试以“中药复方循证生物系统研究策略”阐述当归补血汤心脏保护的研究设想

闫奎坡，朱翠玲，孙彦琴，朱明军，高 原，李 彬

·临床医学论著·

试以“中药复方循证生物系统研究策略”阐述当归补血汤心脏保护的研究设想

闫奎坡，朱翠玲，孙彦琴，朱明军，高 原，李 彬

“中药复方循证生物系统研究策略(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是从中医古医籍、系统评价、质量控制、临床辨证治疗疗效评价、物质基础及其作用机制等多层次对中药复方进行研究，充分阐明中药复方的整体疗效学、疗效学机制及物质成分的一种研究方法。本研究提出假说，拟在CHCF-EB-BRS策略指导下阐明当归补血汤对心肌缺血的多方面疗效学研究、机制研究、物质基础的思路、设想及预期结果，从而指导实验的进一步开展，以期为中药复方研究提供一种思路。

中药复方；循证医学；生物系统研究策略；当归补血汤；心脏保护

Absract：Chinese herbal compound formula (CHCF) are widely used in clinic，with the development of evidence-based medicine，it has put forward a new challenge on Chinese herbal compound formula (CHCF).It has become a strategic planning to further research and develop CHCF，provide sufficient curative evidence，promote the modernization of traditional Chinese medicine，promote Chinese medicine culture，extend CHCF to the world.In this paper，the author put forward Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy (CHCF-EB-BRS)，which conducts multi-level study of CHCF from ancient medical books，system evaluation and analysis，quality control，clinical dialectical treatment curative effect evaluation，material basis and mechanism and so on.In order to reveal the material basis for the efficacy of CHCF and the related mechanism，finally to solve the bottleneck of the study of CHCF and provide a reference.CHCF clinical efficacy is verified multiply from ancient medical books，system evaluation and analysis，clinical study，furthermore，use a good quality control of CHCF for laboratory and clinical research.Various research levels of the strategy has been widely implemented in the basic and clinical research，but still lack of a systematic study of some CHCF.The proposed method is helpful to the further research on the development of traditional Chinese medicine.

“中药复方循证生物系统研究策略”(Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy，CHCF-EB-BRS)”是闫奎坡、朱翠玲、朱明军等提出的一种用于全面解释中药复方临床疗效的一种研究方法，具体研究方法见图1[1]。中药复方(Chinese herbal compound formula，CHCF)，作为中医临床治疗疾病的主要工具与手段，是中医用药的基本形式，其临床疗效经过几千年的实践已毋庸置疑[2-3]。循证医学(evidence-based medicine，EBM)的快速兴起及医疗模式的转换，使CHCF的广泛推广遇到瓶颈[1，3]，同时，中医药学属于复杂性科学(complexity science)[1]，中药复方的疗效究竟是由什么成分引起的？一直是中医药学术界长期存在的问题[2]，药效物质基础是中药复方研究的核心之一[2]。如何进一步开展CHCF的研究和开发，提供充足的疗效证据，促进中医药现代化，推广CHCF至全球，为全世界人民服务已成为当务之急。

CHCF-EB-BRS研究策略在此背景下产生的，本研究拟采用该研究策略阐明当归补血汤(Dangui-Buxue Tang，DBT)心脏保护的疗效机制及物质基础。

图1 CHCF-EB-BRS指导下CHCF质量控制及在体研究策略流程图

1 当归补血汤及其对冠心病的治疗简介

当归补血汤出自《内外伤辨惑论》，由李东垣(金元时代)创制，黄芪和当归两味药以5∶1组成的，具有益气生血活血功效[4-5]。冠心病属于中医“血瘀证”范畴，气虚血瘀是其根本的病理改变，因之而产生的益气活血法是治疗冠心病的指导原则。当归补血汤能增强心肌收缩力，降低心肌耗氧量，以防止或减轻心肌损伤[6]。通过抑制血小板的聚集，可预防血栓的形成；通过降低血液黏度，加快血流，可改善血液对全身组织器官的供应；当归补血汤具有降脂、抗氧化应激，抗动脉粥样硬化(atherosclerosis，AS)的作用[7]。

2 益气活血法(当归补血汤)的系统评价

冠心病属于中医胸痹之范畴，临床治疗多以行气活血、豁痰泄浊、益气养阴、温阳通痹为法。近年来根据气血相关理论，认为气虚血瘀是冠心病的主要病机，益气活血法是中医治疗冠心病的基本治则。以益气活血法为主治疗冠心病已取得一定进展。当归补血汤属于益气活血的经典方剂，文献研究发现益气活血法大部分方药均包含当归、黄芪两味中药，即使用了当归补血汤。目前的研究表明益气活血法可以治疗冠心病心绞痛、心肌梗死、冠心病心功能不全、严重的缺血型心肌病、冠脉支架术后再狭窄等，均发挥了重要的临床作用。

