四妙勇安汤活性部位灌胃给药的急性毒性实验研究※

聂 波 徐 冰 陈立新 赵明镜 吴爱明 娄利霞 郑思新 吴圣贤

(北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室，北京 100700)

四妙勇安汤活性部位灌胃给药的急性毒性实验研究※

聂 波 徐 冰1陈立新2赵明镜 吴爱明 娄利霞 郑思新3吴圣贤△

(北京中医药大学东直门医院中医内科学教育部和北京市重点实验室，北京 100700)

目的 观察四妙勇安汤活性部位(SMAF)灌胃给药的急性毒性。方法 通过预实验，未获得动物的半数致死量，进行最大耐受量试验。选取昆明小鼠及Wistar大鼠各40只，雌雄各半，均分为给药组(20只)及对照组(20只)，雌雄各半，给药组采用一次最大浓度和最大容积灌胃给药，小鼠灌胃剂量为6.0 g/kg，大鼠灌胃剂量为3.0 g/kg，对照组灌胃等容积0.5%羧甲基纤维素。观察给药14 d内，大、小鼠的行为、体质量、进食量、死亡率及毒性反应，计算药物的最大耐受量。结果 给药后14 d内，与对照组相比，给药组雌雄小鼠、大鼠活动、行为、眼睑、分泌物、呼吸、腹形、排便等均无异常，未见因药物引起的死亡。给药组雌雄小鼠、大鼠给药后7、14 d体质量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药组雌雄小鼠、大鼠药后7、14 d进食量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。给药14 d后，处死各组小、大鼠，与对照组比较，给药组均未见脏器明显的肿大、萎缩、坏死、充血、出血、水肿等异常现象。四妙勇安汤活性部位一次性灌胃给药对小鼠最大耐受量>6.0 g/kg(相当于人日推荐量的360倍)；对大鼠最大耐受量>3.0 g/kg(相当于人日推荐量的180倍)。结论 SMAF灌胃给药没有明显毒性。

四妙勇安汤；急性毒性试验；最大耐受量；大鼠,Wistar；小鼠

四妙勇安汤是最具中医配伍和用量特色的经典古方之一，收载于清代医家鲍相敖的《验方新编》，由金银花、玄参、当归、生甘草组成，具有解毒、滋阴、活血、通络等功效，是治疗下肢动脉硬化闭塞症和脉管炎的传统名方[1-2]。近年来，本着中医学“异病同治”的辨证论治思想，该方被广泛用于治疗冠心病、动脉粥样硬化、不稳定性心绞痛等心血管疾病，临床疗效显著[3-4]。

课题组自2000年提出并探索了解毒活血药防治动脉粥样硬化的思路，展开了相关的实验研究，结果表明：清热解毒和活血化瘀并用的四妙勇安汤，不但可以调节血脂，延缓斑块形成[5-6]，还可以减轻动脉粥样硬化炎症反应，稳定斑块，防止斑块破裂[7-8]。但由于原组方中各药用量大，作用机制、药效物质基础、药物的安全性报道较少，因此，我们利用药效活性导向筛选和组分配伍方法获得活性组合物“四妙勇安汤”的活性部位，为评价其安全性，本试验观察一次性灌胃“四妙勇安汤”活性配伍方对大鼠、小鼠所产生的毒性反应和最大耐受量[9-10]，为药效学研究提供剂量参考，为其临床应用及进一步的安全性试验研究奠定基础。

1 材料与方法

1.1 受试药物 四妙勇安汤活性部位(缩写SMAF，下同)是利用药效活性导向筛选和组分配伍方法获得的活性组合物，1 g SMAF相当于原药材12.37 g。取研磨后的SMAF 15 g，加入0.5%羧甲基纤维素(CMC)至100 mL溶解，按照设计剂量(小鼠灌胃给药剂量6.0 g/kg，大鼠灌胃给药剂量3.0 g/kg)，用0.5% CMC水溶液稀释成所需浓度，备用。赋形剂对照组：0.5% CMC。

1.2 实验动物及饲养条件 昆明小鼠40只，雌雄各半，体质量18～22 g。Wistar大鼠40只，雌雄各半，体质量140～160 g。购于军事医学科学院实验动物中心[许可证号：SCXK-(军)2007-004]。大、小鼠均饲养于北京科兰博实验动物研究所小动物实验室[许可证号：SYXK-(京)2007-0018]。室温25～28 ℃，湿度50% RH左右，光照良好。动物饲料为北京科兰博实验动物研究所专用饲料，自由进食和饮水。实验过程中对动物的处置符合北京中医药大学东直门医院实验动物伦理委员会的规定。

