大肠埃希氏菌O157∶H7三种标准中的检测方法比较

周 雯，陈雨欣，苏粉良，臧海竹，周 斐，朱 荣

（苏州出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心，苏州世标检测技术有限公司，江苏苏州 215104）

大肠埃希氏菌O157∶H7三种标准中的检测方法比较

周 雯，陈雨欣，苏粉良，臧海竹，周 斐，朱 荣

（苏州出入境检验检疫局检验检疫综合技术中心，苏州世标检测技术有限公司，江苏苏州 215104）

在进行大肠埃希氏菌O157∶H7扩项过程中，对国内常用3个标准中的常规培养法进行比较分析。结果表明，不同温度培养的增菌肉汤均浑浊生长。大肠埃希氏菌O157∶H7显色培养基选择性较好，建议在日常检测工作中使用大肠埃希氏菌O157∶H7显色培养基，以提高区分度及检出率。同时，应用VITEK 2可以快速简便地鉴别目标菌。

大肠埃希氏菌O157∶H7；选择性培养；VITEK 2

0 引言

微生物引起的食源性疾病是全世界的首要食品安全问题[1]。其中，肠出血性大肠埃希氏菌O157∶H7（大肠埃希氏菌O157∶H7、大肠杆菌O157∶H7）是近年来新发现严重危害人类健康的一种食源性致病菌[2]，能够感染猪肉、禽肉、牛肉、牛奶、果汁、蔬菜和饮用水[3]，最低10个活菌的感染就可能致病[4]。轻度感染者会出现短暂腹泻、恶心、呕吐等症状；重度感染会导致剧烈腹痛、出血性结肠炎、溶血性贫血、血小板减少性紫癜和溶血性尿毒综合症，甚至死亡[5]。笔者在新增扩项过程中，根据国内常用的3种标准，对大肠埃希氏菌O157∶H7进行增菌，选择性分离鉴定，并对过程进行比较分析，以期为实验室检测该目标菌提供依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 标准菌株

大肠埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888，大肠埃希氏菌ATCC 25922，上海宝录生物科技有限公司提供。

1.1.2 培养基

改良EC肉汤、山梨醇麦康凯（SMAC）琼脂、改良山梨醇麦康凯（CT-SMAC）琼脂、科玛嘉大肠埃希氏菌O157∶H7显色琼脂平板、营养肉汤、营养琼脂（NA），北京陆桥技术股份有限公司提供；添加鼠李糖的山梨醇麦康凯（CR-SMAC）琼脂。

1.1.3 仪器和设备

生化培养箱，上海森信实验仪器有限公司产品；手提紫外检测灯，上海宝山顾村电光仪器厂产品；VITEK 2型全自动微生物鉴定仪，法国生物梅里埃公司产品。

1.2 试验方法

GB/T 4789.36—2008食品卫生微生物学检验，大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验[6]，SN/T 0973—2010进出口肉、肉制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7检验方法[7]，SB/T 10462—2008肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌O157∶H7检验方法[8]。

不同标准检测流程见表1。

表1 不同标准检测流程

2 结果与分析

2.1 试验结果

2.1.1 增菌结果

增菌结果见表2。

2.1.2 菌落形态

2 种菌株在不同培养基上的菌落形态见表3。

2.1.3 生化试验

表2增菌结果

菌 株 培养温度θ/℃ 培养时间t/h 生长情况大肠埃希氏菌O157∶H7 ATCC43888浑浊生长浑浊生长大肠埃希氏菌ATCC25922 36 41 24 24 36 41 24 24浑浊生长浑浊生长

表3 2种菌株在不同培养基上的菌落形态

2 种菌株生化鉴定结果见表4，菌株的VITEK 2鉴定结果见表5，菌株血清学试验结果见表6。

表4 2种菌株生化鉴定结果

表5 菌株的VITEK 2鉴定结果

表6 菌株血清学试验结果

2.2 结果分析

2.2.1 培养温度

大肠埃希氏菌O157∶H7最适生长温度为33～42℃。在扩项试验中，增菌液培养时间均为24 h，在36℃和41℃，增菌肉汤均浑浊生长。

2.2.2 SMAC琼脂平板

典型的大肠埃希氏菌O157∶H7不发酵山梨醇和鼠李糖，但有个别变异株可发酵山梨醇。比较GB/T 4789.36—2008和SN/T 0973—2010可以发现，SMAC和CT-SMAC有效成分一致。大肠埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888在SMAC琼脂平板上为扁平透明，圆形光滑，中心呈淡褐色；大肠埃希氏菌ATCC 25922在SMAC琼脂平板上为粉红色，有胆盐沉淀环，但SMAC培养基不能区分不发酵山梨醇的大肠埃希氏菌；在SMAC基础上添加鼠李糖制成的CR-SMAC可区分不发酵山梨醇，但发酵鼠李糖的大肠埃希氏菌，同时可抑制变形杆菌的生长，提高检测的准确性[2]。建议在日常检测工作中，把CRSMAC作为辅助培养基，减少变形杆菌的干扰，更好地区分大肠埃希氏菌。

