非小细胞肺癌中lncRNA MVIH与吉西他滨耐药的相关性研究*

王立文，沈晓洁，林 彬

(无锡卫生高等职业技术学校护理系，江苏无锡 214028)

非小细胞肺癌中lncRNA MVIH与吉西他滨耐药的相关性研究*

王立文，沈晓洁，林 彬△

(无锡卫生高等职业技术学校护理系，江苏无锡 214028)

目的 探讨非小细胞肺癌(NSCLC)组织中长链非编码RNA MVIH(lncRNA MVIH)与吉西他滨耐药的相关性。方法 将56例NSCLC患者分为观察组(n=30)和对照组(n=26)，观察组给予吉西他滨/顺铂(GP)治疗方案；对照组给予紫杉醇/顺铂(TP)治疗方案，两组患者均以21 d为1个治疗周期；2个周期后进行疗效评价。提取获得标本的RNA，对lncRNA MVIH的表达进行荧光定量分析。结果 观察组30例患者中化疗敏感13例，化疗耐药10例；耐药组lncRNA MVIH的表达水平为3.61±0.50，显著高于敏感组(2.08±0.27)，差异有统计学意义(P<0.05)。对照组26例患者中化疗敏感9例，化疗耐药9例；耐药组lncRNA MVIH表达水平为2.94±0.31，敏感组为2.77±0.34，两组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 NSCLC组织中lncRNA MVIH水平与吉西他滨耐药有关，提示lncRNA MVIH可作为预测吉西他滨耐药的标志物。

癌，非小细胞肺 ；吉西他滨；抗药性，肿瘤，长链非编码RNA

非小细胞肺癌(non small cell lung cancer，NSCLC)是肺癌中最常见的类型，约占肺癌患者的75%～80%[1]。化疗是NSCLC综合治疗的基础，但疗效仍不理想，患者的5年生存率仅15%左右[2]。吉西他滨是NSCLC化疗的常用药物，以吉西他滨为基础的联合化疗能有效提高晚期肺癌患者的生存率[3]，但吉西他滨的耐药性限制了其临床疗效，且目前缺乏有效的指标来预测肺癌患者对吉西他滨的耐药性。近年来研究证实，基因的异常表达决定了机体对药物治疗的反应，这也是肿瘤个体化治疗的理论基础。长链非编码RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在基因表达调控方面具有非常重要的作用，并在肿瘤的形成、增殖、侵袭和转移等方面发挥了调控作用。最近研究发现，一种与肝癌微血管浸润相关的lncRNA(lncRNA associated with microvascular invasion in HCC，lncRNA MVIH)在多种癌细胞中表达异常升高[4-5]，且在NSCLC癌组织中表达异常升高[6]，但是其临床意义尚未完全阐明。本研究旨在分析NSCLC患者癌组织中lncRNA MVIH的表达，并探讨其与吉西他滨化疗耐药的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择某医院于2011年12月至2015年12月收治的NSCLC患者56例，其中男37例，女19例；年龄32～74岁，平均(52.30±7.90)岁。均有客观可评价病灶，全身功能状态(ECOG)评分小于或等于 2分。56例NSCLC患者中鳞状细胞癌18例，腺癌38例；TNM分期(1997年UICC的肺癌分期标准)：Ⅲb期37例，Ⅳ期19例；肿瘤患者卡氏(Karnofsky，KPS)评分：≥80分50例，<80分6例；吸烟23例；饮酒29例；低分化26例，中分化28例，高分化2例。本研究经医院伦理委员会批准，所有患者均签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 将56例患者分为2组，观察组(n=30)：接受吉西他滨/顺铂(GP)方案治疗，吉西他滨1 000 mg/m2，第1、8天静脉滴注；顺铂25 mg/m2，第1～3天静脉滴注；21 d为1个治疗周期。对照组(n=26)：接受紫杉醇/顺铂(TP)方案治疗，紫杉醇150 mg/m2，第1天静脉滴注；顺铂25 mg/m2，第1～3天静脉注；21 d为1个周期。两组患者均于2个周期后评价疗效。

1.2.2 疗效评定 按照世界卫生组织规定的实体瘤近期疗效评价标准，分为完全缓解(complete response，CR) 、部分缓解(partial response，PR)、疾病稳定(stable disease，SD)和疾病进展(progressive disease，PD)。其中，有效率(response rate，RR)为CR+PR例数/总例数×100%，以RR被认为是对吉西他滨敏感，反之则被认为耐药。

1.2.3 病理检测 (1)组织收集保存：收集患者外科手术切除的肺癌组织及癌旁的正常组织(癌旁的正常组织离癌缘5 cm以上)，取下后放入预先装有RNAlater(美国Ambion公司)溶液的试管中，于-4 ℃冰箱中过夜后放入-80 ℃冰箱中保存。(2)lncRNA的提取和定量：将标本从冰箱取出后静置于室温下解冻，在超净工作台中取出组织放入离心管称质量，控制组织质量在0.05～0.10 g。加入1 mL Trizol试剂(美国Invitrogen公司)并使用Handy pestle在冰盒上进行充分研磨。按说明书操作，提取总RNA后，利用Quant Script RT试剂盒(中国天根公司)进行逆转录，根据文献[6]报道的引物设计序列，利用荧光定量PCR试剂盒(美国Invitrogen公司)和实时荧光定量仪ABI7900HT(美国ABI公司)对lncRNA MVIH的表达进行荧光定量，采用2-△△CT值表示相对表达量。