1.3 实验器材 注射器(1、2.5 mL)，量筒(20 mL)，烧杯(25、50 mL)，小鼠灌胃针，PW-3电子秤(上海凯士电子有限公司)，外科手术剪，眼科镊子，防护手套。

1.4 小鼠急性毒性试验方法[11-12]小鼠40只，随机分为给药组和对照组，雌雄各半，每组各10只。给药组：灌胃给药剂量6.0 g/kg，一次性给药。灌胃前禁食不禁水12 h，给药后常规饲养，观察14 d。对照组灌胃等容积的0.5% CMC。

1.5 大鼠急性毒性试验方法[13]大鼠40只，随机分为给药组和对照组，雌雄各半，每组各10只。给药组：灌胃给药剂量3.0 g/kg，一次性给药。灌胃前禁食不禁水12 h，给药后常规饲养，观察14 d。对照组灌胃等容积的0.5% CMC。

1.6 观察指标 ①一般状态：主要观察给药后即刻至6 h动物的一般状态(包括行为、活动、眼睑、分泌物、呼吸、腹形、排便等)。其后上述内容每日观察1次，如动物死亡及时肉眼尸检；②于给药前和给药后的第7、14 d，测量体质量；③于给药前和给药后的第7、14 d，测量进食量；④药后14 d处理活存动物，进行大体解剖，若有肉眼可见变化则进行组织病理学检查。

2 结 果

2.1 小鼠急性毒性实验

2.1.1 一般情况 给药后14 d内，与对照组相比，给药组小鼠活动、行为、眼睑、分泌物、呼吸、腹形、排便等均无异常，未见因药物引起的死亡。

2.1.2 死亡率及最大耐量 给药后14 d内，与对照组相比，给药组小鼠全部活存，提示最大耐受量>6.0 g/kg。

2.1.3 小鼠主要脏器解剖肉眼观察 给药14 d后，小鼠脱颈椎处死，解剖，观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，与对照组比较，给药组均未见脏器明显的肿大、萎缩、坏死、充血、出血、水肿等异常现象。

2.1.4 SMAF对小鼠体质量的影响 见表1。

表1 SMAF对小鼠体质量的影响

n给药组(n=20)给药前给药后7d给药后14d对照组(n=20)给药前给药后7d给药后14d雌性1020.70±0.7925.50±0.5129.90±1.2921.40±0.7526.00±0.5429.60±0.47雄性1020.70±1.1826.80±0.6830.90±1.2721.30±0.7927.10±0.5531.50±1.32

由表1可见，给药7、14 d后，给药组小鼠和对照组小鼠体质量均持续增加，但给药组小鼠给药后7、14 d体质量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.1.5 SMAF对小鼠进食量的影响 见表2。

表2 SMAF对小鼠进食量的影响

n给药组(n=20)给药前给药后7d给药后14d对照组(n=20)给药前给药后7d给药后14d雌性105.39±0.045.60±0.095.41±0.045.40±0.095.68±0.115.88±0.09雄性106.31±0.106.37±0.105.97±0.076.13±0.706.24±0.146.16±0.09

由表2可见，给药7、14 d后，给药组雌雄小鼠进食量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 大鼠急性毒性实验

2.2.1 一般情况 给药后14 d内，与对照组比较，给药组大鼠活动、行为、眼睑、分泌物、呼吸、腹形、排便等均无异常，未见因药物引起的死亡。

2.2.2 死亡率及最大耐量 给药后14 d内，与对照组比较，给药组大鼠全部活存，提示最大耐受量>3.0 g/kg。

2.2.3 SMAF对大鼠体质量的影响 见表3。

表3 SMAF对大鼠体质量的影响

n给药组(n=20)给药前给药后7d给药后14d对照组(n=20)给药前给药后7d给药后14d雌性10201.10±7.19233.20±4.42265.00±8.02199.50±3.17233.50±4.24269.20±5.60雄性10201.90±7.02245.70±3.62282.30±7.18200.30±6.69243.90±4.29277.20±4.51

由表3可见，给药7、14 d后，给药组大鼠和对照组大鼠体质量均持续增加，但给药组大鼠给药后7、14 d体质量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.4 对大鼠进食量变化的影响 见表4。