3 当归补血汤化学成分组成及质量控制

基础研究表明[6，8-10]，当归补血汤主要由当归补血汤多糖组分、当归补血汤非多糖组分、黄芪多糖、黄芪甲苷、黄芪异黄酮、黄芪异黄烷、黄芪皂苷、当归多糖、阿魏酸组成。同时还有更详细的研究当归补血汤所含化学成分。黄酮苷类包括毛蕊异黄酮、毛蕊异黄酮苷、芒柄花素、刺芒柄花素苷、9，10-二甲氧基紫檀烷3-O-B-葡萄糖苷、5，7-二羟基-4，-甲氧基异黄酮；氨基酸类包括苯丙氨酸和色氨酸；有机酸包括绿原酸、异绿原酸、香草酸、阿魏酸和壬二酸。但是这些研究并没有明确其活性成分。现研究认为[6，8-10]黄芪甲苷、毛蕊异黄酮、芒柄花素、阿魏酸、藁本内酯是当归补血汤的主要活性成分，是目前当归补血汤的主要质量控制指标。

中药汤剂延续千年，本研究采用汤剂作为质量控制(quality control，QC)标准。首先是药物的选择，经药品专家鉴定，药物按照经典方剂的比例进行搭配，药物煎煮之前的处理、浸泡、煎煮时间等，当归补血汤可依据文献进行[2]，最终得到汤剂或者制备冻干粉等。之后对药物进一步处理，并对其质控成分进行定性和定量的检测。中医药质量控制在保证中药的质量，达到预期的疗效，确保药效及安全方面发挥了关键的作用。

4 BAP指导当归补血汤在体、离体研究

当归补血汤的心脏保护作用研究按照图1的流程图(包括了当归补血汤的QC部分)进行。CHCF-EB-BRS应用的3个主要要点是：方剂成分在血中的测量、吸收成分与母方疗效的比较、吸收成分剂量等于母方中的量[2]。方剂ABC在血中的定量：一般在研究方剂整体药效的同时，利用UPLC、LC-MS-MS等仪器同步测定口服方剂后血中吸收的化学成分，明确方剂吸收入体内成分是BAP研究的前提与指导思想；吸收成分剂量等于母方中的量，该要点是CHCF-EB-BRS指导DBT在体研究的关键，由图1可以看出，DBT质量控制的5种成分对急性缺血大鼠的剂量等于DBT母方的含量，只有这样才能充分体现剂量和母方含量的关系；吸收成分的疗效最终和母方疗效进行比较，因为只有通过比较才能发现吸收成分疗效是否可以代表母方的疗效。DBT及其ABC心脏保护作用的在体研究，选择经典的冠脉结扎导致急性缺血的心肌梗死模型，同时选用公认的整体和组织水平疗效评估(如大鼠状态、TTC标记心肌梗死面积等)、分子层面的疗效评估(如炎症因子、凋亡指标、mRNA等)，做到多层面炎症ABC和母方的疗效。

CHCF-EB-BRS、指导DBT离体研究策略，笔者仅以DBT及其活性成分对大鼠原代细胞的干预予以说明。由于传统中药复方汤剂中重金属、其他药物污染、电解质等造成的粗制剂，直接进行细胞干预，即使杀毒、灭菌后可能导致假阳性或假阴性结果[2]。按照BAP策略，能够扬长避短，药效学物质明确后，基本代表母方的疗效；离体实验分析的药物成分得到精简；药效学物质是吸收入体内的成分(药效成分的直接证据)；不存在内源与外源性干扰。同时还可以参考血药浓度范围进行研究，亦可采用ABC疗效和血清药效学比较的模式研究。

5 结 语

CHCF作为中医临床治疗疾病的主要工具与手段，是中医用药的基本形式，其临床疗效经过几千年的实践已毋庸置疑。但是，在现代医学科研水平如此高度发达的今天，仍以“君臣佐使、四气五味、升降沉浮”等抽象的传统中医理论，不从方剂产生疗效的物质基础、作用机制来解释方剂及其配伍规律，就很难被现代医学所接受[2]。CHCF的“药效物质基础不明确”正是中医药现代化及中医药走向世界亟待解决的关键问题和制约瓶颈[2]。因为CHCF的药效物质不清楚，难以制订科学的质控标准，难以获得可重复疗效，存在用药安全隐患。虽个别CHCF初步阐明药效物质，但研究还不够深入，十万个方剂的药效物质还是待研究的广阔领域。如何揭开CHCF药效学物质的神秘面纱，让中医药为全世界服务，成为所有中医药人的一个愿望。为此，笔者作为工作在中医院一线的临床医师在全力研究CHCF的过程中，结合自己的临床及研究历程，同时参考了国内外大量的研究报告，深入学习了流行病学、循证医学、分子生物学、实验动物系、中药药理学等多门课程，提出CHCF-EB-BRS策略，该策略从CHCF的古医籍挖掘、现代医学的循证评价到直接的临床研究，确立某个复方的临床疗效，继之开展多项基础研究，从动物研究到离体组织及细胞层面的研究，从而验证该方的临床疗效及疗效基础物质。

