GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响

陈志平+王岚枫+胡蓉

＼[摘要]目的 分析THP-1巨噬细胞中过表达GPR119对脂质代谢相关基因表达的影响。方法 构建过表达GPR119载体，转染THP-1细胞，用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因表达。结果 过表达GPR119组SR-B1、APOE、LCAT基因表达显著高于NC组表达（P=0.000）。结论 过表达GPR119能引起脂质代谢相关基因表达变化。

[关键词]GPR119；脂质代谢；基因表达；THP-1巨噬细胞

[中图分类号] R446.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721（2017）01（c）-0138-03

[Abstract]Objective To investigate the effects of overexpression of GPR119 on expression of genes related to lipid metabolism in THP-1 macrophages.Methods Expression vector GPR119，and transfected into THP-1 cells with phorbol ester （160 nmol/L，48 h） to differentiate into macrophages were constructed.NC group：the empty vector transfected into THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h；GPR119 （H） group：over expression of GPR119 transfected with THP-1 Dil-oxLDL （50 g/ml） 48 h.detection of lipid metabolism related genes expression in GPR119 transfected macrophages after THP-1.Results The expression of GPR119 in group SR-B1，APOE，LCAT gene expression were significantly higher than those of control group （P=0.000）.Conclusion Over expression of GPR119 can cause changes in the expression of genes related to lipid metabolism.

[Key words]GPR119；Lipid metabolism；Gene expression；THP-1 macrophage

GPR119是一个新的可能参与调节体内脂质代谢的膜受体[1-2]。GPR119属于G蛋白偶联受体A家族，有7个跨膜区，在胞浆内与三个亚单位（α、β、γ）所组成的G蛋白偶联，主要表达在胰島和胃肠道细胞[3-4]。人源性GPR119的基因定位于Xq26.1，该基因的开放阅读框架仅有一个外显子，不含内含子，编码335个氨基酸。GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用有比较深入的研究，并提示GPR119可能参与脂质代谢[5-8]。本文旨在探讨GPR119是否参与脂质代谢，研究过表达GPR119后脂质代谢相关基因的表达。

1资料与方法

1.1细胞培养

THP-1细胞从American Type Culture Collection （ATCC，Manassas，VA，USA）获得，用RPMI-1640培养基培养，RPMI-1640培养基包含10%胎牛血清和1%青霉素/链霉素，培养环境为37°C，5%CO2。细胞被种植于6孔板或12孔板或60 mm平皿，并且生长到铺满平皿达80%～90%时待用。NC组：空载体转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h；GPR119（H）组：过表达GPR119转染THP-1+Dil-oxLDL（50 μg/ml）48 h。

1.2主要仪器与试剂

CO2培养箱（美国Thermo公司）；超净工作台（美国Thermo公司）；7500 Fast荧光定量仪（美国ABI公司）；胎牛血清（四季青公司）；Lipofectamine 2000（美国Invitrogen公司）；PrimeScript RRT Enzyme MixI和SYBRRPremix Ex TaqTMII等基因检测试剂（购自Takara公司）。

1.3转染

Lipofectamine 2000过表达GPR119，转染THP-1细胞（按美国Invitrogen公司说明书操作），用佛波酯（160 nmol/L，48 h）分化成巨噬细胞。

1.4基因检测

THP-1巨噬细胞PBS清洗3遍，提取总RNA，并将mRNA反转录成cDNA。反应条件为：37℃下15 min，85℃下5 s（表1）。

按试剂说明书操作ABI 7500 Fast Real-Time RCR System，反应条件为：95℃下预变性30 s，95℃下5 s，60℃下34 s，40次循环后分离（表2）。

所有标本均于同一反应体系中进行，每份重复检测3次。

1.5检测指标

检测过表达GPR119转染THP-1巨噬细胞后脂质代谢相关基因清道夫B1（SR-B1）、载脂蛋白E（APOE）及卵磷脂胆固醇酰基转移酶（LCAT）表达。

1.6统计学分析

采用SPSS 13. 0统计学软件对数据进行处理，计量资料采用均数±标准差（x±s）表示，采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2结果

采用实时定量PCR测定过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE及LCAT表达，结果表明，与NC组比较，GPR119（H）组SR-B1、APOE及LCAT表达显著升高（P<0.01）（表3）。

3讨论

本研究表明，过表达GPR119后THP-1巨噬细胞中SR-B1、APOE、LCAT表达显著上调（P=0.000）。SR-B1是一个多配体受体，能在高密度脂蛋白（HDL）与细胞间介导双向脂质转运，可以在动脉粥样硬化斑块的巨噬细胞中表达，对肝脏胆固醇的逆向转运和抗动脉粥样硬化都是必须的。SR-B1敲除鼠可导致快速的冠状动脉闭塞、心肌梗死、心功能降低和死亡，提示SR-B1对于脂质调节和抗动脉粥样硬化起重要作用[9]。APOE是血浆中脂蛋白的重要组成成分，在脂质代谢中起着重要作用，APOE通过不同机制对动脉粥样硬化起一定抑制作用[10]。LCAT是一种血浆中起催化作用的酶，其作用是将HDL的卵磷脂的C2位不饱和脂肪酸转移给游离胆固醇，生产溶血卵磷脂和胆固醇酯，在脂质代谢中发挥重要作用[11-12]。

