CD209基因Rs4804803位点多态性与肺结核易感性关系

王炳花， 张瑞梅， 成 松， 席向宇*

(1徐州医科大学流行病与卫生统计学教研室，徐州 221004； 2徐州市传染病医院结核科； *通讯作者，E-mail：xxy1891@163.com)



CD209基因Rs4804803位点多态性与肺结核易感性关系

王炳花1， 张瑞梅2， 成 松2， 席向宇2*

(1徐州医科大学流行病与卫生统计学教研室，徐州 221004；2徐州市传染病医院结核科；*通讯作者，E-mail：xxy1891@163.com)

目的 探讨CD209基因的Rs4804803位点多态性与肺结核易感性关系。 方法 采用病例对照研究的方法，选取58例肺结核病例和62例健康对照，用ABI prism 310测序仪对CD209基因的Rs4804803位点进行DNA测序，并用GeneMapper4.1进行SNP分型分析，比较CD209基因Rs4804803位点的基因型和等位基因频率分布情况。 结果 Rs4804803位点的基因型AA、AG、GG频率在肺结核组分别为86.21%，13.79%和0，对照组分别为83.87%，12.90%和3.23%，肺结核组和对照组之间的基因型频率分布差异无统计学意义。 结论 CD209基因的Rs4804803位点的多态性与肺结核的易感性无关。

CD209基因； 多态性； 肺结核

结核病(tuberculosis)是由结核分支杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的一种复杂性疾病，其影响因素有很多，除环境因素之外，遗传因素与结核病的易感性之间也存在非常重要的关联性。目前已知的结核病的易感基因有人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1基因(NRAMP1)、 维生素 D 受体(VDR) 基因、 甘露糖结合凝集素基因(MBL)、人类白细胞抗原(HLA)基因、 γ-干扰素 (NF- γ) 受体基因、树突状细胞特异性细胞间黏附分子-3-结合非整合素分子(DC-SIGN或CD209)、白细胞介素(IL)基因等[1，2]。而CD209基因与结核的易感性关系研究争议颇多，本研究主要目的是分析CD209基因中的Rs4804803位点与中国汉族人群肺结核易感性的关系。

1 材料与方法

1.1 研究对象

58例病例来自徐州市传染病医院结核科，经痰培养阳性确诊的肺结核病人，排除严重的肝、肾、心脑血管疾病以及其他呼吸系统疾病；62例健康对照为本院医护人员，年龄性别与病例组均衡可比，均为汉族人群。

1.2 全血DNA提取及样本质控

抽取研究对象静脉血3 ml，离心后取白细胞提取DNA，操作步骤参照试剂盒要求进行。然后取1 μl DNA样品用1%琼脂糖凝胶电泳对其进行质量检查以及NanoDrop进行浓度检测，然后根据估计的浓度将样本稀释到工作浓度5-10 ng/μl。

1.3 基因分型分析

1.3.1 PCR 反应 在NCBI中搜索Rs4804803位点的序列，用primer primier5.0设计Rs4804803位点引物序列，上游引物：5′-GGGGTTGACAGGGAGAAG-3′，下游引物：5′-CAGTGCCTCCTCAGTTTCC-3′。

PCR程序：95 ℃预变性2 min，94 ℃ 20 s，65 ℃ 40 s，72 ℃ 60 s，共30个循环，最后4 ℃保存。PCR产物用1%琼脂糖凝胶电泳分析扩增结果。

1.3.2 测序及分型 采用ABI prism 310测序仪进行DNA测序，过程参照ABI PRISM Protocol。SNP分型用GeneMapper4.1(Applied biosystems)进行分析(由上海玑牧生物科技有限公司检测)。

1.4 统计分析

用SPSS16.0软件进行统计分析，数值变量资料两组间比较采用t检验，分类变量资料组间比较采用卡方检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 研究对象的基本信息

本次研究共收集研究对象120例，肺结核病例58例，健康对照62例。病例组和对照组在年龄和性别方面差异无统计学意义(见表1)。

表1 研究对象的年龄和性别比较

Table 1 Comparison of age and sex between two groups

组别n年龄(岁)男/女病例组5845.04±22.1943/15对照组6239.05±13.8545/17t/χ21.610.04P 0.110.85

2.2 两组基因型及等位基因分布情况

经PCR扩增和SNP分型分析可知，病例组共有两种基因型，其基因型AA、AG频率分别为86.21%和13.79%，而对照组则有3种基因型，其基因型AA、AG、GG频率分别为83.87%，12.90%，3.23%。两组基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05,见表2)。

