抗collectin 11抗体在系统性红斑狼疮诊断中的意义

邓晓莉，钟丽君，孙 琳，李常虹，刘湘源△

(1. 北京大学第三医院风湿免疫科，北京 100191；2. 北京大学医药卫生分析中心，北京 100191)



·论著·

抗collectin 11抗体在系统性红斑狼疮诊断中的意义

邓晓莉1，钟丽君2，孙 琳1，李常虹1，刘湘源1△

(1. 北京大学第三医院风湿免疫科，北京 100191；2. 北京大学医药卫生分析中心，北京 100191)

目的：评价抗collectin 11抗体在系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus, SLE)的诊断和病情活动性判断中的作用。方法： 本研究为横断面研究，同时纳入SLE活动组、SLE缓解组、类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)组、原发性干燥综合征(Sjögren syndrome，SS)组以及健康对照(healthy control，HC)组5组患者，应用ELISA方法检测血清抗collectin 11抗体水平，比较各组差异并进行受试者工作特征(receiver operating characteristic，ROC)曲线分析。结果： 5组各纳入30例患者，SLE活动组和SLE缓解组之间抗collectin 11抗体水平差异无统计学意义(88.8±16.8vs. 89.7±24.7，P=0.896)。SLE组作为一个整体，其抗collectin 11抗体水平(89.1±19.4)显著高于RA组(49.1±22.0)、SS组(56.9±30.1)以及HC组(72.7±24.6)(P<0.001，P<0.001，P=0.007)。抗collectin 11抗体诊断SLE的ROC曲线下面积为0.806，提示具有一定的诊断价值，并且与其他SLE特异性自身抗体有一定的互补作用。结论： 血清抗collectin 11抗体在SLE组中显著高于RA组、SS组以及HC组，并具有一定的诊断价值，有可能成为SLE新的特异性自身抗体之一。

红斑狼疮，系统性；胶原凝集素；诊断

系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus，SLE)是一种以多种自身抗体产生为主要特点的系统性自身免疫病，自身抗体对于SLE 的诊断至关重要，但目前已知的SLE特异性抗体仅有抗双链DNA(double-stranded DNA，dsDNA)抗体以及Sm抗体，而这两种抗体的敏感性又不够高，仅44%左右[1]。因此，寻找新的SLE特异性抗体对于提高SLE诊断的准确性非常必要。此外，SLE病情活动性的判断对于SLE的治疗也非常重要，目前常用的评价指标包括抗dsDNA抗体和补体。近年来的研究和临床观察发现，这些指标也存在不足，在不少患者中抗dsDNA抗体和补体并不随病情活动度的变化而变化[2]，因此寻找新的指标来评价病情活动情况也十分必要。既往研究发现凝集素途径的补体激活可能与SLE的发病相关[3]，我们的前期研究也发现胶原凝集素11(collectin 11)与SLE的病情似乎有一定的相关性，本研究即在此基础上分析抗collectin 11抗体在SLE诊断和病情活动性判断中的作用。

1 资料与方法

1.1 患者入选标准

本研究为横断面研究，研究对象为2016年5月至2016年8月在北京大学第三医院门诊就诊以及住院的患者，纳入标准及分组如下：(1)SLE缓解组：满足1997年美国风湿病学会修订的SLE分类诊断标准，SLE疾病活动度评分2000(SLE disease activity index-2000，SLEDAI-2000)≤4分且没有脏器受累；(2)SLE活动组：符合1997年美国风湿病学会修订的SLE分类诊断标准，SLEDAI-2000≥9分；(3)类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)组：满足2009年美国-欧洲联合发布的RA分类诊断标准；(4)原发性干燥综合征(Sjögren syndrome，SS)组：满足2002年美国-欧洲联合发布的SS诊断标准。同时纳入年龄、性别匹配的健康志愿者作为对照(healthy control，HC)组。排除标准：合并现症感染的患者。所有患者均签署知情同意书后入选，本研究经过北京大学第三医院医学科学研究伦理委员会批准。

