西藏鸡沙门菌病流行情况调查

元振杰 ， 王 燕 ， 马弘财 ， 夏晨阳 ， 吴金措姆 ， 四朗玉珍 ， 班 旦 ， 格桑卓嘎

(西藏自治区农牧科学院畜牧兽医研究所， 西藏 拉萨 850009)

沙门菌病是目前危害养禽业最常见的细菌疫病之一[1]，在公共卫生学上有着重要的意义。随着进藏旅游的盛行，从而带动高原藏鸡、藏蛋等需求增加，近年来西藏养禽业在养殖规模和数量上得到了快速的发展，随之而来鸡病发生也更加复杂化。由于有良好的疫苗和完善的免疫程序，目前病毒性传染病基本得到了控制，而细菌性疾病尤其是鸡沙门菌病呈现出扩张流行的趋势[2]。为了解鸡沙门菌在西藏流行情况，项目组选择在养禽区拉萨市5个县(区)12个养殖场不同品种不同来源的鸡进行采样分析，为临床上科学防治本病提供一定的依据。

1 试验材料

1.1 主要仪器 恒温培养箱，超净工作台，全自动高压蒸气灭菌锅，电热恒温干燥箱，光学显微镜等

1.2 主要试剂 沙门菌快速鉴别培养基、麦康凯培养基、 LB培养基、伊红美蓝培养基、BS琼脂培养基(均购自青岛海博生物公司)；沙门菌生化编码微量鉴定管(购自杭州天和微生物试剂有限公司)；沙门菌A-F属诊断血清(购自兰州生物制品研究所)。

1.3 病理样品 2015年4月至2016年8月，来自拉萨市城关区、曲水县、达孜县、墨竹工卡县、堆龙德庆县12个集约化养鸡场，雏鸡泄殖腔拭子、成鸡泄殖腔拭子和病死鸡病变组织。

1.4 实验鸡 来自西藏农科院畜科所曲尼帕拉萨白鸡良种繁育基地。

2 试验方法

2.1 细菌分离培养 采用无菌操作取待检病料分别接种于沙门菌快速鉴别平板，37 ℃培养18～24 h后，观察结果。挑取阳性菌株分别接种于麦康凯平板、伊红美蓝平板、BS琼脂平板，37 ℃培养16～18 h，根据菌落生长特性进行初步判断。

2.2 细菌染色镜检 分别挑取单个菌落，固定并进行革兰染色镜检，染色镜检方法按照常规方法进行。

2.3 生化鉴定 根据《伯杰氏细菌鉴定手册》第九版[3]和沙门菌编码生化鉴定管说明书要求，挑取培养好的新鲜菌落分别接种于赖氨酸脱羧酶、靛基质、尿素酶、氰化钾、硫化氢、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、卫矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、阿拉伯糖生化鉴定管，37 ℃培养16～24 h[9]，观察并记录结果。

2.4 血清型鉴定 接照沙门菌属诊断血清说明书的实验方法进行，同时设生理盐水和标准菌株对照组，依次用A(O2)、B(O4)、C1(O7)、C2(O8)、D(O9)、E(O3)的O血清做玻片凝集试验，确定血清群。再用该群的H因子凝集试验，确定其H抗原。

2.5 动物致病性试验 将252只7日健康雏鸡(拉萨白鸡)随机分为42组，每组6只，其中40组分别接种分离培养好的40株沙门菌菌液于皮下，每只接种菌液0.2 mL(3×109CUF/mL)，1组接种沙门菌标准株菌液(3×109CUF/mL)，1组接种生理盐水对照[4]。接种后，每隔1 h，观察记录鸡的情况。

3 结果

3.1 细菌分离染色镜检 从所采集的699份病理样品中，共分离出687株细菌，通过鉴别培养基鉴定，符合沙门菌生长特征的有421株。挑取单个菌落进行革兰染色镜检，均符合沙门菌特征。

图1 鸡源性沙门菌革兰染色镜检形态 (10×100)

3.2 生化鉴定 对所分离出的421株可疑沙门菌进行赖氨酸脱羧酶、靛基质、尿素酶、氰化钾、硫化氢、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、卫矛醇、ONPG及葡萄糖、乳糖、蔗糖、麦芽糖、阿拉伯糖试验[3-4]后，确定有403株符合沙门菌的要求，阳性率为57.65%(403/699)。其中麦芽糖发酵阳性的有127株，判定为鸡伤寒沙门菌，占31.51%(127/403)；麦芽糖发酵阴性的有276株，判定为鸡白痢沙门菌，占68.49%(276/403)。

表1 鸡源性沙门菌分离鉴定结果

3.3 血清型鉴定 在所分离的沙门菌中，随机抽取100株进行试验。100株菌共属于5个血清群，其中A群(O2)12株，C1群(O7)27株，C2群(O8)9株，D群(O9)52株，优势血清群为D群(52%)，其次为C1群(27%)。

表2 沙门菌的血清型

3.4 动物试验 对随机抽取的40株菌接种于40组雏鸡，约6 h左右陆续开始发病，表现精神沉郁，不食或少食，8 h后开始表现腹泻，拉白色粪便，表明试验的40株菌为致病性沙门菌。接种后发病率达100%，生理盐水对照组感染率为0%。

4 讨论

鸡沙门菌病是鸡常见的传染病之一，可分为鸡白痢、鸡伤寒、鸡副伤寒3种，对养禽业危害极大[1]。随着高原畜禽养殖业的发展，沙门菌对种鸡受精率、种蛋孵化率、雏鸡存活率、饲料利用率和商品蛋的品质等[1]方面问题日益突显，如何满足市场对高原禽类产品的急切需求已经是当前西藏养禽业面临的主要问题。因此，如何有效的预防并控制该病，也成为当前西藏养禽业所面临的主要问题。

本试验通过对拉萨市养殖的不同来源、不同品种的鸡进行调查，由表1可以看出，西藏本土藏鸡和拉萨白鸡沙门菌感染率较高，分别为83.05%(147/177)和73.41%(127/173)；而从西藏境外引进的鸡苗如海蓝粉、海蓝白、罗曼和三黄鸡其感染率分别为41.07%(23/56)、33.05%(39/118)、28.57%(16/56)、42.86%(51/119)；这可能与西藏养禽业过去较省外发展滞后，近几年来西藏养禽业的快速发展，禽类饲养管理技术和禽病的控制净化[5]不能跟上西藏养禽业的发展节奏有关。因此，应加强禽类饲养环境和饲养用具的卫生消毒，改变过去粗放的饲养管理方式，种禽场要积极的进行禽沙门菌的净化，从源头控制禽沙门菌的传播。

[1] 甘孟侯.中国禽病学[M]．北京：中国农业出版社，1999．

[2] 王亮，张元鹏，张荣武，等．鸡源性肠炎沙门氏菌的流行病学调查[J].中国人兽共患病学报，2011，27(5)：455-458.

[3] 布坎南R E,吉本斯N E.伯杰细菌鉴定手册.第8版[M].中国科学院微生物研究所译.北京:科学出版社.1984：392-442.

[4] 马兴树.禽传染病实验诊断技术[M].北京：化学工业出版社，2006：106-112.

[5] 顾国强等.种鸡场鸡白痢净化综合措施[J].中国禽业导刊，2001，32(10)：30.