2.2.3 科玛嘉显色培养基

大肠埃希氏菌O157∶H7 ATCC 43888在科玛嘉显色培养基上呈粉紫色，边缘无色；大肠埃希氏菌ATCC 25922呈蓝绿色菌落，有晕圈。科玛嘉显色培养基有良好的特异性，可以有效区分上述2种菌株。所以，在实际检测过程中，以SB/T 10462—2008为检测依据，也可以借助科玛嘉显色培养基，提高检测效率。

2.2.4 生化鉴定

典型的大肠埃希氏菌O157∶H7不分解MUG，从而不产荧光。可以先将典型或可疑菌落接种MUG-LST培养基，不产荧光者继续纯化用于后续生化鉴定，产荧光者直接排除，建议使用GB/T 4789.36—2008检测大肠埃希氏菌O157∶H7，先接种MUG-LST培养基，筛选之后如有必要再接种TSI，也可以节约检测成本、减少工作量。GB/T 4789.36—2008和SN/T 0973—2010均可通过VITEK 2型全自动微生物生化鉴定仪，快速、简便鉴定菌株，结果见表6。血清凝集试验中大肠埃希氏菌O157∶H7的O157血清和H7血清均凝集，大肠埃希氏菌ATCC 25922均不凝集，但也有某些抗原可能和大肠埃希氏菌O157∶H7具有相同或相似表位，可能发生凝集反应[2]，所以血清学试验可以作为筛选后的进一步验证，不能作为单一的检测方法。

3 结论

在日常检测工作中，不同温度培养的增菌肉汤均浑浊生长。大肠埃希氏菌O157∶H7显色培养基有较好的选择性，可有效排除非目标菌，提高检测效率。有条件的实验室，可以通过VITEK 2型全自动微生物生化鉴定仪快速、简便的检测。在日常检测过程中应设置阳性及阴性对照，确保结果的准确性。

建立灵敏而特异的大肠埃希氏菌O157∶H7检测方法用于食品检验、中毒爆发调查、监测与品质控制等领域尤为重要[9]，建议继续扩展快速筛选方法，如GB/T 4789.36—2008中的其他方法。大肠埃希氏菌O157∶H7在食品中的污染量一般较低，且大肠埃希氏菌O157∶H7表型的复杂性及生化变异株的不断发现[10]，建议同时采用2种或3种以上方法进行检验，如常规培养方法结合免疫层析。本实验室有分子实验室，可以继续扩展应用实时荧光PCR技术检测肉、肉制品及其他各类食品中的大肠埃希氏菌O157∶H7，更好地做好检测服务工作。

[1]陈君石.我国食品安全问题的特点和应对措施 [C]//中国毒理学会第五次全国学术大会论文集.贵阳：中国毒理学会，2009：46-48.

[2]宋宏新，李宏，邢佩.食品中大肠杆菌O157∶H7的选择性培养与检测方法研究 [J].山西科技大学学报，2008，26（2）：64-67.

[3]山珊，赖卫华，陈明慧，等.农产品中大肠杆菌O157: H7的来源及分布研究进展 [J].食品科学，2014，35（1）：289-293.

[4]Ferens W A，Hovde C J.Escherichia coli O157:H7：animal reservoir and sources of human infection[J].Foodborne Pathogens and Disease，2011，8（4）：465-487.

[5]王爱华，赵德东.食品中大肠埃希氏菌O157:H7的检验分析 [J].中国保健营养，2008（2）：1 007-1 009.

[6]中华人民共和国卫生部.GB/T 4789.36—2008食品卫生微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验 [S].北京：中国标准出版社，2008.

[7]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.SN/T 0973—2010进出口肉、肉制品及其他食品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检验方法 [S].北京：中国标准出版社，2011.

[8]中华人民共和国商务部.SB/T 10462—2008肉与肉制品中肠出血性大肠杆菌O157:H7检验方法 [S].北京：中国标准出版社，2008.

[9]朱启.大肠杆菌O157的检测及生物学特性研究 [D].杭州：浙江大学，2011.

[10]王静，邱茂峰，林修光.食品中大肠杆菌O157:H7快速分离培养方法的研究 [J].卫生研究，2002，31（1）：44-46.

Comparison of Methods of Three Criterions for Detection of Escherichia coli O157:H7

ZHOU Wen，CHEN Yuxin，SU Fenliang，ZANG Haizhu，ZHOU Fei，ZHU Rong （Suzhou Entry-exit Inspection and Quarantine Bureau，Suzhou World Standarcl Testing Co.，Ltd.，Suzhou，Jiangsu 215104，China）

Conventional culture methods of three criterions commonly used in China are compared in the process of extending Escherichia coli O157∶H7.The results show that the enrichment broth of diferent culture temperatures is turbid.Escherichia coli O157∶H7 chromogenic medium is better.Escherichia coli O157∶H7 chromogenic medium in daily work can increase the detection rate is suggested.At the same time，VITEK 2 can be used to identify target bacteria quickly and easily.

Escherichia coli O157∶H7；selective culture；VITEK 2

S851.43

A

10.16693/j.cnki.1671-9646（X）.2016.11.012

1671-9646（2016）11a-0040-03

2016-09-09

周 雯（1987—），女，硕士，研究方向为微生物检测。