TACE对肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达及其预后的影响

张雄杰 丁佑铭

TACE对肝癌组织中MMP-2和MMP-9表达及其预后的影响

张雄杰 丁佑铭

目的 探讨TACE对肝癌MMP-2、MMP-9的表达及预后的影响。方法 选取肝癌患者80例，随机分为两组，分别为术前TACE组、直接手术组。采用酶联免疫吸附法检测两组患者术前静脉血中MMP-2、MMP-9的水平；采用免疫组织化学法检测两组患者术中所取肝癌及癌旁组织中MMP-2、MMP-9的表达；比较两组患者术后1、2、3年的生存情况，并分析其影响因素。结果 直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9水平明显高于术前TACE组患者，差异有统计学意义(P<0.05)；两组肝癌组织中MMP-2、MMP-9表达阳性率均较癌旁组织高，且直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9的阳性率明显高于术前TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)；术前TACE组1、2、3年生存率及中位生存期明显优于直接手术组，两组比较差异有统计学意义(P<0.05)；Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响患者生存期的因素(P<0.05)；与患者性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关(P>0.05)。结论 TACE术能够降低肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达，延长患者术后生存期，且患者生存期的长短受Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、出现门静脉癌栓以及行TACE术的影响，MMP-2、MMP-9可能成为评价肝癌治疗效果及预后的新的指标。

TACE；肝癌；MMP-2；MMP-9

(ThePracticalJournalofCancer,2017,32:030～033)

数据显示，每年死于肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)的患者超过60万[1]。除了手术治疗以外，近几年，动脉导管栓塞术(transcatheter arterial chemoembo lization,TACE)是治疗HCC的新方法[2]。基质金属蛋白酶-2、9(matrixmetalloproteinase-2,9,MMP-2,MMP-9)参与HCC的组侵袭转移[3]。本文通过对进行TACE术后肝癌组织中MMP-2、MMP-9进行检测，分析TACE与MMP-2、MMP-9的表达及肝癌预后的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

选取2014 年1 月至2015 年1 月在我院住院治疗的HCC患者80例作为实验组，入组患者均可进行手术切除，经病理确诊，随机分为术前TACE组、直接手术组，每组40例。术前TACE组包括男性20例，女性20例，年龄31～81岁，平均(51.23±2.63)岁。直接手术组包括男性20例，女性20例，年龄30～78岁，平均(49.86±1.52)岁。入组患者的性别、年龄等方面比较，差异无统计学意义(P>0.05)。

1.2 TACE治疗原发性肝癌的方法

Seldinger 技术穿刺右股动脉，行腹腔干、肠系膜上动脉造影。采用CMF方案经微导管于肿瘤供血动脉局部灌注化疗，具体：5-氟尿嘧啶750 mg、丝裂霉素10 mg、顺铂40 mg，后用碘油-吡柔比星乳剂栓塞填充病灶。

1.3 实验方法

1.3.1 酶联免疫吸附法检测两组患者血液中MMP-2、MMP-9的表达 患者均于第1 次TACE 术前1天、术后1天、1周、1个月，清晨空腹肘前静脉取血3 ml，收集于无任何抗凝剂的试管中静置15 min～1 h，以2 500 r/min 离心15 min,血清保存于-40 ℃待测。

计算板孔数；稀释标准品；加样；配液；洗涤；显色；终止；450 nm波长处测量吸光值。

1.3.2 免疫组织化学法检测两组患者组织中MMP-2、MMP-9的表达 标本用福尔马林液固定；脱水、透明；浸蜡、包埋；切片、贴片、烤片；脱蜡、脱水；高压热修复；3%过氧化氢阻断；山羊血清封闭；加一抗50 μl静置1 h；加二抗50 μl静置10 min；显色；终止；复染、分化；脱水、透明；封片；观察。

1.4 判断标准

MMP-2、MMP-9阳性：细胞核不染色，胞膜或胞质

出现棕色或棕黄色颗粒，染色细胞数：阴性(-)：≤10%；弱阳性(+)：11%～25%；阳性(++)：26%～50%；强阳性(+++)：>50%。

1.5 评价指标

术前TACE组患者的生存时间自首次接受TACE第1天为起点，直接手术组以手术第1天为起点，比较两组患者术后1、2、3年的生存率。

选定年龄、性别、AFP、Child-Pugh分级、肿瘤大小、肿瘤数目、门静脉癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等变量，分析影响生存期的因素。

