杂交兰的组织培养与快繁技术

胡 蕾，申 婷

(金华职业技术学院，浙江 金华 321017)

杂交兰的组织培养与快繁技术

胡 蕾，申 婷

(金华职业技术学院，浙江 金华 321017)

以杂交兰的茎尖为外植体进行离体培养，探讨杂交兰的原球茎的诱导、增殖、分化、生根培养，以及练苗移栽等一系列技术措施。结果表明，原球茎诱导的适宜培养基为Hyponex No.1(花宝1号)+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球茎增殖的适宜培养基为花宝1号+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA0.1 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；原球茎分化的适宜培养基为1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA0.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1；生根培养基以1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA1.5 mg·L-1+AC 2.0 g·L-1+香蕉泥20 g·L-1+土豆泥10 g·L-1为佳，移栽基质选用泥炭土∶珍珠岩3∶1成活率高。

杂交兰； 组织培养； 原球茎

杂交兰是国兰与大花蕙兰的杂交品种，既有国兰的幽香与雅致，又有大花蕙兰的花大、色艳，且体积较小，生育期只有2年，深受消费者喜爱，市场前景广阔。但杂交兰种子在自然条件下繁殖困难，而传统的分株繁殖的繁殖系数低，难以满足市场需要，故通过组织培养的方法来达到快繁的目的。本文对杂交兰的组培与快繁进行研究，为杂交兰的规模化生产提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 材料

取杂交兰品种黄金小神童的茎尖为试验材料。

1.2 方法

1.2.1 外植体预处理

从亲本植株上选取长势好、叶片尚未展开的新生侧芽，取中上部6～13 cm长的侧芽，切下新芽，除去肉质根与叶，削去芽尖。流水冲洗30 min后，用1%中性洗涤剂浸泡5 min，再在流水下冲洗30 min后，用吸水纸吸干水分，置超净工作台上。无菌条件下对外植体进行严格的消毒处理。浸入75%酒精中30 s→无菌水冲洗2次→84消毒液浸泡15 min→无菌水冲洗2次→截取3～6 cm茎尖→84消毒液浸泡8 min→无菌水冲洗5～6次→无菌滤纸吸干水分→切取2～3 mm的茎尖，分别接种到诱导培养基、增殖培养基、分化培养基上，置于室温(25±1)℃、光照强度1 500～2 000 lx的培养室进行培养。

1.2.2 基本培养基

杂交兰组培主要以MS、1/2MS、Hyponex No.1(花宝1号)培养基为基础培养基，附加活性炭0.3%，蔗糖3%，琼脂0.8%，香蕉泥2%，土豆泥1%，pH值5.5～5.8。不同培养阶段附加不同种类和浓度的植物激素，然后配置分装，在121 ℃条件下灭菌30 min。

1.2.3 杂交兰原球茎诱导培养基

采用4种杂交兰诱导培养基：(1)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(2)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(3)花宝1号+6-BA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1；(4)花宝1号+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1。接种后每10 d换1次培养基，接种20 d左右发现有大量的原球茎产生。30 d后统计原球茎数目，以及原球茎的生长状况。

1.2.4 杂交兰原球茎增殖培养基

采用9种杂交兰诱导培养基对杂交兰原球茎增殖培养：(5)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(6)1/2MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(7)1/2MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(8)MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(9)MS+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(10)MS+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(11)花宝1号+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(12)花宝1号+6-BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(13)花宝1号+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1。将初代培养的原球茎接种到新的培养基中进行增殖培养，半个月继代1次，连续继代3次，统计增殖数。

1.2.5 杂交兰原球茎分化培养基

采用9种杂交兰诱导培养基对原球茎分化进行研究：(14)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(15)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(16)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(17)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(18)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(19)1/2MS+6-BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(20)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(21)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1；(22)1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1。

1.2.6 丛生芽生根培养基

采用4种杂交兰诱导培养基对丛生芽生根进行研究：(23)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1；(24)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1；(25)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1；(26)1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1。将分化培养基中的小芽接种到4种生根培养基中，1个月后统计生根率与生长状态。

1.3 炼苗移栽

当小苗长到5 cm左右时，打开瓶盖，练苗3 d，取出小苗，洗净根部的培养基后，将根部浸入0.2%多菌灵液3 min，然后取出晾干后定植于苔鲜、泥炭土∶珍珠岩3∶1的育苗盘中，放置阴凉通风处，于温度25 ℃、湿度80%左右温室中培养。苔鲜提前用0.2%多菌灵液消毒。

2 结果与分析

2.1 原球茎诱导

从表1可以看出，外植体在4号培养基分化的原球茎最多，诱导率可达120.0%，而且在生长过程中基本无失绿和死亡现象。1号培养基最差，诱导率只有43.3%。因此，4号培养基有利于茎尖的诱导。

表1 不同培养基对杂交兰原球茎诱导的影响

2.2 原球茎增殖

不同的培养基在相同的时间內，杂交兰原球茎都有增殖，但增殖倍数不同。从表2中可以看出，13号是杂交兰原球茎增殖的最佳培养基。

表2 不同培养基对杂交兰原球茎分化的影响

2.3 原球茎分化

将杂交兰原球茎接种到分化培养基中，可见原球茎增大变绿，15 d后各培养基均有丛生芽出现，以后小芽逐渐伸长，数量逐渐增多。培养30 d后，分别统计不定芽数量。从表3可以看出，原球茎在22号培养基中分化效果最佳。

表3 不同培养基对杂交兰原球茎增殖的影响

2.4 丛生芽生根

从表4可以看出，再生苗在4种培养基中生根均达到89%以上，但通过不同培养基比较，发现26号培养基最佳，生根快而且苗长势好。

表4 不同培养基对丛生芽生根的影响

2.5 炼苗移栽

缓苗后(2周左右)用花宝系列肥结合浇水进行叶面施肥，在泥炭土∶珍珠岩3∶1的基质上1个月成活率可达90%以上，且长势良好。

3 小结与讨论

杂交兰茎尖在培养基花宝1号+6-BA 2.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1上可诱导出原球茎，诱导率可达120%；原球茎增殖培养基为花宝1号+6-BA 3.0 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1时增殖倍数最高，可增殖4.3倍；原球茎分化培养基为1/2MS+6-BA 1.5 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1时可分化形成大量的丛生芽；促进苗生长生根的最佳培养基是1/2MS+6-BA 0.5 mg·L-1+NAA 1.5 mg·L-1，生根率达到100%；小苗在泥炭土∶珍珠岩3∶1的基质上生长良好，成活率达90%以上。

通过对杂交兰组织培养技术的研究，发现适量的加入少量活性炭和多次转接可解决外植体的褐变问题。另外，原球茎切块细小、接种稀疏不利于原球茎的生长，切块大而密集的繁殖快，且长势好。

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[4] 宋微，潘静霞，吴静. 2种蝴蝶兰组织培养快繁技术[J]. 江苏农业科学，2014，42(6)：55-56.

(责任编辑：张瑞麟)

2016-09-14

胡 蕾，高级实验师，从事农学工作，E-mail：550663034@qq.com。

10.16178/j.issn.0528-9017.20170223

S682.31

B

0528-9017(2017)02-0259-02

文献著录格式：胡蕾，申婷. 杂交兰的组织培养与快繁技术[J].浙江农业科学，2017，58(2)：259-260，264.