外周血有核红细胞数量与缺氧缺血性脑病新生儿脑损伤相关指标的关系

乔 健，姜东林，龚 芳，陈小倩，李成万△

(1.南通大学第三附属医院儿科，江苏无锡 214041；2.苏州大学附属儿童医院新生儿科，江苏苏州 215003)

外周血有核红细胞数量与缺氧缺血性脑病新生儿脑损伤相关指标的关系

乔 健1，姜东林1，龚 芳1，陈小倩2，李成万1△

(1.南通大学第三附属医院儿科，江苏无锡 214041；2.苏州大学附属儿童医院新生儿科，江苏苏州 215003)

目的 探讨外周血有核红细胞(NRBC)数量与缺氧缺血性脑病(HIE)新生儿脑损伤相关指标的关系。方法 选取2013年2月至2015年4月南通大学第三附属医院与苏州大学附属儿童医院收治的HIE患儿29例(HIE组)，非HIE窒息新生儿27例(窒息组)及健康新生儿24例(对照组)，均于娩出后24 h内检测外周血NRBC数量、S100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(NSE)及脑型肌酸激酶同功酶(CK-BB)水平进行比较，并分析NRBC数量与S100B蛋白、NSE及CK-BB水平的相关性。结果 HIE组患儿外周血NRBC数量及脑损伤相关指标(S100B蛋白、NSE及CK-BB)水平均高于窒息组和对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)；HIE重度患儿外周血NRBC数量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于轻度和中度患儿，差异均有统计学意义(P<0.01)；且HIE患儿外周血NRBC数量与S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相关(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。结论 外周血NRBC数量能够反映HIE新生儿的脑损伤，且检测简便，可用于HIE的早期辅助诊断。

缺氧缺血，脑 ；新生儿；脑损伤；有核红细胞

新生儿缺氧缺血性脑病(hypoxic ischemic encephalopathy，HIE)指新生儿在围产期由于缺血缺氧而导致的脑部损伤性疾病，极易导致新生儿的智力障碍、脑瘫甚至死亡[1]。对于新生儿HIE的救治在于早发现、早治疗，尽早诊断出新生儿的脑损伤从而进行有效干预，可避免或减少神经系统后遗症的产生。有核红细胞(nucleated red blood cell，NRBC)为幼红细胞，在新生儿外周血中少量存在，现有研究表明外周血NRBC数量与窒息相关[2-3]。本研究观察了窒息致HIE新生儿外周血NRBC数量与S100B蛋白、神经元特异性烯醇化酶(neuron specific enolase，NSE)及脑型肌酸激酶同功酶(creatine kinaes BB isozyme,CK-BB)等脑损伤相关指标的关系，以期为HIE的早期辅助诊断提供指标。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选择2013年2月至2015年4月南通大学第三附属医院新生儿科及苏州大学附属儿童医院新生儿科因窒息住院的新生儿56例，均符合新生儿窒息的诊断标准[4]。其中，被临床诊断为HIE的新生儿29例(HIE组)，男13例，女16例；HIE轻度12例，中度11例，重度6例；诊断为窒息无HIE的新生儿27例(窒息组)，男16例，女11例。HIE的临床诊断符合2005年新生儿学组会议制定的HIE诊断依据。HIE分度：轻度表现为兴奋抑制交替，肌张力正常或稍高，可有肌阵挛，瞳孔正常或扩大，原始反射、中枢性呼吸衰竭及脑电图(EEG)正常；中度表现为嗜睡，肌张力及原始反射减弱，常有惊厥，有中枢性呼吸衰竭，瞳孔缩小，EEG表现为低电压；重度表现为昏迷，肌张力表现为松软或间歇性伸肌张力增高，原始反射消失，伴有惊厥，中枢性呼吸衰竭明显，瞳孔不对称或扩大，对光反射迟钝，EEG呈现爆发抑制，等电线[5]。排除标准：排除伴有感染性疾病、中枢系统畸形、先天性心脏病、呼吸系统疾病患儿。对照组选择健康新生儿24例，男11例，女13例。3组在体质量、胎龄、性别及分娩方式上比较，差异无统计学意义(均P>0.05)。

1.2 方法 窒息新生儿于娩出后24 h内抽取股静脉血3 mL，健康新生儿在娩出后24 h内抽取脐静脉血或股静脉血3 mL，所有标本均分两管置于含10%乙二胺四乙酸二钠30 μL和抑肽酶40 μL的试管中。混匀后其中1管用于NRBC计数，另外1管3 000 r/min离心5 min后分离血浆，-70 ℃保存用以批量检测。NRBC计数应用瑞氏-姬姆萨染色后计算每100个白细胞中NRBC的数量；外周血S100B蛋白与CK-BB浓度检测均采用酶联免疫吸附试验(ELLSA)，S100B蛋白检测试剂盒购自瑞典康乃格诊断公司，CK-BB检测试剂盒购自上海北加生化试剂有限公司，检测仪器均为Bio-Rad Model550型酶标仪(美国Bio-Rad公司)；NSE浓度检测采用电化学发光免疫法，试剂盒购自美国Beckman Coulter公司，检测仪器为Elecsys 2010全自动免疫分析仪(美国Roche公司)。具体操作按照试剂盒及仪器操作说明书进行。

