TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者血清、在位内膜、异位内膜中的表达变化

付一元 肖青 范雪梅 傅静 王蔚军

·论著·

TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者血清、在位内膜、异位内膜中的表达变化

付一元 肖青 范雪梅 傅静 王蔚军

目的 本研究旨在探讨TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者的血清、在位内膜、异位内膜的表达变化规律，以期对子宫内膜异位症部分发病机制进行研究。方法 随机选择2013年10月至2015年10月行手术治疗的子宫内膜异位症患者70例作为研究对象，其中痛经组45例，无痛组25例。另外选择同时期手术的子宫肌瘤患者30例，作为对照组。依据视觉模拟评分法将痛经组45例患者分组，包括轻度、中度和重度痛经患者各15例。在手术前空腹取静脉血，测定下列指标血清神经生长因子(NGF)、缓激肽(BK)和前列腺素F2α(PGF2α)，手术中采集在位内膜及异位内膜标本，分别采用免疫组化法和免疫印记检测法检测在位内膜组织和异位内膜组织中NGF、 BKB1R、TRPV1表达水平。结果 子宫内膜异位症痛经组患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量显著高于对照组和无痛组(P<0.05)；血清中NGF表达与PGF2α以及BK表达与PGF2α表达均呈正相关(P<0.05)。而痛经患者按照VAS分级从轻度、中度和重度上升，患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量亦呈逐渐升高趋势(P<0.05)，Pearson相关分析也表明血清中NGF、BK和PGF2α表达均与VAS呈正相关(P<0.05)。通过免疫组化和免疫印记方法检测对在位内膜和异位内膜进行研究发现NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆，在位、异位内膜的腺体内均有表达。痛经组患者在位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组和对照组(P<0.05)；而痛经组患者异位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组(P<0.05)。相关性亦表明NGF与TRPVl，BKB1R与TRPV1表达呈正相关(P<0.05)。结论TRPV1及其致敏因子NGF、BKB1R、PGF2α可能在子宫内膜异位症患者痛经的发生机制中发挥重要作用。

子宫内膜异位症；痛经；瞬时感受器电位香草酸受体1；神经生长因子；缓激肽

子宫内膜异位症(endometriosis)指因某种因素使子宫内膜在子宫腔以外身体的其他部位生长[1]。这种异位的内膜在组织学上不但有内膜的腺体，且有内膜间质围绕，其发病率大约占全部育龄期女性的10%～15%[2]。临床表现各异，其中盆腔疼痛症状最为典型，统计显示子宫内膜异位症患者87.7%有痛经[3]。有研究表明，子宫内膜异位症病灶部位能够产生炎症，所释放的炎性介质通过启动相关信号转导途径，激活疼痛相关离子通道，最终引发疼痛。研究表明瞬时感受器电位香草酸受体1(transient receptor potential rallilloid receptor 1，TRPV1)及其致敏因子参与了内膜异位症痛觉传递过程[4]。本研究旨在探讨TRPV1及其致敏因子在子宫内膜异位症患者的血清、在位内膜、异位内膜的表达变化规律。

1 资料与方法

1.1 一般资料 随机选择2013年10月至2015年10月广州市妇女儿童医疗中心行手术治疗的子宫内膜异位症患者70例作为研究对象，年龄28～48岁，平均年龄(35.3±9.7)岁。其中25例无盆腔疼痛，年龄28～48岁，平均年龄(36.4±9.4)岁；45例患者伴有痛经，年龄28～48岁，平均年龄(34.2±8.9)岁。依据视觉模拟评分法(visual analogue scale，VAS)将痛经组45例患者分组，包括轻度、中度和重度痛经患者各15例。在手术开始前上午8∶00时空腹经肘静脉抽取外周静脉血，采用酶联免疫法测定下列指标血清神经生长因子(NGF)、缓激肽(BK)和前列腺素F2α(PGF2α)，手术中采集在位内膜及异位内膜标本，术后70例患者均经病理检测证实为子宫内膜及异位内膜组织。另外选择同时期在院手术的子宫肌瘤患者30例，术中采集子宫内膜组织作为对照组，要求既往无痛经病史，对照组28～48岁，平均年龄(36.3±9.2)岁，分别采用免疫组化法和免疫印记检测法检测在位内膜组织和异位内膜组织中NGF、 BKB1R、TRPV1表达水平。本研究经过医院伦理委员会讨论通过，术前全部进行知情同意书告知并签字确认。

1.2 纳入标准 (1)年龄介于25～50岁，未绝经的育龄女性；(2)手术前3个月之内未接受任何激素及中西药物治疗；(3)手术后病理确诊为子宫内膜异位症。

1.3 排除标准 (1)合并盆腔炎症、盆腔良恶性肿瘤、囊肿、子宫肌瘤等妇科疾病；(2)合并心脑血管疾病、肝肾疾病、造血系统疾病等疾病；(3)近三个月内服用中西药治疗或者应用任何激素者；(4)无自知力患者(精神疾病)。