表4 SMAF灌胃对大鼠进食量变化的影响 ±s

由表4可见，给药7、14d后，给药组雌雄大鼠进食量与对照组同期比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2.5 大鼠主要脏器解剖肉眼观察 给药14 d后，大鼠过量麻醉处死，解剖，观察心、肝、脾、肺、肾等主要脏器，与对照组比较，给药组大鼠未见脏器明显的肿大、萎缩、坏死、充血、出血、水肿等异常现象。

3 讨 论

急性毒性实验是在1 d内单次或多次对动物给药后，在14 d内连续观察动物所产生的毒性反应及死亡情况。如受试药物引起动物死亡，应测定药物毒性反应与剂量的关系，通常测定LD50；当受试药物测不出LD50时，可以做1次或1 d内数次给药的最大耐受量实验来考察动物的急性毒性情况[13]。

四妙勇安汤作为中医解毒活血代表方药，用于治疗脱疽(即血栓闭塞性脉管炎)已使用多年[14]，目前在冠状动脉粥样硬化、冠心病等疾病临床应用广泛，且疗效显著，均未见报道有明显毒副反应[15]。SMAF是四妙勇安汤经过活性筛选后配伍获得的活性配伍方，前期研究已表明SMAF具有抗动脉粥样硬化炎症反应、稳定斑块等药理作用[5-8]。本研究进行的大、小鼠急性毒性实验中，采用可灌胃最大浓度和最大容积进行实验，给药期间，一般情况未见异常，给药组大、小鼠状态良好，均未见动物死亡；体质量及摄食量均未见与给药相关的变化，提示该方药的安全范围大。因此，本研究大、小鼠的最大耐受量实验结果表明，小鼠的最大耐受量>6.0 g/kg(相当于人日推荐量的360倍)，大鼠的最大耐受量>3.0 g/kg(相当于人日推荐量的180倍)，均未出现动物死亡，说明SMAF毒性很小或者无毒。为进一步开展其全面的毒理评价试验奠定基础，为临床广泛应用提供安全保证。

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(本文编辑：李珊珊)

The acute toxicity experimental study of Simiao-yongan decoction active fraction by intragastric administration

NIEBo*,XUBing,CHENLixin,etal.

*KeyLaboratoryofChineseInternalMedicineofMinistryofEducationandBeijing,DongzhimenHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100700

Objective To observe the acute toxicity of Simiao-yongan decoction active fraction (SMAF). Methods Through the pre-experiment, the half lethal dose of the animal was not obtained, and the maximum tolerance dose (MTD) test was carried out. 40 Kunming mice and 40 Wistar rats (half male and female ) were divided into medicine group (n=20) and control group (n=20), hale male and half female.The medicine group received a maximum concentration and the maximum volume, the mice received gavage in a dosage of 6.0g/kg and the rats received 3.0g/kg. The control group received 0.5% carboxymethocel at equal volume by gavage.The mice received gavage in a dosage of 6.0 g/kg and the rats received 3.0g/kg with a maximum concentration and the maximum volume. The behavior, body weight, eating volume and rate of death and toxic reaction within 14 days were observed in mice and rats, and the drug maximum tolerance dose (MTD) was calculated. Results 14 d after administration, as compared with control group, there were no abnormalities on activity, behavior, eyelid, excreta, breath, abdominal and defecation in administration group, and with no drug-induced death. There were no statistical differences on the body weight at 7 and 14 d after administration between administration and control group at the same period (P>0.05). There were no statistical differences on the eating volume at 7 and 14 d after administration between male and female mice and rats in administration and control group at the same period (P>0.05). The MTD of mice was greater than 6.0 g/kg (Equivalent to 360 times the amount recommended by the people) and the MTD of the rats was greater than 3.0 g/kg (Equivalent to 180 times the amount recommended by the people). Conclusion SMAF has no obvious toxicity by intragastric administration.

Simiao-yongan decoction; Acute toxicity test; Maximum tolerance dose; Rats; Wistar; Mice

10.3969/j.issn.1002-2619.2017.01.026

※ 项目来源：国家十一五科技重大专项(编号：2009ZX09103-318)

聂波(1977—)，女，副研究员，博士。研究方向：中药药理与中药化学。

R994.21

A

1002-2619(2017)01-0100-04

2016-05-18)

△ 通讯作者：北京中医药大学东直门医院脑病科，北京 100700

1 中国藏学研究中心北京藏医院中医科，北京 100029

2 世界中医药学会联合会，北京 100029

3 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所药理室，北京 100850