2 结 果

2.1 3组外周血各项观察指标比较HIE组外周血NRBC计数、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于窒息组与对照组，差异均有统计学意义(P<0.01)；窒息组与对照组上述各项指标比较，差异均无统计学意义(P>0.05)，见表1。

2.2 不同程度HIE患儿各项观察指标比较 重度HIE新生儿外周血NRBC数量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均高于轻度及中度HIE新生儿，差异均有统计学意义(P<0.01)，见表2。

2.3 相关性分析 相关性分析显示，HIE新生儿外周血NRBC数量与脑损伤指标S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈正相关(r=0.469，P<0.01；r=0.445，P<0.01；r=0.378，P<0.05)。

表1 3组外周血各项观察指标比较

*：P<0.01，与HIE组比较；#：每100个白细胞中NRBC的数量。

表2 不同程度HIE患儿外周血各项观察指标比较

*：P<0.01，与重度患儿比较；#：每100个白细胞中NRBC的数量。

3 讨 论

NRBC作为未成熟红细胞，是胎儿造血系统及胎儿血液循环的一个特征性标记，在围产期随着胎儿造血系统的逐渐发育成熟，其外周血液循环中的NRBC仅有少量存在[6]。S100B蛋白、NSE及CK-BB均与脑的能量代谢有关：S100家族中的S100B蛋白是中枢神经中主要且最有活性的成员，主要存在于脑神经胶质细胞与Schwann细胞，其可通过调节蛋白激酶C和钙调蛋白的磷酸化及RNA的合成调节细胞能量代谢[7]；NSE是在神经内分泌细胞和神经元中催化能量代谢糖酵解过程中磷酸烯醇式丙酮酸与2-磷酸甘油酸互相转化的关键酶；CK-BB也是脑神经细胞及星形胶质细胞能量代谢中的重要催化酶。在发生缺氧缺血性脑损伤时，脑组织细胞膜的完整性遭到破坏，细胞内高浓度的S100B蛋白、NSE及CK-BB则被释放到脑脊液中，而由于新生儿的血脑屏障发育还不完善或直接受损，外周血会出现S100B蛋白、NSE及CK-BB的明显升高[7-9]。而在缺氧缺血的条件下，机体需要更多的血红蛋白参与携氧，这就使得机体内的红细胞需求增加，反馈刺激造血系统加速红细胞的生成与释放，从而使得红细胞未成熟就被释放进入外周血中，使得外周血NRBC计数出现增高[10]。

对于脑损伤的评估，现有的辅助检查常有脑电图、B型超声、CT及磁共振成像(MRI)等，均是从电生理及影像学角度去评估，检查时限各有不同，脑电图在出生后1周内检查，B型超声可在HIE的72h内开始检查，CT待患儿生命体征稳定后检查，一般以生后4～7d为宜，而MRI在生后1d即可检查，均存在检查时间滞后、检查时间长或费用过高等缺点。本研究所选择的检测手段为血清学检测，检测时间为出生后24h内。研究发现在该时间段内HIE组外周血NRBC计数、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明显高于窒息组与对照组(P<0.01)，而窒息组与对照组上述各指标比较差异均无统计学意义(P>0.05)，说明HIE新生儿早期的脑损伤已经在S100B蛋白、NSE及CK-BB等指标上反映出来，同时早期的缺血缺氧已使HIE新生儿外周血NRBC计数升高到足以区分健康和仅有窒息的新生儿。在HIE的分度比较中，重度HIE新生儿外周血NRBC数量、S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均明显高于轻度及中度患儿(P<0.01)，说明新生儿外周血NRBC数量及上述脑损伤指标能够反映HIE新生儿的严重程度,这与国内外的其他研究相一致[10-11]。相关性分析显示，HIE新生儿外周血NRBC计数与脑损伤指标S100B蛋白、NSE及CK-BB水平均呈明显正相关(P<0.01)，这可能说明在相同的病理因素作用下(缺血缺氧)，反馈刺激外周血NRBC数量的增高程度与脑损伤的严重程度是协调一致的，外周血NRBC数量能够反映脑损伤的严重程度，但确切的病理机制还需要进一步探讨。在临床上，检测外周血NRBC数量用血量少，简便快捷，更适合于早期开展。

综上所述，新生儿外周血NRBC数量的增高能够反映脑损伤的存在，同时该检测方法简便快捷，这对于早期筛查HIE及判断疾病的严重程度具有重要意义。

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无锡市医院管理中心医学科研项目(YGZXM14025)。 作者简介：乔健(1970-)，副主任医师，硕士，主要从事新生儿脑损伤方面研究。△

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.35.033

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1671-8348(2016)35-5004-02

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