2 结果

2.1 3组患者血清中NGF、BK、PGF2α的含量表达及相关性分析 子宫内膜异位症痛经组患者血清中NGF的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者血清中NGF的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者血清NGF含量与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比，痛经组患者血清中BK的水平升高较为显著，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者血清BK水平尽管略高于无痛组，但差异无统计学意义(P>0.05)；无痛组患者血清BK水平与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。痛经组患者血清中PGF2α的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者血清中PGF2α的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者血清PGF2α含量亦高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析表明：血清中NGF表达与PGF2α表达呈正相关(r=0.468，P=0.004)；血清中BK表达与PGF2α表达亦呈正相关(r=0.513，P=0.000)；血清中NGF表达与BK表达之间无相关性(r=0.185，P=0.278)。见表1、2。

组别NGFBKPGF2α对照组(n=30)0．63±0．28∗4．68±1．37∗6．33±2．12∗无痛组(n=25)0．71±0．32∗4．94±1．6911．03±3．68∗痛经组(n=45)1．62±0．876．02±1．8516．75±6．88

注：与痛经组比较,*P<0.05；与无痛组比较,#P<0.05

表2 血清NGF、BK、PGF2α之间的相关性分析

2.2 不同VAS分级患者血清中NGF、BK、PGF2α的表达及相关性分析 本研究中子宫内膜异位症痛经组患者45例患者按照VAS分级：轻度、中度和重度者均为15例。中度痛经患者血清中NGF的含量显著高于轻度痛经患者，差异有统计学意义(P<0.05)；重度痛经患者血清中NGF的含量显著高于中度和轻度痛经患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。中度痛经患者血清中BK的含量显著高于轻度痛经患者，差异有统计学意义(P<0.05)；重度痛经患者血清中BK的含量显著高于中度和轻度痛经患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。中度痛经患者血清中PGF2α的含量显著高于轻度痛经患者，差异有统计学意义(P<0.05)；重度痛经患者血清中PGF2α的含量显著高于中度和轻度痛经患者，差异均有统计学意义(P<0.05)。Pearson相关分析表明：血清中NGF表达与VAS呈正相关(r=0.635，P=0.000)；血清中PGF2α表达与VAS呈正相关(r=0.768，P=0.000)；血清中BK表达与VAS之间呈正相关(r=0.447，P=0.002)。见表3、4。

组别NGFBKPGF2α轻度1．04±0．18∗#4．76±0．69∗#8．76±3．69∗#中度1．71±0．36∗5．82±1．13∗16．64±5．65∗重度2．11±0．657．48±1．6124．85±6．36

注：与重度痛经组比较,*P<0.05；与中度比较,#P<0.05

表4 血清NGF、BK、PGF2α与VAS之间的相关性分析

2.3 在位、异位内膜中NGF、BKB1R、TRPV1蛋白表达的免疫组化检测

2.3.1NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆，在位、异位内膜的腺体内均有表达。子宫内膜异位症痛经组患者在位内膜NGF的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位内膜NGF的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜NGF含量与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比，痛经组患者在位内膜BKB1R的水平升高较为显著，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位内膜BKB1R水平尽管略高于无痛组，但差异无统计学意义(P>0.05)；无痛组患者在位内膜BKB1R水平与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。痛经组患者在位内膜TRPV1的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位内膜TRPV1的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜TRPV1含量亦高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表5。

表5 在位内膜中NGF、 BKB1R、TRPV1蛋白表达的免疫组化检测比较 ±s

注：与痛经组比较,*P<0.05；与无痛组比较,#P<0.05

2.3.2 痛经组患者异位内膜NGF的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者异位内膜NGF含量与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。痛经组患者异位内膜BKB1R水平高于无痛组，但差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者异位内膜BKB1R水平与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。痛经组患者异位内膜TRPV1的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜TRPV1含量尽管略高于对照组，差异无统计学意义(P>0.05)。见表6。

表6 异位内膜中NGF、 BKB1R、TRPV1蛋白表达的

注：与痛经组比较,*P<0.05

2.4 在位、异位内膜中NGF、BKB1R、TRPV1蛋白表达的免疫印迹试验NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆，在位、异位内膜的腺体内均有表达。子宫内膜异位症痛经组患者在位内膜NGF的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位及异位内膜NGF的含量显著高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜NGF含量与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组相比，痛经组患者在位内膜BKB1R的水平升高较为显著，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位及异位内膜BKB1R水平均高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜BKB1R水平与对照组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。痛经组患者在位内膜TRPV1的含量显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)；痛经组患者在位及异位内膜TRPV1水平均高于无痛组，差异有统计学意义(P<0.05)；无痛组患者在位内膜TRPV1含量尽管略高于对照组，但差异无统计学意义(P>0.05)。见表7、8。

