止痒酊质量标准研究

吴 磊,陆 超

(南京中医药大学附属医院 药学部，江苏 南京 210029)

止痒酊质量标准研究

吴 磊,陆 超*

(南京中医药大学附属医院 药学部，江苏 南京 210029)

目的:建立止痒酊质量标准。方法:首先采用薄层色谱法(TLC)，对止痒酊组方中蛇床子和薄荷脑进行定性鉴别，然后采用高效液相色谱法测止痒酊组方中蛇床子素的含量，采用Hedera ODS-3色谱柱(250×4.6 mm，5 μm)，流动相为甲醇-水(70 ∶30)，流速为1.0 mL/min，检测波长为322 nm。结果: 蛇床子素的检测浓度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范围内，与峰面积积分值呈良好的线性关系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加样回收率为99.00%，RSD=0.56%(n=6)。结论: 所建立的方法准确，专属性强，重现性好，可用于止痒酊的质量控制。

止痒酊；薄层色谱；高效液相色谱；质量标准

止痒酊来自江苏省中医院的院内制剂，处方中包含了蛇床子、百部、薄荷脑等成分。组方中蛇床子燥湿杀虫止痒，与辛凉的薄荷脑合用后，用于各种瘙痒性皮肤病，虫蚊叮咬。本文采用薄层色谱法[1]和高效液相色谱法[2]对止痒酊进行了定性和定量分析，以提高了止痒酊制剂质量的可控性。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

蛇床子与薄荷脑对照药材均购自江苏省药材公司；蛇床子素对照品(中国药品生物制品检定所，批号110822-200305)。止痒酊(江苏省中医院，批号160611、141125、150601)。高效液相色谱所用试剂为色谱纯，水为超纯水，其它试剂均为分析纯。硅胶G(青岛海洋化工)；939全自动薄层制板器(重庆市南岸贝尔德仪器技术厂)；Waters 2695 高效液相色谱仪(由Waters 515泵，2487 紫外检测器，20 μL定量进样环构成)。1/10万电子分析天平(BP-211D型，德国Sartorius)；KQ-1000E型医用超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；101-1A型电热鼓风干燥箱(南通沪通制药机械设备厂)；HH-4数显型恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。

1.2 实验方法

1.2.1 蛇床子的薄层鉴别方法 取蛇床子对照药材2 g，加60% 乙醇30 mL，加热回流1 h，滤过，滤液蒸干，残渣加无水乙醇2 mL溶解，作为对照药材溶液。另取止痒酊40 mL，水浴蒸干，残渣加无水乙醇2 mL溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典2015年版一部附录VI B)试验，分别吸取上述3种溶液10 μL，点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯-乙酸乙酯-正己烷(3 ∶1 ∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。

1.2.2 薄荷脑的薄层鉴别方法 取薄荷脑对照药材，加无水乙醇制成5 mg/mL的溶液，作为对照药材溶液。另取止痒酊40 mL，水浴蒸干，残渣加水30 mL溶解，用乙醚振摇提取2次，每次20 mL，合并乙醚液，蒸干，残渣加乙酸乙酯2 mL溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性供试品溶液。照薄层色谱法(中华人民共和国药典2015年版一部附录VI B)试验，吸取上述3种溶液各5μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90 ℃)—乙酸乙酯—氯仿(11 ∶1 ∶3) 为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5 %香草醛浓硫酸溶液，105 ℃加热至显色清晰。

1.2.3 蛇床子的定量鉴别方法 色谱条件 色谱柱：Hedera ODS-3柱(250×4.6 mm，5 μm) ；流动相：甲醇-水(70 ∶1 ∶30)；检测波长：322 nm；柱温：30 ℃；流速：1.0 mL/min。精密称取经五氧化二磷减压干燥器中干燥24 h的蛇床子素对照品适量，置25 mL量瓶中，加乙醇溶解制成426.4 g/ml的对照品溶液。精密吸取止痒酊样品溶液(160611)2 mL，置25 mL容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液。以去掉蛇床子的止痒酊处方，按其生产工艺制备阴性药液，再按“1.2.1”项下方法制备阴性对照溶液。按上述色谱条件，取蛇床子素对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各20 μl，分别注入高效液相色谱仪中进行干扰试验[3-6]。

2 结果与分析

2.1 定性分析与结果

2.1.1 蛇床子的薄层鉴别 照薄层色谱法(中华人民共和国药典2015年版一部附录VI B)试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性供试品无干扰。具体结果详见图1。

图1 蛇床子薄层鉴别图

2.1.2 薄荷脑的薄层鉴别 照薄层色谱法(中华人民共和国药典2015年版一部附录VI B)试验，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性供试品无干扰。详见图2。

图2 薄荷脑薄层鉴别图

2.2 定量分析和结果

2.2.1 蛇床子定量鉴别 供试品色谱图中，在与对照品色谱图相应的位置上，有一相同的色谱峰，而阴性对照溶液色谱图在此处无干扰(见图3)。

图3(A) 蛇床子素对照品溶液

图3(B) 止痒酊样品溶液

图3(C) 阴性对照溶液

2.2.2 线性关系考察 取上述对照品溶液，用乙醇依次稀释至69.38、34.69、17.34、8.67、4.33 μg/mL浓度的对照品溶液，分别精密吸取各不同浓度的对照品溶液20 μL，注入高效液相色谱仪中测定。经线性回归，得蛇床子素回归方程y=86684x+55517(r2=1.0000)，蛇床子素在4.33～138.76 μg/mL范围内，与峰面积的积分值呈良好的线性关系。