1.6 统计学分析

应用SPSS 17.0统计学软件进行数据处理，计数资料用χ2检验，计量资料用方差分析，生存期比较采用Kaplan-Meier法统计，影响生存期的因素采用Cox回归模型分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 酶联免疫吸附法检测两组患者血液中MMP-2、MMP-9的表达

采用酶联免疫吸附法对两组患者MMP-2、MMP-9的水平进行检测，结果发现，直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9水平明显高于术前接受TACE治疗的患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组患者血液中MMP-2、MMP-9的表达 比较

注：*为与直接手术组比较，P<0.05。

2.2 免疫组织化学法检测两组患者组织中MMP-2、MMP-9的表达

采用免疫组织化学法对直接手术组、术前TACE组患者进行MMP-2、MMP-9的检测，结果发现，MMP-2、MMP-9镜下见棕黄色或黄色颗粒表达于胞膜或胞质。直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9阳性率分别为87.5%、85.0%；癌旁组织MMP-2、MMP-9阳性率为10.0%、12.5%；术前TACE组肝癌组织中MMP-2、MMP-9阳性率为62.5%、57.5%；癌旁组织MMP-2、MMP-9阳性率7.5%、10.0%。两组肝癌组织MMP-2、MMP-9阳性率高于癌旁组织，直接手术组肝癌组织MMP-2、MMP-9阳性率高于术前TACE组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 两组中MMP-2、MMP-9的表达情况/例

注：*为直接手术组肝癌组织与癌旁组织比较，P<0.05；#为术前TACE组肝癌组织与癌旁组织比较，P<0.05；△为两组肝癌组织间比较，P<0.05。

2.3 两组患者术后生存期及影响因素的分析

术前TACE组术后1、2、3年生存率为94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0个月。直接手术组术后1、2、3年生存率为88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期为26.0个月，差异有统计学意义(P<0.05)。

采用Cox回归模型，从两组患者的性别、年龄、AFP、Child-Pugh分级、肿瘤大小、肿瘤数目、门静脉癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，与患者的生存期进行分析，结果发现，Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响患者生存期的因素(P<0.05)；与性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关(P>0.05)。

3 讨论

肝细胞癌作为常见的恶性肿瘤，发病率逐年上升，居全世界第五位，死亡率第二位。对于HCC的治疗，手术切除仍是首选，但由于其发病隐匿，患者往往就诊较晚，发现时已至中晚期，丧失手术机会，仅有不足20%的患者可以直接手术切除[4]。

临床上，对于HCC的治疗方案很多，对于早期患者，采用手术切除或者射频消融疗效较好，有报道提示，对于能够进行手术切除的HCC患者，其5年生存率可达50%。而对于不能手术切除的中晚期患者，TACE是首选[5]。TACE结合了TAE 和局部化疗，能够选择性阻塞肝脏供血动脉，减少90%的肿瘤血供，但对正常的肝脏组织血液供应影响不大，仅为35%。除此之外，TACE局部药物浓度很高，延长药物作用时间，降低化疗药的全身毒性，化疗相关的不良反应明显减少[6]。MMPs的表达与肿瘤的恶性程度相关，MMP-2、MMP-9参与肿瘤的侵袭转移[7]。

本研究选取在我院住院的HCC患者作为入组对象，随机分为术前TACE组与直接手术组，采用酶联免疫吸附法对两组患者进行手术前静脉血中MMP-2、MMP-9的水平进行检测，结果发现，直接手术组患者血液中MMP-2、MMP-9明显高于术前接受TACE治疗的患者，差异有统计学意义，这提示，对于HCC患者，在手术前接受TACE治疗，能够明显降低MMP-2、MMP-9的水平，降低肿瘤侵袭转移的可能。

对两组患者手术过程中取肝癌及癌旁组织进行免疫组化检测，结果发现，MMP-2、MMP-9镜下见棕黄色或黄色颗粒表达于胞膜或胞质。直接手术组肝癌组织中MMP-2、MMP-9阳性率87.5%、85.0%；术前TACE组肝癌组织MMP-2、MMP-9阳性率62.5%、57.5%；肝癌组织MMP-2、MMP-9阳性率高于癌旁组织，直接手术组肝癌组织MMP-2、MMP-9阳性率高于术前TACE组。这表明，TACE术能够降低肝癌组织中MMP-2、MMP-9的表达，在一定程度上能够起到治疗HCC的目的。