GPR119在治疗2型糖尿病及肥胖的作用已有比较深入的研究。GPR119与激动剂结合后，通过cAMP信号转导途径，促进葡萄糖依赖性胰岛素和肠肽激素的分泌，是治疗2型糖尿病和肥胖症的药物靶点[13-14]。最新研究表明，GPR119在APOE敲除鼠中降低血清脂质和炎症因子，可能成为动脉粥样硬化的治疗靶点[15-17]。

本研究提示，GPR119在巨噬细胞脂质代谢平衡中发挥重要作用，间接参与对肝脏胆固醇的逆向转运，可能为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。

[参考文献]

[1]Al-Barazanji K，McNulty J，Binz J，et al.Synergistic effects of a GPR119 agonist with metformin on weight loss in diet-induced obese mice[J].J Pharmacol Exp Ther，2015，353（3）：496-504.

[2]Hansen HS，Rosenkide MM，Holst JJ，et al.GPR119 as a fat sensor[J].Trends Pharmacol Sci，2012，33（7）：374-381.

[3]Odori S，Hosoda K，Tomita T，et al.GPR119 expression in normal human tissues and islet cell tumors：evidence for its islet-gastrointestinal distribution，expression in pancreatic beta and alpha cells，and involvement in islet function[J].Metabolism，2013，62（1）：70-78.

[4]夏芳，陈涛，田浩明.GPR119-糖尿病药物新靶点[J].中国糖尿病杂志，2010，18（8）：639-640.

[5]Zhang S，Ma Y，Li J，et al.Molecular matchmaking between the popular weight-loss herb Hoodia gordonii and GPR119，a potential drug target for metabolic disorder[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2014，111（40）：14571-14576.

[6]Merk D，Schubert-Zsilavecz M.Natural compound renews hope for diabetes and obesity therapeutic target[J].Future Med Chem，2015，7（7）：833-835.

[7]Lan H，Lin HV，Wang CF，et al.Agonists at GPR119 mediate secretion of GLP-1 from mouse enteroendocrine cells through glucose-independent pathways[J].Br J Pharmacol，2012，165（8）：2799-2807.

[8]Thabuis C，Destaillats F，Landrier JF，et al.Analysis of gene expression pattern reveals potential targets of dietary oleoy-lethanolamide in reducing body fat gain in C3H mice[J].J Nutr Biochem，2010，21（10）：922-928.

[9]Ma X，Li SF，Qin ZS，et al.Propofol up-regulates expression of ABCA1，ABCG1，and SR-B1 through the PPARγ/LXRα signaling pathway in THP-1 macrophage-derived from cells[J].Cardiovasc Pathol，2015，24（4）：230-235.

[10]Fish JE，Cybulsky M.ApoE attenuates atherosclerosis via miR-146a[J].Circ Res，2015，117（1）：3-6.

[11]Thacker SG，Rousset X，Esmail S，et al.Increased plasma cholesterol esterification by LCAT reduces diet-induced atherosclerosis in SR-BI knockout mice[J].J Lipid Res，2015， 56（7）：1282-1295.

[12]Hu YW，Yang JY，Ma X，et al.A lincRNA-DYNLRB2-2/GPR119/GLP-1R/ABCA1-dependent signal transduction pathway is essential for the regulation of cholesterol homeostasi[J].J Lipid Res，2014，55（4）：681-697.

[13]王瑜.普羅布考联合瑞舒伐他汀对急性脑梗死患者脂质代谢的影响[J].中国医药，2016，11（5）：679-682.

[14]何吉祥，潘庭双，蒋阳阳，等.饲料糖蛋白质比和投喂率对异育银鲫生长及脂质代谢指标的影响[J].上海海洋大学学报，2016，25（2）：198-206.

[15]张建容.普罗布考联合他汀类药物对缺血性脑卒中患者脂质代谢的影响[J].中国医学前沿杂志（电子版），2016， 8（2）：78-80.

[16]李书芬，胡炎伟，杨俊瑶，等.GPR119介导长链非编码RNADYNLRB2诱导ABCAl表达并促进ABCAl介导的胆固醇流出和抗炎作用[J].中国动脉硬化杂志，2013，21（9）：62-62.

[17]高伟，张绍维.GPR119受体激动剂GSK1292263对糖尿病的作用及机制探讨[J].现代仪器与医疗，2016，22（1）：64-66.

（收稿日期：2016-12-22 本文编辑：顾雪菲）