛋白家族与多种恶性肿瘤的发生发展和转移密切相关。近年研究发现，S100A11在多种恶性肿瘤中存在高表达。Li等[6]研究发现S100A11在卵巢癌组织中表达量高于正常卵巢上皮细胞，提示S100A11可能参与了卵巢癌的发生发展。Zhang等[7]通过研究乳腺癌患者S100 mRNA表达发现，S100A11在乳腺癌患者中高表达，且与不良预后相关。我们前期研究发现S100A11在胰腺癌组织中高表达，经分析S100A11是判断胰腺癌患者预后的有效指标[8，9]。本研究再次证实了S100A11在胰腺癌组织中的高表达，与既往研究一致。本研究中S100-A11及TGF-β1表达情况与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤分化程度、淋巴结转移、肿瘤直径、TNM分期等临床病理特征无明显相关性，考虑可能与免疫组化评判方法、样本量不够大等有关，仍需进一步验证。

Sakaguchi等[10,11]通过对人表皮角质形成细胞研究发现，细胞外Ca2+和TGF-β1高浓度时，S100A11 可与受体结合转导入胞质内，胞质内S100A11在蛋白激酶的作用下磷酸化，与核仁蛋白结合从胞质易位到胞核中。在细胞核内，磷酸化的S100A11与SMAD异源复合物共同结合Sp1蛋白，导致转录调控因子的活化，诱导p21生成，抑制DNA合成。另外Niu等[12]研究发现S100A11及相关蛋白可通过调节TGF-β/Smad信号来促进结直肠癌的侵袭性。可见，S100A11与TGF-β1存在一定联系。而TGF-β1、S100A11在胰腺癌组织中均高表达，二者可能参与了胰腺癌的发生发展，但两者在胰腺癌中的相关性尚无报道。本研究在同一批胰腺癌患者组织中同步检测S100A11及TGF-β1蛋白表达，结果显示S100A11及TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中均高表达。相关分析显示胰腺癌组织中S100A11蛋白及TGF-β1蛋白表达呈正相关，说明两种蛋白在胰腺癌的发生发展过程中可能存在协同作用或相互影响。但S100A11及TGF-β1蛋白是如何共同调节胰腺癌的发生发展，具体机制如何有待进一步研究。

综上所述，S100A11、TGF-β1蛋白在胰腺癌组织中呈高表达，二者呈正相关关系；在胰腺癌发生发展过程中二者可能存在协同作用或相互影响。

[1] Siegel RL, Miller KD, Jemal A. Cancer statistics,2015 [J]. CA Cancer J Clin, 2015,65(1):5-29.

[2] Shimamoto S, Kubota Y, Yamaguchi F, et al. Ca2+/S100 Proteins Act as Upstream Regulators of the Chaperone-associated Ubiquitin Ligase CHIP (C Terminus of Hsc70-interacting Protein) [J]. J Biol Chem, 2013,288(10):7158-7168.

[3] Romanov VS, Pospelov VA, Pospelova TV. Cyclin-dependent kinase inhibitor p21Waf1: Contemporary view on its role in senescence and oncogenesis [J]. Biochemistry (Moscow), 2012,77(6):575-584.

[4] Jacobs EJ, Newton CC, Silverman DT, et al. Serum transforming growth factor-β1 and risk of pancreatic cancer in three prospective cohort studies [J]. Cancer Causes Control, 2014,25(9):1083-1091.

[5] Javle M, Li Y, Tan D, et al. Biomarkers of TGF-βsignaling pathway and prognosis of pancreatic cancer[J]. PLoS One, 2014,9(1):e85942.

[6] Li Y, Zhang J. Expression of S100A11 is a prognostic factor for disease-free survival and overall survival in patients with high-grade serous ovarian cancer[J]. Appl Immunohistochem Mol Morphol, 2017，25(2):110-116.

[7] Zhang S, Wang Z, Liu W， et al. Distinct prognostic values of S100 mRNA expression in breast cancer[J]. Sci Rep, 2017,7(1):39786.

[8] 袁晓庆，肖明兵，江枫，等．钙囊素对胰腺癌预后判断的价值[J]．江苏医药，2012,38(9):1052-1054.

[9] Xiao MB， Jiang F， Ni WK， et al. High expression of S100A11 in pancreatic adenocarcinoma is an unfavorable prognostic marker[J]. Medical Oncol, 2012,29(3):1886-1891.

[10] Miyazaki M， Sakaguchi M， Akiyama I， et al. Involvement of Interferon Regulatory Factor 1 and S100C/A11 in Growth Inhibition by Transforming Growth Factor β1 in Human Hepatocellular Carcinoma Cells[J]． Cancer Res, 2004,64(12):4155-4161.

[11] Sakaguchi M， Miyazaki M， Sonegawa H， et al. PKCα mediates TGFβ-induced growth inhibition of human keratinocytes via phosphorylation of S100C/A11[J]. J Cell Biol, 2004,164(7):979-984.

[12] Niu Y, Shao Z, Wang H， et al. LASP1-S100A11 axis promotes colorectal cancer aggressiveness by modulating TGF-β/Smad signaling[J]. Sci Rep, 2016,6(5):26112.

国家自然科学青年基金资助项目(81502055)；江苏省自然科学基金资助项目(BK20161286)；江苏省卫计委面上项目(H201624)；南通市科技计划资助项目(MS22016056、MS22015062、HS2014072)。

肖明兵(E-mail：xmb73@163.com)

10.3969/j.issn.1002-266X.2017.25.019

R735.9

B

1002-266X(2017)25-0058-03

2017-04-10)