表7 在位内膜中NGF、 BKB1R、TRPV1蛋白表达的免疫印迹试验比较 ±s

注：与痛经组比较,*P<0.05

表8 异位内膜中NGF、 BKB1R、TRPV1蛋白表达的免疫印迹试验比较 ±s

注：与痛经组比较,*P<0.05

2.5 在位内膜、异位内膜NGF、BKB1R与TRPV1之间的相关性分析 在位内膜中NGF与BKB1R的蛋白表达呈正相关(r=0.869，P<0.05)；BKB1R与TRPV1的表达呈正相关(r=0.871，P<0.05)；NGF与TRPV1的表达呈正相关(r=0.762，P<0.05)。异位内膜中NGF与BKB1R的蛋白表达呈正相关(r=0.951，P<0.05)；BKB1R与TRPV1的表达呈正相关(r=0.974，P<0.05)；NGF与TRPV1的表达呈正相关(r=0.962，P<0.05)。见表9。

表9 在位内膜、异位内膜NGF、BKB1R与TRPV1之间的相关性分析

3 讨论

子宫内膜异位症是指有活性的子宫内膜腺体细胞和间质细胞种植在子宫内膜以外的位置而形成的一种育龄期女性常见的激素依赖性、慢性炎症性妇科疾病[5]。内膜异位症表现出类似于恶性肿瘤所具备的种植、浸润及远隔部位转移的特性，病变分布较为广泛，形态各异，临床主要表现为盆腔疼痛、不孕症、月经紊乱、盆腔包块等。盆腔疼痛形式多样，以进行性加重的痛经最为常见，疼痛位置较深，不能准确定位，疼痛周期性发作，可伴发腹壁肌紧张，疼痛严重患者可出现烦躁、易怒、焦虑、抑郁、睡眠障碍等。近年来该病发病率呈逐年上升趋势，发病机制尚未明确，目前多数观点认为由于异位内膜局部前列腺素水平升高、炎性因子集聚以及异位内膜中神经出现异常生长致使中枢神经系统与周围神经敏感性增强而引发，此外局部病灶增大而导致的机械性压迫和牵拉也是造成疼痛的重要因素[6,7]。因此，深入研究子宫内膜异位症患者疼痛发生机制具有十分重要的意义。

疼痛是各种伤害性刺激作用在机体时造成的组织潜在或实质性损伤而引发的一种令人不愉快的感觉和情绪上的主观感受，盆腔疼痛是子宫内膜异位症最典型症状[8]。痛觉感受器位于脊神经背根脊神经节以及三叉神经节内初级感觉神经元的神经末梢之中，广泛分布在肌肉组织、皮肤、关节以及内脏器官[9]。痛觉感受器可以被炎症介质所增敏，当机体发生炎症时，机体释放的炎症介质能够激活位于痛觉感受器末端的离子通道，形成动作电位，从而引发疼痛。

TRPV1是感知疼痛的关键分子之一[10]，研究证实TRPV1存在于伤害性感受器上的一类非选择性阳离子通道蛋白，属于瞬间感受器，TRPV1的致敏因素除辣椒素外，还包括伤害性刺激、炎性介质、热刺激、组织损害刺激物、细胞外渗透压改变以及静电荷等因素[11]。TRPV1被激活后主要造成钙离子等阳离子的内流，进而参予痛觉形成与整合的病理生理过程。因此TRPV1能够作为连接外界环境与神经系统之间的桥梁，可以将损伤性刺激转换成内向电流，有学者指出TRPV1在伤害性刺激的痛觉形成中处于核心地位[12]。

长期以来子宫内膜异位症被认定为是一种炎症性疾病，炎症发生时，炎症组织能够释放多种炎性介质，TRPV1可以在多种炎性介质的调节被致敏，包括神经生长因子、缓激肽和前列腺素等[13]。这些炎性介质在损害性感受器中通过激活多种蛋白激酶来发挥作用。而TRPV1则恰好是这些蛋白激酶在炎症热刺激致痛觉敏感过程中最重要的靶分子之一。同时，TRPV1对于热刺激致痛觉敏感的阈值能够随内环境pH值的下降以及痛觉致敏因素(如神经生长因子、缓激肽、前列腺素和ATP等)的存在而降低，发生痛觉敏感，即在生理体温状态下即可被激活[14]。有研究表明在前列腺素的存在的条件下，TRPV1激活的温度阈值甚至低至35℃[15]。这能够解释子宫内膜异位症患者为何经常出现盆腔疼痛，这已有研究报道证实，但TRPV1激活与子宫内膜异位症的临床分期没有关联[15]。