1.2 血清抗collectin 11抗体的检测

患者在纳入时抽取4 mL外周静脉血，不抗凝，留取血清。血清抗collectin 11抗体的检测采用ELISA方法，具体如下：抗collectin 11抗体(批号ab91483，美国abcam公司)1 ∶1 000稀释后，100 μL每孔包板，4 ℃过夜；.洗液洗板3次，35 g/L奶粉每孔300 μL，封闭2 h；洗液洗板3次，每孔血清100 μL，室温2 h；洗液洗板3次，抗人HRP-IgG抗体(1 ∶5 000，北京康为世纪)每孔100 μL，室温1 h；洗液洗板3次，TMB显色15 min，酶标仪490 nm下读数。

1.3 统计分析

应用SPSS 22.0统计软件分析数据，采用描述性统计方法分析患者人口学资料，计量资料采用t检验或方差分析，计数资料采用卡方检验分析，采用ROC曲线进行诊断分析，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 患者资料

共120例患者和30例健康志愿者入选，其中SLE活动组、SLE缓解组、RA组、SS组各30例患者。各组患者年龄、性别、病程等基础资料如表1所示，其中男性13例，女性137例，年龄(34±14)岁(18～77岁)。SLE活动组和缓解组患者的实验室特点见表2。

表1 各组患者基础资料(n=30)

SLE, systemic lupus erythematosus; RA, rheumatoid arthritis; SS, primary Sjögren syndrome; HC, healthy control.

表2 两组SLE患者的临床和实验室特点(n=30)

SLE, systemic lupus erythematosus; SLEDAI-2000, systemic lupus erythematosus disease activity index 2000; anti-dsDNA, anti-double-stranded DNA antibody; anti-nRNP, anti-nuclear ribonucleoprotein antibody; anti-rRNP, anti-ribosome ribonucleoprotein antibody; anti-SSA, anti-Sjögren syndrome A antibody; anti-SSB, anti-Sjögren syndrome B antibody.

2.2 各组血清抗collectin 11抗体水平的比较

各组之间抗collectin 11抗体水平的比较如图1所示。5组间抗collectin 11抗体水平差异存在统计学意义(F=13.769，P<0.001)， 但SLE活动组和SLE缓解组间差异不具有统计学意义(88.8±16.8vs. 89.7±24.7，P=0.896)。将SLE所有患者作为一个整体与其他4组患者进行比较，结果显示SLE组抗collectin 11抗体水平(89.1±19.4)显著高于RA组(49.1±22.0)、SS组(56.9±30.1)以及HC组(72.7±24.6)(P<0.001，P<0.001，P=0.007, 图1)。

Abbreviations as in Table 1. *P<0.001， # P=0.007， vs. SLE (SLE active and SLE remission as a whole).

图1 各组血清抗collectin 11抗体水平的比较

Figure1 Comparison of serum anti-collectin 11 among the five groups

2.3 血清抗collectin 11抗体诊断SLE的准确性分析

以1997年美国风湿病学会修订的SLE诊断分类标准作为金标准，根据血清抗collectin 11抗体水平不同临界值(cut-off值)诊断SLE的敏感性和特异性绘制ROC曲线(图2)。由图可见，曲线下面积(area under curve，AUC)为0.806，提示血清抗collectin 11抗体水平诊断SLE有一定的准确性，具有一定的诊断价值,其中77.326 7是诊断SLE准确性最高的cut-off值，其敏感性和特异性分别为0.741和0.737，Youden指数为0.478。

图2 血清抗collectin 11抗体诊断SLE的ROC曲线

Figure 2 ROC curve of serum anti-collectin 11 in the diagnosis of SLE

进一步对60例SLE患者分析发现，在将抗collectin 11抗体≥77.326 7定义为阳性的情况下，抗collectin 11与抗dsDNA抗体以及Sm抗体有一定的互补作用，在抗dsDNA和Sm抗体均阴性的患者中，100%的患者抗collectin 11阳性(表3)。在脏器受累方面，抗collectin 11抗体阳性患者最常见的受累脏器依次为肾脏、血液系统、皮肤以及关节肌肉系统,抗collectin 11抗体阴性患者最常见的受累脏器依次是血液系统、肾脏、关节肌肉、皮肤和神经系统,两组相比，抗collectin 11抗体阳性患者神经系统受累(P=0.043)及消化系统受累(P=0.046)更少见(表4)。