CHCF-EB-BRS研究CHCF的策略正是在多年来复方研究的基础上，吸取了中药基本理论、药理学、药物制剂学、化学、分子生物学等研究成果，逐步发展起来的，已经初步解决了部分中药复方的药效学物质基础，对其结构、含量进行了初步阐明，目前该策略正指导若干研究进行中。

致谢：感谢我院2012级研究生李露露、丰俊鹏、左亚东、轩静静在文献检索方面的协助。

[1] 闫奎坡，朱翠玲，朱明军，等.“中药复方循证生物系统研究策略”思路探索[J].中国实验方剂学杂志，2016(9)：218-222.

[2] Cheung F.TCM：Made in China[J].Nature，2011，480(7378)：S82-S83.

[3] 闫奎坡.冠心Ⅱ号心脏保护作用的物质基础及其舒张大鼠胸主动脉机制的研究[D].长沙：中南大学，2012.

[4] Zhang Y，Hu G，Lin HC，et al.Radix astragali extract promotes angiogenesis involving vascular endothelial.growth factor receptor-related phosphatidylinositol 3-Kinase/Akt-dependent pathway in human endothelial cells[J].Phytother Res，2009，23：1205-1213.

[5] Yang M，Chan GC，Deng R，et al.An herbal decoction of Radix astragali and Radix angelicae sinensis promotes hematopoiesis and thrombopoiesis[J].J Ethnopharmacol，2009，124(1)：87-97.

[6] 张三印，冯蓓，杨苗.当归补血汤抑制与肿瘤共培养血管内皮细胞的增殖及其分子机制[J].中国实验方剂学杂志，2013，19(2)：163-167.

[7] 马文静，孙璐，孙娟，等.当归补血汤及当归黄芪提取部位组合物对 P38MAPK信号转导通路的研究[J].中西医结合心脑血管病杂志，2009，7(7)：807-808.

[8] Dong TT，Zhao KJ，Gao QT，et al.Chemical and biological assessment of a Chinese herbal decoction containing Radix Astragali and Radix Angelicae Sinensis：determination of drug ratio in having optimized properties[J].J Agric Food Chem，2006，54(7)：2767-2774.

[9] Song ZH，Ji ZN，Lo CK，et al.Chemical and biological assessment of a traditional chinese herbal decoction prepared from Radix Astragali and Radix Angelicae Sinensis：orthogonal array design to optimize the extraction of chemical constituents[J].Planta Med，2004，70(12)：1222-1227.

[10] Sheng LH，Li SL，Kong L，et al.Separation of compounds interacting with liposome membrane in combined prescription of traditional Chinese medicines with immobilized liposome chromatography[J].J Pharm Biomed Anal，2005，38(2)：216-224.

(本文编辑王雅洁)

Assumption on the Cardioprotection of Danggui Buxue Decoction Based on Chinese Herbal Compound Formula Evidence-Based Biosystem Research Strategy

Yan Kuipo，Zhu Cuiling，Sun Yanqin，Zhu Mingjun，Gao Yuan，Li Bin

The First Affiliated Hosipital，Henan University of Traditional Chinese Medicine，Zhengzhou 450008，Henan，China

Chinese herbal compound formula；evidence-based medicine；biosystem research strategy；Danggui Buxue decoction；cardioprotection

国家自然科学基金青年基金(No.81303073，81503419，81503435)；河南中医学院省属科研业务专项(No.2014KYYWF-YQ12)；河南中医学院一附院院内博士项目(No.2012KJ32)；河南省科技攻关重点项目(No.112102310317)；河南省高校科技创新团队支持计划(No.13IRTSTHN012)；河南省中医药防治心血管疾病创新型科技团队(No.C20130050)；河南省科技攻关计划重点项目(No.142102310289)

河南中医学院第一附属医院(郑州 450008)

朱翠玲，E-mail：zhudaifu666@hotmail.com

R289.5

A

10.3969/j.issn.1672-1349.2017.03.002

1672-1349(2017)03-0264-04

2016-08-20)

引用信息：闫奎坡，朱翠玲，孙彦琴，等.试以“中药复方循证生物系统研究策略”阐述当归补血汤心脏保护的研究设想[J].中西医结合心脑血管病杂志，2017，15(3)：264-267.