2.3 PCR测序结果

DNA测序结果显示Rs4804803位点主要有3种不同基因型AA、AG和GG，由于测序时用的是下游引物，所以测序结果显示的等位基因恰好是反向互补序列(见图1-3)。

表2 肺结核病例和对照之间Rs4804803位点基因型与等位基因分布 例(%)

Table 2 Distribution of the genotype and allele frequencies of the Rs4804803 in PTB and controls cases(%)

基因型病例组对照组χ2POR(95%CI)基因型0.360.55AA50(86.21)52(83.87)1.00 AG+GG8(13.79)10(16.13)0.73(0.26-2.06)等位基因0.610.44A108(93.10)112(90.32)0.69(0.27-1.76)G8(6.90)12(9.68)

图1 肺结核病例和对照的Rs4804803位点的AA基因型序列Figure 1 AA genotype sequence of Rs4804803 in PTB and controls

图2 肺结核病例和对照的Rs4804803位点的AG基因型序列Figure 2 AG genotype sequence of Rs4804803 in PTB and controls

3 讨论

CD209基因的编码蛋白为C凝集素，它是人类免疫细胞识别结核分支杆菌的重要受体蛋白，可以作为细胞表面黏附分子识别进入人体的结核分支杆菌。该基因启动子区的Rs4804803位点多态性与结核的易感性之间的关系没有定论，Barreiro等[3]对南非人群的一项队列研究发现，336G基因型为肺结核的保护因素，同时也提到非洲人群G基因的突变率要高于亚洲、欧洲和美洲人群。Vannberg等[4]在大样本病例对照研究中也发现，336G是非洲人群结核保护因素。但是国内的庄斌等[5]却发现CD209基因-336位点GG基因型可能是中国汉族人群的肺结核易感基因型。Naderi等[6]对伊朗人群研究发现，CD209基因Rs4804803位点多态性可以增加患肺结核的危险性。一项对巴西人群的病例对照研究[7]同样发现，-336A/G SNPs与肺结核有一定的相关性，等位基因G为肺结核的保护因素。Yi等[8]通过meta分析，发现-336A/G多态性可以增加亚洲人群患结核的危险性，但是在整个遗传模型中与结核病的发病无关。

本研究发现，在中国汉族人群中，Rs4804803位点多态性与结核的发病无关，这与Zheng等[9]在中国汉族人群中的研究结论一致。除Rs4804803位点外，CD209基因与结核有关的其他位点研究比较多的是Rs735239(-871A/G)，除此之外，Kobayashi等[10]发现CD209基因的Rs735240位点与印尼人群结核发病有关。本研究结果显示，肺结核组只有2种基因型，而健康对照组有3种基因型，虽然总体差异无统计学意义，但主要原因可能与样本含量太少有关，由于经费问题，所以本研究只选取了一个SNP位点，样本例数也偏少，所以需要增大样本含量，在大人群中验证该基因与肺结核易感性的确切关系。

图3 肺结核病例和对照的Rs4804803位点的GG基因型序列Figure 3 GG genotype sequence of Rs4804803 in PTB and controls

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Association between CD209 Rs4804803 gene polymorphism and susceptibility of pulmonary tuberculosis

WANG Binghua1,ZHANG Ruimei2,CHENG Song2, XI Xiangyu2*

(1DepartmentofEpidemiologyandHygieneStatistics,XuzhouMedicalUniversity,Xuzhou221004,China;2DepartmentofTuberculosis,XuzhouInfectiousDiseaseHospital;*Correspondingauthor,E-mail：xxy1891@163.com)

ObjectiveTo evaluate the association between CD209 Rs4804803 gene polymorphism and susceptibility of pulmonary tuberculosis(PTB) in Han population of China.MethodsThis case-control study was performed on 58 PTB patients and 62 healthy individuals. CD209 gene Rs4804803 DNA sequence was detected by the ABI prism 310 sequenator, and SNP gene type was analyzed using GeneMapper4.1 technology.ResultsThe genotype frequency of Rs4804803 in PTB was 86.21% for AA, 13.79% for AG, 0 for GG, while the frequency of Rs4804803 in controls was 83.87% for AA,12.90 for AG,3.23% for GG.There was no significant difference in the genotype frequency of Rs4804803 between PTB and controls(P>0.05).ConclusionThe results suggest that CD209 Rs4804803 gene polymorphism may not be associated with PTB.

CD209 gene； polymorphism； pulmonary tuberculosis

徐州市科技局社会发展基金资助项目(KC14SH054)

王炳花，女，1981-08生，硕士，讲师，E-mail:beyond0830@163.com

2016-08-29

R521

A

1007-6611(2016)11-0998-03

10.13753/j.issn.1007-6611.2016.11.009