3 讨论

胶原凝集素是参与固有免疫的一组蛋白质，其结构特点是具有一个糖类识别区域和胶原样区域，collectin 11是这个家族里最后被发现的分泌型胶原凝集素。collectin 11是一种血清可溶性蛋白，与甘露糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶(mannose binding lectin associated serine protease，MASPs)以复合物形式存在[4]。 Collectin 11参与凝集素的活化[5]，在体外它与微生物以及凋亡细胞结合后通过MASPs途径激活补体[4]。

表3 SLE患者中抗collectin 11与其他抗体的相关性

dsDNA,double-stranded DNA.

补体活化包括经典途径、替代途径以及凝集素途径。补体的激活在SLE的发生、发展中起着至关重要的作用，其中经典途径中补体的激活及其激活产物在SLE中的作用已得到公认，且已在临床广泛应用，而有关凝集素途径在SLE中的作用还不是很清楚。既往有研究提示，凝集素途径可能也参与到SLE的补体活化中[6]，collectin 11通过凝集素途径激活补体。研究还发现， SLE患者血清collectin 11水平显著低于健康对照[6]，提示collectin 11可能与SLE的发病相关。有关抗collectin 11抗体在SLE诊断中的研究尚未见报道。

本研究发现，抗collectin 11抗体是SLE相对特异的抗体，SLE患者血清抗collectin 11抗体水平显著高于RA、SS以及HC。与此相反，抗collectin 11抗体在SLE活动组以及缓解组之间差异并没有统计学意义，提示该抗体对于病情活动性的评估价值可能不大。

表4 SLE患者中抗collectin 11与脏器受累的相关性

目前临床广泛应用的与SLE诊断相关的自身抗体针对的靶抗原都是细胞核等细胞成分(如抗核抗体)，其抗体与相应的抗原结合后形成抗原抗体复合物，从而参与SLE的发病。靶抗原是血清蛋白质(尤其是补体系统成分)的自身抗体很少，抗C1q抗体是针对补体C1第一组分的第一个反应亚基C1q的抗体。C1q在经典途径补体活化、免疫复合物以及凋亡产物的清除中至关重要，抗C1q抗体的存在使C1q的生理功能大大减低[7]，导致免疫复合物和凋亡产物的清除减少并在肾脏局部沉积，从而参与SLE的发病。虽然collectin 11在SLE的发病中是否起作用以及如何起作用目前还不清楚，但基于其生物学特点，并结合既往研究结果，我们有理由推测，collectin 11很可能通过凝集素途径在补体的激活、免疫复合物以及凋亡产物的清除中发挥一定的作用，从而参与SLE的发病。而抗collectin 11抗体的存在也有可能干扰其生理功能，从而参与SLE的发病。本研究结果也支持这一推测：SLE患者血清抗collectin 11抗体水平显著高于RA以及SS，因为与RA等其他自身免疫病相比，补体的活化是SLE相对特异的发病机制之一。我们的研究中抗collectin 11抗体与SLE 病情的活动性似乎没有明显的关系，与既往有关抗C1q抗体与SLE病情活动性密切相关的结论有不同之处[8]，可能因为collectin 11主要参与补体激活的凝集素途径，而补体激活还有经典途径和替代途径，其中经典途径在补体的激活和免疫复合物的清除中发挥更重要的作用，因此，抗C1q抗体更能反映SLE整体的补体激活情况，与病情活动相关性更高，而抗collectin 11抗体水平的变化不一定能反映SLE整体的补体活化情况，因此也不能全面反映SLE的病情活动情况。综上，我们的结果提示，凝集素途径的补体活化在SLE患者中普遍存在，但其程度似乎与总体病情变化关系不大。

