柚皮苷抗大鼠乙酸型胃溃疡的作用及其对胃黏膜TFF2表达的调控*

秦建设，郑 波

(重庆三峡医药高等专科学校 404120)



·经验交流·

柚皮苷抗大鼠乙酸型胃溃疡的作用及其对胃黏膜TFF2表达的调控*

秦建设，郑 波△

(重庆三峡医药高等专科学校 404120)

目的 通过测定乙酸型胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织中三叶因子2(TFF2)的表达，探讨柚皮苷对胃溃疡的治疗作用。方法 60只SPF级SD大鼠分成6组，即对照组、模型组，柚皮苷低(50mg/kg)、中(100mg/kg)、高(200mg/kg)剂量组和兰索拉唑组(3mg/kg)。制作乙酸型胃溃疡模型。连续给药1周后处死大鼠，采集标本。结果 与模型组相比，柚皮苷中、高剂量组血清及胃黏膜中TFF2表达明显增强(P<0.05)；兰索拉唑对血清及胃黏膜中TFF2表达的增效不明显(P>0.05)。结论 柚皮苷具有抗胃溃疡作用，其作用机制可能与提高胃组织中TFF2的水平有关。

柚皮苷；胃溃疡；三叶因子2

柚皮苷全称为柚皮素-7-O-新橙皮糖苷，又称柚苷、柚皮素，是一种双氢黄酮类化合物，是陈皮、枳实、青皮等中药的主要有效成分之一。现代研究表明，柚皮苷具有抗氧化、抗肿瘤、解痉镇痛、降血脂、调节血糖等生物活性和药理作用[1-3]。2013年，柚皮苷被国家批准作为一类新药进入临床试验。大量药物成分分析研究显示，对胃溃疡有治疗作用的很多中成药，如健脾舒胃凝胶、胃苏颗粒、胃炎灵颗粒等中均检测出含有大量的柚皮苷成份[4-6]。但是，有关柚皮苷对胃溃疡的治疗作用研究文献比较少见。本文旨在研究柚皮苷对胃溃疡大鼠胃黏膜损伤的保护作用，特别是对胃黏膜保护因子TFF2的影响，进一步阐明柚皮苷的药理作用，为治疗胃溃疡提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料 清洁级(SPF)4个月龄SD大鼠60只，雌雄各半，体质量180～200g，由第三军医大学大坪医院医学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(渝)2012-0005。将大鼠分为对照组，模型组，柚皮苷低剂量组、中剂量组、高剂量组，兰索拉唑组，每组分别10只。

1.2 药物试剂与主要仪器 柚皮苷(编号：101291319，Sigma公司)，TFF2试剂盒(编号：AK0014FEB26008，武汉伊莱瑞特生物科技有限公司)，兰索拉唑片(规格：15mg，批号：120623，重庆科瑞制药有限公司)，柚皮苷用羚甲基纤维素纳(CMC)制成100%柚皮苷悬浊液。Bio-TekELX800多功能酶标仪(美国)，H-1850R湘仪高速离心机。

1.3 方法

1.3.1 模型制备 用改良Okabe法制作乙酸型胃溃疡模型[7-8]。大鼠适应性饲养1周后禁食不禁水24h。以10%的水合氯醛腹腔注射进行麻醉，在剑突下沿正中线作2～3cm的正中切口，打开腹腔，将胃轻轻拉出，用1mL注射器在胃前壁胃小弯角切迹下方刺入浆膜下注入0.1mL100% 的乙酸，以出现白点为度，然后用细棉签将溢出乙酸吸净，用含生理盐水清洗，将胃小心地纳入腹腔，逐层缝合创口。术后当日给大鼠自由饮水，次日开始自由饮食。

1.3.2 给药方法 造模次日开始给药：模型组给予生理盐水1mL/100g灌胃；柚皮苷低剂量组给予50mg/kg灌胃；柚皮苷中剂量组给予100mg/kg灌胃；柚皮苷高剂量组给予200mg/kg灌胃；兰索拉唑组给予3mg/kg。每天 1 次，连续给药 1 周。对照组正常饮食。

1.3.3 标本采集与处理 给药1周后，所有组别大鼠禁食24h后，进行腹腔麻醉，开腹采用腹主动脉取血方法收集血液标本，取血后室温静置1h后3 500r/min离心10min，吸出上层血清存放在-85 ℃冰箱保存。沿胃大弯剪开，以生理盐水冲洗后，观察胃溃疡状况，测量胃溃疡面积。胃黏膜用组织匀浆器匀浆后离心，吸出上层澄清液存放在-85 ℃冰箱保存。

1.3.4 观测指标与方法

1.3.4.1 溃疡面积 用游标卡尺测出溃疡的最长径和最宽径，两者相乘计算出溃疡面积。

1.3.4.2TFF2测定 采用酶联免疫吸附(ELISA)法，用多功能酶标仪(Bio-TekELX800，美国)，按试剂盒说明书检测血清与胃黏膜组织液中TFF2水平。

2 结 果

2.1 大鼠胃黏膜溃疡指数变化 肉眼下，模型组、柚皮苷低剂量组均可见明显的溃疡面，中剂量组、高剂量组与兰索拉唑组溃疡面积明显减少。经计算模型组溃疡面积指数最高，与模型组相比，柚皮甘中、高剂量组和兰索拉唑组溃疡指数均明显降低(P<0.01)，且柚皮苷高剂量组和兰索拉唑组疗效明显优于柚皮苷低、中剂量组(P<0.01)，但柚皮苷高剂量组与兰索拉唑组之间无明显差异(P>0.05)，见表1。