本研究结果显示，子宫内膜异位症痛经组患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量显著高于对照组；痛经组患者血清中NGF、BK和PGF2α含量显著高于无痛组；无痛组患者血清NGF、BK和PGF2α含量与对照组之间比较差别无统计学意义。相关分析表明：血清中NGF表达与PGF2α以及BK表达与PGF2α表达均呈正相关，而血清中NGF表达与BK表达之间无相关性。而症痛经患者按照VAS分级从轻度、中度和重度上升，患者血清中NGF、BK和PGF2α的含量亦呈逐渐升高趋势，Pearson相关分析也表明血清中NGF、BK和PGF2α表达均与VAS呈正相关。通过免疫组化和免疫印记方法检测对在位内膜和异位内膜进行研究发现NGF、BKB1R、TRPV1主要定位于细胞浆，在位、异位内膜的腺体内均有表达。痛经组患者在位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组和对照组；而痛经组患者异位内膜NGF、BKB1R、TRPV1的表达显著高于无痛组。相关性亦表明NGF与TRPVl，BKB1R与TRPV1表达呈正相关，即NGF、BKB1R的表达升高能够促进TRPVl的表达上升，由此推测子宫内膜异位症患者盆腔疼痛与TRPV1及其致敏因子激活TRPV1通道的存在关联，子宫内膜出现异位种植播散后，在局部形成炎症反应，在神经生长因子、缓激肽、前列腺素等炎症介质的共同作用下，TRPV1阳离子通道激活开放，TRPV1表达水平上升，疼痛阈值下降导致痛觉过敏，最终导致盆腔疼痛的发生。

1 宋楠.子宫内膜异位症疼痛与瞬时受体电位辣椒素亚型-1 表达的研究.中国协和医科大学,2010.127.

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4 王水英,黄荷凤.子宫内膜异位症不孕与盆腔内环境及表观遗传学的关系.中国实用妇科与产科杂志,2013,29:545-548.

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Changes of expressions of TRPV1 and its sensitizing factor in serum, eutopic endometrium and ectopic endometrium of patients with endometriosis

FUYiyuan,XIAOQing,FANXuemei,etal.

DepartmentofGynecology,MedicalCenterForWomenandChildren,Guangzhou510623,China

Objective To investigate the change regulation of expressions of TRPV1 and its sensitizing factor in serum, eutopic endometrium and ectopic endometrium of patients with endometriosis in order to explore the pathogenesis mechanism of endometriosis. Methods Seventy patients with endometriosis who were admitted and treated in our hospital from October 2013 to October 2015 were randomly divided into dysmenorrhea group (n=45)andnon-paingroup(n=25).Besidestheother30patientswithuterinefibroidswhounderwentsynchronizationsurgerywereservedascontrolgroup.Moreoverthe45patientsindysmenorrheagroupwereredividedinto3subgroupsbymeansofVisualAnalogueScale,includingmild,medium,severedysmenorrheagroups,with15patientsineachgroup.TheexpressionlevelsofofTRPV1andsensitizingfactorsincludingNGF,BKB1R,PGF2αinserum,eutopicendometriumandectopicendometriumofpatientswithendometriosisweredetectedbyELISA,immunohistochemistryandWesternBlot,respectively. Results The expression levels of NGF,BK and PGF2αin dysmenorrhea group were significantly higher than those in control group and non-pain group (P<0.05). The expression of NGF in serum was positively correlated to that of PGF2α,and the expression of BK was positively correlated to that of PGF2α(P<0.05).ThePearsoncorrelationanalysisshowedthatexpressionsofNGF,BK,PGF2αwerepositivelycorrelatedwithVAS(P<0.05).TheresultsbyimmunohistochemistryandWesternBlotshowedthattheexpressionlevelsofNGF,BKB1RandTRPV1indysmenorrheagroupweresignificantlyhigherthanthoseinnon-paingroupandcontrolgroup(P<0.05).ThecorrelationanalysisshowedthattheexpressionofNGFwaspositivelycorrelatedtothatofTRPVl,BKB1R,TRPV1(P<0.05).Conclusion TRPV1 and its sensitizing factor including NGF,BKB1R,PGF2α may play an important role in the pathogenesis mechanism of dysmenorrhea in patients with endometriosis.

endometriosis; dysmenorrhea; transient receptor potential vanilloid receptor 1; nerve growth factor; bradykinin

10.3969/j.issn.1002-7386.2017.04.009

510623 广东省广州市妇女儿童医疗中心妇科

R

A

1002-7386(2017)04-0516-05

2016-09-18)