此外，本研究还发现，抗collectin 11抗体与抗dsDNA抗体以及Sm抗体有一定的互补作用，在这两种抗体均阴性的患者中，100%的患者抗collectin 11抗体阳性，提示对于这些抗体阴性的患者，行抗collectin 11 抗体检测可能有助于提高SLE的检出率。另外，抗collectin 11抗体阳性的患者中，神经系统和消化系统受累更少见，这对于预测患者的预后有一定价值。

总之， 本研究发现血清抗collectin 11抗体在SLE患者中显著高于RA、SS以及HC，是SLE相对特异的自身抗体，并且具有一定的诊断价值，与其他SLE特异性自身抗体有一定的互补作用，有可能成为SLE新的自身抗体之一。该抗体在缓解期和活动期SLE患者中无显著差别，提示其评价病情活动性的价值可能不大。本研究提示抗collectin11抗体与既往其他抗体在SLE中的价值可能不同，在SLE的诊断中有一定的应用潜力，但本研究样本量较小，检测抗collectin 11抗体的方法较单一，有待进一步在更大样本量的人群中采用多种检测方法验证该抗体的诊断价值。

[1]Rose T, Grutzkau A, Hirseland H, et al. IFN alpha and its response proteins, IP-10 and SIGLEC-1, are biomarkers of disease activity in systemic lupus erythematosus [J]. Ann Rheum Dis, 2013, 72(10): 1639-1645.

[2]Costedoat-Chalumeau N, Amoura Z, Hulot JS, et al. Low blood concentration of hydroxychloroquine is a marker for and predictor of disease exacerbations in patients with systemic lupus erythematosus [J]. Arthritis Rheum, 2006, 54(10): 3284-3290.

[3]Saevarsdottir S, Kristjansdottir H, Grondal G, et al. Mannan-binding lectin and complement C4A in Icelandic multicase families with systemic lupus erythematosus [J]. Ann Rheum Dis, 2006, 65(11): 1462-1467.

[4]Henriksen ML, Brandt J, Andrieu JP, et al. Heteromeric comp-lexes of native collectin kidney 1 and collectin liver 1 are found in the circulation with MASPs and activate the complement system [J]. J Immunol, 2013, 191(12): 6117-6127.

[5]Hansen SW, Ohtani K, Roy N, et al. The collectins CL-L1, CL-K1 and CL-P1, and their roles in complement and innate immunity [J]. Immunobiology, 2016, 221(10): 1058-1067.

[6]Troldborg A, Thiel S, Jensen L, et al. Collectin liver 1 and collectin kidney 1 and other complement-associated pattern recognition molecules in systemic lupus erythematosus [J]. Clin Exp Immunol, 2015, 182 (2): 132-138.

[7]Kallenberg CG. Anti-C1q autoantibodies [J]. Autoimmun Rev, 2008, 7(8): 612-615.

[8]Stojan G, Petri M. Anti-C1q in systemic lupus erythematosus [J]. Lupus, 2016, 25(8): 873-877.

(2016-07-20收稿)

(本文编辑：赵 波)

·消息·

北京大学人民医院姜保国教授获2016年度顾氏和平奖

2016年11月23日，第十五届顾氏国际和平奖(Gusi Peace Prize)颁奖典礼在菲律宾首都马尼拉国际会议中心盛大举行，来自世界多个国家的政要及菲律宾当地各界知名人士出席了此次颁奖典礼，北京大学人民医院院长姜保国教授等来自13个国家和地区的14位获奖者获颁此奖项。这是我国大陆医学领域学者第二次获此国际盛誉，此前中国器官捐献与移植委员会主任委员黄洁夫荣获2015年度顾氏和平奖。