术前TACE组12、24、36 个月生存率94.4%、69.4%、50.9%，中位生存期37.0个月。直接手术组12、24、36 个月生存率88.6%%、60.0%、25.7%，中位生存期26.0个月，说明经过术前TACE治疗后，患者的生存率提高，生存期明显延长。从两组患者的性别、年龄、AFP、Child-Pugh分级、肿瘤大小、肿瘤数目、门静脉癌栓、MMP-2、MMP-9、是否行TACE等方面，与患者生存期的关系进行分析，结果发现，Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、门静脉癌栓、行TACE术均是影响生存期的因素，与性别、年龄、AFP、肿瘤大小、肿瘤数目无关。有研究发现，对HCC患者与手术治疗前行2次以上TACE治疗，其5年生存率达51.0%，5 年无病生存期为66.4个月；术前行1次TACE者其5年生存率为35.5%，5 年无病生存期为22.5个月；手术前未行TACE者生存率仅为21.4%，5 年无病生存期为12.5个月[8]。术前、术后均行TACE对HCC患者生存期的延长更明显[9]。既往有病例分析显示，肿瘤大小、肿瘤位置、肝功、术前TACE是影响患者术后生存期的重要因素[10]。上述国内外研究与本实验结果相一致。

综上所述，TACE术能够降低肝癌患者血液及组织中MMP-2、MMP-9的表达，延长患者术后生存期，且患者生存期的长短受Child-Pugh分级、MMP-2、MMP-9的表达、出现门静脉癌栓以及行TACE术的影响，MMP-2、MMP-9可能成为评价肝癌治疗效果及预后的新的指标，而TACE值得在临床上进一步推广应用。

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(编辑：吴小红)

Effect of TACE on MMP-2 and MMP-9 Expression and Prognosis of Liver Cancer

ZHANGXiongjie,DINGYouming.

People'sHospitalofWuhanUniversity,Wuhan,430000

Objective To study the effect of TACE on the expression of MMP-2,MMP-9 and prognosis of hepatocellular carcinoma.Methods 80 cases of hepatocellular carcinoma were randomly divided into 2 groups,respectively before operation in group TACE,the direct operation group.Using enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of the 2 groups before blood levels of MMP-2,MMP-9;immunohistochemistry was used to detect the expression of MMP-2 in hepatocellular carcinoma and adjacent tissues,MMP-9 taken from the patients in the 2 groups;the survival time of 12,24,36 months after operation in the 2 groups were compared,and influencing factors were analyzed.Results The enzyme-linked immunosorbent assay was used to detect the 2 groups of patients with venous blood MMP-2,MMP-9 levels,direct operation group in blood of patients with MMP-2,MMP-9 was significantly higher than that before surgery in patients receiving TACE treatment,the difference was statistically significant(P<0.05);Using immunohistochemical method in the 2 groups of patients with MMP-2,the expression of MMP-9 in tissues were detected,the positive expression rates of the 2 groups,the liver tissue MMP-2,MMP-9 were lower than that of paracancerous tissue increased,the positive rate and direct operation group of MMP-2,MMP-9 in hepatocellular carcinoma tissues was significantly higher than that before operation in group TACE,with statistical significant difference(P<0.05);Preoperative TACE group 12,24,and 36 months survival rate and median survival period was significantly higher than that of direct operation group,there was significant difference between the 2 groups(P<0.05);grade Child-Pugh,MMP-2,MMP-9 expression,portal vein tumor thrombus,TACE patients were survival factors(P<0.05);the number and gender,age,AFP,tumor size,tumor(P>0.05).Conclusion TACE can reduce the expression of MMP-2 in blood and tissues of patients with hepatocellular carcinoma,MMP-9,survival prolonging postoperative patients,and the length of survival by Child-Pugh classification,MMP-2,MMP-9 expression,tumor thrombus in portal vein and TACE effect,MMP-2,MMP-9 might be a new index to evaluate the treatment of liver cancer effect and prognosis.

TACE;Hepatocellular carcinoma;MMP-2；MMP-9

430000 武汉大学人民医院(张雄杰，丁佑铭)；431600 汉川市人民医院(张雄杰)

丁佑铭

10.3969/j.issn.1001-5930.2017.01.010

R735.7

A

1001-5930(2017)01-0030-04

2016-02-17

2016-09-12)