适宜生产金针菇液体菌种的菌株培养及筛选研究

□ 徐 磊 南阳理工学院生物与化学工程学院

1 实验材料及方法

1.1 实验材料

本次实验所采取的菌种为金针菇液体菌种，菌种共分为五种，分别是金 2153、杂 19、 金 21、 杂 8801、 杂908，这五种金针菇液体菌种均是从菌种实验室中获得的。为了验证这五种菌种在不同培养基中的培养情况，需要进行麸皮水解，通过将适当麸皮经水调和而形成浆糊状，并加入水进行煮沸10 min，利用四层纱布对其进行过滤来获得。在麸皮、马铃薯汁、玉米粉浆制作完毕后，在PDA培养基中掺入浓度为0.08%的K2HPO4、浓度为0.05%的硫酸镁、0.3%的酵母膏及1%的玉米粉。经高压蒸汽对PDA培养基进行灭菌处理后进行斜面摆放。而摇瓶培养基则是以马铃薯、玉米粉及麸皮作为主要原料并掺入相应的生长因子制作而成。

1.2 实验方法

本次实验方法采用菌球计数法，取1 mL的培养液进行10 mL的稀释，然后在稀释后的培养液中取1 mL放入平皿容器中，在容器的下部置入黑色的背景纸进行计数。取100 mL的培养液，利用80目的筛布对培养液进行过滤，待水变清以后，将菌丝球放入定性滤纸当中，然后放入60 ℃的干燥箱中进行烘干，直至达到恒重时对其进行称重。对糖分与pH值的测定分别采用WYZ-4型糖度计与SDJ-1型进行测定。

1.3 实验流程

金针菇液体菌种的菌株培养流程是将菌种转接到PDA培养基中进行活化，活化温度为25 ℃，活化时间为8 d，并获得余面母种，然后放入摇床中进行培养，摇床培养温度为25 ℃，放入恒温振荡器中，转速为150至220转每分钟，摇床培养时间为7～8 d，然后进行摇并培养并稀释，最后将其接种到固体培养基当中。

2 实验结果与分析

2.1 PDA培养基中的金针菇液体菌种筛选

将上述的五种菌种利用接种铲与接种锄在无菌环境中分别转接到PDA培养基当中，各试管分别接入1～2 mL厚，面积为0.5 cm2的菌种，并将其放置在培养箱中25 ℃环境下进行培养，然后对菌种的生长情况进行定期观察。观察结果显示，杂908菌种与金21菌种在的生长情况要比另外三种菌种的生长长势要好得多，并将这两种菌株作为实验的后续菌种。

2.2 单因子测定

将这两种菌种分别当作培养基主料进行单因子正交实验，并对这两种菌种的生长情况进行测定。根据金针菇菌种的化学成分及培养原料的化学结构和碳氮比，来对各个培养基的配方进行确定，分别在不同的培养基中掺入3%的玉米粉、20%的马铃薯及2%的麸皮，在不同培养基中加入的生长因子相同，然后对实验测定结果进行记录。记录结果表明，在杂908菌种与金21菌种中，金21菌种的糖度下降速度要比杂908菌种较快，并且在培养完毕以后，取出的种液质量相对较好，由此可以证明金21液体菌种的活性要比杂908菌种较高。

2.3 摇瓶培养基中金针菇液体菌种的正交实验

依据上述实验测定结果，并借鉴范贵增等人的实验理论和结晶，本文采用葡萄糖、马铃薯与玉米粉作为培养基中的三因子，在不同培养基中的共同成分包括0.08%浓度的K2HPO4、浓度为0.02%的KH2PO4及浓度为0.05%的硫酸镁，试验菌株为筛选出的最佳生长液体菌种，即金21菌种，采用L4（23）正交实验进行结果分析[1]，结果分析表明金81液体菌种的金针菇在生长过程中玉米粉、马铃薯及葡萄糖对生长情况的影响程度按照从大到小进行排列，即玉米粉（R=11）＞马铃薯（R=3）＞葡萄糖（R=2)。由此可以设定最佳的培养基配方为A2B1C2，进而确定出摇瓶培养基的最佳配方是玉米粉掺入量为3%、K2HPO4浓度为0.08%、马铃薯掺入量为15%、葡萄糖掺入量为0.5%、KH2PO4浓度为0.02%、硫酸镁浓度为0.05%。

2.4 金针菇液体菌种生长情况测定

为了对金21液体菌种在摇床中的最佳培养时间进行确定，分别对培养液与菌种的变化情况进行观察，并在金21液体菌种活力最旺盛时中断培养，然后对获得的菌种生长量进行测定，在菌种生长量测定过程中，所采用的培养基为上述获得的最佳摇瓶培养基，其在对菌种进行培养之前的pH值为6.5，糖度值为3.6 °Bé[2]。经过测定结果表明，金21菌种在第7～8 d时的产量最大，不过需要对菌种活力进行重点考虑。该菌种的摇床培养最佳时间为7 d时菌种的活力最高，且生长量也最大，菌丝球数量及直径（小于3 mm）也能够满足实验要求，由此表明，金针菇金21液体菌种是五种菌种中发酵罐与固体栽培的最佳菌种。

[1]彭璐 ,杨 健华 ,王 巍 ,等 .柳生金针菇发酵培养条件优化及菌丝体多糖提取工艺[J].食用菌,2017(5)：24-28.

[2]杨云静.金针菇“江山一号”营养要素筛选及其液体菌种培养研究[D].福州：福建农林大学,2017.