菲律宾顾氏和平奖类似于诺贝尔和平奖，是联合国备案的仅有的两个世界级和平奖项。该奖项由菲律宾著名政治活动家赫梅尼亚诺·哈威尔·顾氏于上世纪70年代中期创立，每年授予在科学研究、政治文化、文学艺术、医药卫生、慈善宗教、商业经济、国际事务等领域致力于促进人类和平、和谐、尊重人类生命与尊严，并做出杰出贡献的个人和组织。

姜保国教授作为中国著名的创伤医学专家及中国新一代创伤医学的领军人物，于2006年创建北京大学交通医学中心，启动中国严重创伤、交通伤救治规范的研究，其创新性成果曾获得教育部技术发明一等奖、教育部科技进步奖一等奖。由于姜保国教授在医疗领域所取得的突出成绩，特别是在周围神经损伤与修复研究及中国创伤救治体系建设所取得的创新性成果，荣获2016年度顾氏和平奖。菲律宾顾氏国际和平奖国际委员会高度肯定姜保国教授提出的替代传统神经外膜缝合的小间隙套接缝合技术，高度评价姜保国教授为改善人类健康所作出的不懈努力，以及为改善人类健康、减少患者痛苦所作出的卓越贡献。

(北京大学人民医院宣传处)

Diagnostic significance of anti-collectin 11 in systemic lupus erythematosus

DENG Xiao-li1, ZHONG Li-jun2, SUN Lin1, LI Chang-hong1, LIU Xiang-yuan1△

(1. Department of Rheumatolgoy and Immunology, Peking University Third Hospital, Beijing 100191, China; 2.Medical and Health Analytical Center, Peking University Health Science Center, Beijing 100191, China)

Objective： To analyze the role of anti-collectin 11 in the diagnosis of systemic lupus erythematosus (SLE) and in the evaluation of disease activity. Methods: This was a cross-sectional study. Five groups of patients were enrolled: SLE active (SLE disease activity index-2000，SLEDAI-2000≥9), SLE remission (SLEDAI-2000≤4 and there was no organ involvement), rheumatoid arthritis (RA), primary Sjögren Syndrome (SS) and healthy control (HC). Serum anti-collectin 11 was detected in all the groups by ELISA. One-way ANOVA analysis and LSD-ttest as post-hoc analysis were used to compare the levels of anti-collectin 11 among all the groups. Receiver operating characteristic (ROC) curve and the area under curve (AUC) were used to analyze the value of anti-collectin 11 in the diagnosis of SLE. Results: In the study, 30 patients were enrolled in each group, including 13 males and 137 females with an average age of (34±14) years (18-77 years). The age and gender of the other three groups were comparable to the two SLE groups. The difference of serum anti-collectin 11 between the SLE active group and SLE remission group was not statistically significant (88.8±16.8vs. 89.7±24.7,P=0.896). The level of serum anti-collectin 11 was significantly higher in SLE group (as a whole) (89.1±19.4) than in RA group (49.1±22.0), SS group (56.9±30.1) and HC group (72.7±24.6) (P<0.001,P<0.001,P=0.007, respectively). The AUC was 0.806 for the diagnosis of SLE by serum anti-collectin 11. Further descriptive analysis showed that the positive rate of anti-collectin 11 was very high in the patients of SLE in whom both anti-double-stranded DNA (dsDNA) and Sm antibody were negative. The nervous system and gastrointestinal system involvement were the most common in the patients with positive anti-collectin 11. Conclusion: The level of serum anti-collectin 11 was significantly higher in SLE than in RA, SS and HC. Anti-collectin 11 antibody had a relatively high value in the diagnosis of SLE and it might have some complementary function in the diagnosis of SLE. It might be a relatively specific autoantibody for SLE.

Lupus erythematosus, systemic; Collectins; Diagnosis

国家自然科学基金项目(81501390)资助Supported by the National Natural Science Foundation of China (81501390)

时间：2016-11-2 9：01：45

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.4691.R.20161102.0901.018.html

R593.241

A

1671-167X(2016)06-0982-05

10.3969/j.issn.1671-167X.2016.06.011

△Corresponding author’s e-mail, 13683657545@163.com