2.2 胃溃疡大鼠血清及胃黏膜组织TFF2的变化 与模型组相比，柚皮苷低、中、高剂量给药组大鼠血清及胃黏膜组织中TFF2水平均有增加，但柚皮苷中剂量、高剂量组效果明显(P<0.05)。相比柚皮苷低剂量组，柚皮苷高剂量组效果更明显(P<0.05)。兰索拉唑组对血清和胃黏膜中TFF2的调控作用效果不明显，见表2。

表1 各组胃溃疡大鼠溃疡指数变化

a：P<0.01，与模型组相比；b：P< 0.01，与柚皮苷低剂量组比较；c：P< 0.01，与柚皮苷中剂量组比较；-：无数据。

表2 各组大鼠血清及胃黏膜组织液中TFF2 的变化

a:P<0.01，、与对照组比较；b：P<0.05，与模型组比较；c：P<0.05，与兰索拉唑组比较；d：P<0.05，与柚皮苷低剂量组比较。

3 讨 论

胃溃疡是一种临床消化系统的常见病、多发病，其致病因素复杂，病理机制迄今未完全清楚。胃溃疡后的修复与愈合，也是一个十分复杂的过程，黏膜愈合的质量直接影响到疾病的转归。大量研究表明，胃黏膜的修复过程是多种细胞、生长因子及细胞外基质相互作用的复杂过程。而胃黏膜防御屏障功能下降，防御保护因子减少是形成胃溃疡的重要病理基础。TFF2作为胃黏膜细胞分泌的重要保护因子，在胃溃疡的产生与修复过程中具有重要的作用。TFF2是一种具有三叶草型结构域的小分子蛋白质，其与TFF1、TFF3都是TFF家族中最重要的成员。大量研究表明，TFF的主要表达位点在胃肠道,是由胃肠道黏膜细胞分泌产生，TFF1、TFF2主要分布在胃窦部,TFF3主要分布在小肠和大肠[9-10]。近年国内外研究显示,TFF2表达的部位和水平与胃溃疡的关系非常密切,其主要作用机制为： TFF2能促进胃黏液糖蛋白的分泌，并能与黏液糖蛋白结合生成具有保护作用的复合物，进而能避免胃黏膜上皮细胞遭受酸和酶的侵袭，同时能与表皮生长因子、转化生长因子等相关胃黏膜保护因子相互协同，共同促进黏膜上皮细胞向溃疡部位移行和修复[11-12]。

本实验结果表明，柚皮苷能明显提升胃溃疡大鼠血清及胃黏膜中TFF2的水平，随着用药剂量的增加，其作用效果愈明显，且柚皮苷高剂量组大鼠血清和胃黏膜组织中TFF2水平与对照组大鼠血清和胃黏膜组织中TFF2水平无显著差异。胃溃疡指数也提示，柚皮苷对胃溃疡的修复与愈合具有明显促进作用，这表明柚皮苷对胃溃疡的保护作用与提升胃黏膜组织中TFF2的水平具有高度的相关性，且药理治疗作用与用药浓度可能存在一定程度的正相关性。

本实验显示，兰索拉唑组TFF2的表达偏低，这可能与兰索拉唑的药理作用机制有关。兰索拉唑属第二代质子泵抑制剂，具有明显的抑制胃酸分泌作用。其主要作用于胃壁细胞的H+-K+-ATP酶，能使H+质子泵的巯基氧化而失去活性，阻断壁细胞的H+分泌入胃中，致使胃液中胃酸减少，从而达到治疗胃溃疡的作用。本实验采用乙酸造模的方法与刺激胃酸分泌机制相似，所以兰索拉唑的治疗效果比较明显。但TFF2的主要作用在于促进胃黏液糖蛋白分泌与合成，促进胃黏膜的修复与愈合，并不能直接抑制胃酸分泌[13]。本实验结果说明，兰索拉唑促进胃黏膜TFF2表达的作用不明显。

胃溃疡属中医学胃痛、胃脘痛范畴，多因外感寒邪、饮食所伤、情志不畅和脾胃素虚等引发，从而导致气滞、寒凝、热郁、湿阻、血瘀等病理变化，影响胃失和降，不通则痛。治疗上以理气和胃止痛为主。作为柚皮苷的主要来源，陈皮、枳实、青皮等中药均具有较强的理气和胃止痛作用，是中医药治疗胃痛的常用处方组成药物。这也可能是柚皮苷具有抗胃溃疡作用的内在联系。

综上所述，柚皮苷具有明显的促进胃溃疡愈合作用，且治疗效果与兰索拉唑无明显差异。柚皮苷的作用机制可能是通过刺激胃黏膜细胞，促进黏膜保护因子TFF2分泌，提高TFF2水平，加快胃黏膜的增殖与修复，从而达到保护胃黏膜，预防和治疗胃溃疡的作用。

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10.3969/j.issn.1671-8348.2016.32.031

重庆市教育委员会科学技术研究资助项目(KJ131805)。 作者简介：秦建设(1978-)，副教授，硕士，主要从事中医药治疗脾胃疾病研究。△

E-mail:zhengbo20042008@163.com。

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2016-08-13)