2 结 果

2.1 lncRNA MVIH表达水平与临床病理因素的相关性 为了解不同病理类型、分化程度及临床分期的NSCLC组织中lncRNA MVIH的表达，采用荧光定量PCR的方法，对肺癌组织中lncRNA MVIH水平的表达进行检测。lncRNA MVIH表达水平与NSCLC患者的年龄、性别、KPS评分、临床分期、肿瘤分化程度等均无明显相关性(P>0.05)，见表1。

2.2 NSCLC组织中lncRNA MVIH的表达与GP、TP方案耐药的关系 观察组30例NSCLC患者中化疗敏感13例，化疗耐药者10例，耐药患者lncRNA MVIH的表达水平为3.61±0.50，明显高于敏感患者(2.08±0.27)，二者比较差异有统计学意义(P<0.05)。对照组26例NSCLC患者中化疗敏感9例，化疗耐药患者9例，耐药组lncRNA MVIH表达水平为2.94±0.31，与敏感患者(2.77±0.34)比较，差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

表1 lncRNA MVIH表达与NSCLC患者临床病理特征的关系

表2 两组患者lncRNA MVIH表达水平比较

a：P<0.01，b：P<0.05，与PD比较。

3 讨 论

吉西他滨属于细胞周期特异性抗代谢类药物，主要作用于DNA合成期的肿瘤细胞，具有抗瘤谱广、毒副反应轻等特点，1996年美国FDA正式批准其作为NSCLC的一线化疗药物[7]。但临床研究发现吉西他滨治疗晚期NSCLC的有效率仅为25%左右，联合用药的疗效也在50%左右[8]。这与肿瘤细胞对吉西他滨的耐药密切相关。吉西他滨在细胞内的代谢过程复杂，多种相关蛋白和因子均有参与，因而其耐药性的产生也是多因素共同作用的结果。随着生物信息学和新测序技术普及和快速发展，对于肺癌耐药的研究逐渐也从蛋白质拓展到RNA、DNA 水平扩展。

lncRNA是一类由于缺乏开放显著阅读框架导致缺乏蛋白编码能力的非编码RNA，lncRNA主要通过表观遗传学转录及转录后水平调控基因的表达和翻译，从而参与肿瘤生物学功能。lncRNA与人类肿瘤发生、发展关系密切，如lncRNA HOTAIR在肝癌等多种肿瘤细胞中的表达均出现显著升高，并且其表达水平的高低与患者的治疗及预后相关[9]。随着高通量测序技术的发展，研究者筛选得到了大量的与肿瘤生物特性相关的lncRNA，表明 lncRNA在肿瘤耐药中发挥了重要作用[10]。如lncRNA HOTTIP能够通过调控HOXA13的表达而促进胰腺癌细胞侵袭和获得性耐药[11]；lncRNA HOTAIR通过抑制p21蛋白合成而增强腺癌细胞的顺铂耐药性[12]。lncRNA MVIH最早是在肝癌组织检测发现；随后在多种癌细胞中均检测到MVIH的异常表达升高[13]。有研究指出NSCLC癌组织中MVIH表达显著增高，并且其表达水平与淋巴结转移呈正相关[6]。细胞实验表明，构建并转染特异性siRNA干扰lncRNA MVIH的表达后，能够显著抑制骨肉瘤细胞的增殖和侵袭[14]。上述研究表明，高表达MVIH可能作为NSCLC不良预后的生物学标志。

本研究结果证实，接受GP方案的患者出现化疗耐药，与lncRNA MVIH的表达水平明显相关，而接受TP方案的患者出现化疗耐药与lncRNA MVIH的表达水平无关，表明lncRNA MVIH的高表达与GP方案中吉西他滨的耐药性相关，而与顺铂无关，提示lncRNA MVIH可能作为预测吉西他滨疗耐药性的标志物。

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[3]任庆，熊锐华，田秀荣，等．吉西他滨联合顺铂治疗晚期膀胱癌的临床观察[J]．重庆医学，2014，43(34)：4660-4661．

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[5]Lei B,Xu SP,Liang XS,et al.Long non-coding RNA MVIH is associated with poor prognosis and malignant biological behavior in breast cancer[J].Tumour Biol,2016,37(4):5257-5264.

[6]Nie FQ,Zhu Q,Xu TP,et al.Long non-coding RNA MVIH indicates a poor prognosis for non-small cell lung cancer and promotes cell proliferation and invasion[J].Tumour Biol,2014,35(8):7587-7594.

[7]Thatcher N,Hirsch FR,Luft AV,et al.Necitumumab plus gemcitabine and cisplatin versus gemcitabine and cisplatin alone as first-line therapy in patients with stage Ⅳ squamous non-small-cell lung cancer (SQUIRE):an open-label,randomised,controlled phase 3 trial[J].Lancet Oncol,2015,16(7):763-774.

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[12]Liu Z,Sun M,Lu K,et al.The long noncoding RNA HOTAIR contributes to cisplatin resistance of human lung adenocarcinoma cells via downregualtion of p21(WAF1/CIP1) expression[J].PLoS One,2013,8(10):e77293.

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10.3969/j.issn.1671-8348.2017.07.026

无锡市医院管理中心科研项目(YGZXM14021)。 作者简介：王立文(1968-)，副教授，硕士研究生，主要从事外科教学和临床研究。△

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