2.2.3 精密度试验 取同一供试品溶液，重复进样6次，以峰面积的积分值计算，RSD%为0.80%。

2.2.4 重复性试验 取同一批号的止痒酊溶液各2 mL，按“2.2.2”项下方法分别制备6份样品溶液，按上述色谱条件进行测定，以峰面积的积分值计算，RSD为1.95%。

2.2.5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别在制备后的0、2、4、6、8、12 h进样，测定峰面积，计算，RSD%为0.64%，说明该供试品溶液在12 h内稳定。

2.2.6 加样回收试验 精密吸取已知含量[7]的止痒酊样品1 mL，置25 mL量瓶中，共6份，并分别加入蛇床子素对照品溶液，依法制备供试品溶液，精密吸取20 μL，注入高效液相色谱仪，测定，计算，平均回收率为99.00%，RSD为0.56%。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果表

3 结论与讨论

用HPLC法测定蛇床子素的含量，文献报道有多种流动相，比较了多种比例的甲醇-水分离效果，以甲醇-水(70 ∶30)分离效果为优[8]，分离度、保留时间适中。

用紫外分光光度计对文中试验条件下蛇床子素对照品溶液作了波长扫描，发现其最大吸收波长在321.5 nm，在参考文献[9-10]后，选用322 nm作为检测波长。

结果:蛇床子素的检测浓度在4.33 μg/mL～138.76 μg/mL范围内，与峰面积积分值呈良好的线性关系y=86684x+55517(r2=1.0000)，平均加样回收率为99.00%，RSD=0.56%(n=6); 结论:所建立的方法准确，专属性强，重现性好，可用于止痒酊的质量控制。

[1]郑立卿，张丹参，薛贵平，等.薄层扫描法测定蛇床子提取液中蛇床子素的含量[J]．河北北方学院学报：医学版，2008，25(2)：8-10．

[2]吴承云．郭力.董晓萍.HPLC测定寄生追风液中独活的有效成分蛇床子素[J]．华西药学杂质，2000，15(2)：l29-l30．

[3]李爽，贾媛，范玲，等．芪葵颗粒定性定量方法研究[J]．药物分析杂志，2012，32(9)：1564-1577．

[4]姜勇，金芳，鲍忠，等．不同来源黄芪药材中黄芪甲苷的定量分析[J]．中国中药杂志，2006，31(11)：930-933．

[5]吴怡，邹桂欣，王光函，等．化胃舒颗粒供试品制备方法对其黄芪甲苷含量的影响[J]．中国药师，2014，17(1)：29-32．

[6]刘和平，彭招华，张润容，等．黄芪药材中黄芪甲苷UPLC-ELSD含量测定方法的优化[J]．中国实验方剂学杂志，2015，21(5)：37-40．

[7]马灵珍．HPLC法同时测定化痔胶囊中柚皮苷、新橙皮苷的含量[J]．安徽科技学院学报，2015，29(5)：20-23．

[8]康健．中草药对热性鸡蛋鹌鹑生产性能及部分血液生化指标的影响[J]．安徽科技学院学报，2014，28(6)：1-4．

[9]刘灿群．黄香连.HPLC法测定青柏洁身洗液中蛇床子素的含量[J]．中药材，2004，27(5)：380．

[10]黄美兰．王希.黄荣林.高效液相色谱法测定癣湿药水中蛇床子素的含量[J]．广东药学，2003，13(3)：4．

(责任编辑：马世堂)

Research on Quality Standard of Zhiyang Tincture

WU Lei, LU Chao*

(Department of Pharmacy，Affiliated Hospital of Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China)

Objective: To establish the quality standard for Zhiyang Tincture. Methods: TLC was first used to identify Fruetus Cnidii and Menthol to establish the HPLC method for determining the osthole in Zhiyang Tincture. It was determined on Hedera ODS-3column(250×4.6 mm，5μm)，Mobile phase：methanol-water(70 ∶30). The flowr ate was at 1.0 mL/min, and the detive wavelength was at 322 nm. Results: The calibratine curve was linear with a range of 4.33～ 138.76 μg for osthole, y=86684x+55517(r2=1.0000), the average recovery was 99.00% with RSD%0.56%(n=6). Conclusion: The methods are accurate with a good reproductivity and can be used as a quantitative analysis for preparation of the osthole in the Zhiyang Tincture.

Zhiyang Tincture; TLC ; HPLC; Quality standard

2016-06-23

江苏省中医药管理局项目(JD201512)。

吴磊 (1983-)，男，江苏省南京市人，硕士，主要从事中药临床药代动力学研究；*通讯作者：陆超，主管中药师，E-mail:sinkly228@126.com。

R917

A

1673-8772(2016)06-0054-04