澜沧江水生丝孢菌资源调查*

保旦凤，唐松明，王如潇，苏锡钧，苏鸿雁

(1.大理大学农学与生物科学学院，云南 大理 671003；2.大理大学基础医学院,云南 大理 671000)



澜沧江水生丝孢菌资源调查*

保旦凤1，唐松明2，王如潇2，苏锡钧2，苏鸿雁*

(1.大理大学农学与生物科学学院，云南 大理 671003；2.大理大学基础医学院,云南 大理 671000)

目的：对澜沧江(中排乡北-云岭乡北，海拔1554m―2003m)水生丝孢菌资源及其多样性进行调查。方法：2015年3月从澜沧江支流及入江口采集沉水腐木700份，采用保湿培养的方法对水生真菌进行培养，基于形态学特征对水生丝孢菌进行鉴定。结果：分离获得水生丝孢菌88种，通过形态学鉴定，鉴定出水生丝孢菌36属58种，30种鉴定到属，未鉴定到种。结论：澜沧江水生丝孢菌资源丰富，物种多样性较高，其中Sporoschismasaccardoi(1.86%)、Periconiaatra(1.86%)出现频率相对较高。海拔对水生丝孢菌多样性有影响。

水生丝孢菌；澜沧江；资源调查；多样性

1.前言

淡水真菌(Freshwater fungi)是指整个生活史或生活史部分阶段依赖于淡水环境的真菌，是一个生态复合群，具有丰富的多样性[1]。它包含子囊菌及其无性型、担子菌、壶菌、卵菌、接合菌等[2]。水生真菌在有机物降解和水生生态系统营养循环中起着重要作用[3,4]，主要是分解水体中植物残体、纤维素和木质素含量高的有机质，并被水生动物取食进入食物链[5,6,7]，亦可以分解一些动物组织。水生木栖真菌在木材分解过程中很重要，因为他们产生各种木材分解酶从而使木头形成软腐洞[4,6,8]。

丝孢类真菌(Hyphomycetes)是一类菌丝体发达，呈絮状或绒状，有丝分裂产孢的真菌，是无性真菌中的重要的类群[9]。丝孢真菌菌丝体发达，有丝分裂产生分生孢子，生存环境较为广泛，特别是凋落的腐枝叶中蕴含着大量的丝孢菌物种资源。自从Igold在1942年首次报道了水生丝孢菌后，引起了世界上的真菌学家的极大兴趣和广泛研究。我国水生真菌的研究始于20世纪80年代。杨发蓉在研究云南“洱海湖体真菌类群分布的研究”中，曾发现一种水生丝孢菌—刚毛枝孢，这是我国水生丝孢菌报道的首例[10]。直到本世纪，蔡磊[11]、胡殿明[12]、苏鸿雁[13]等人对云南部分地区淡水真菌进行研究，才报道了大量的子囊菌及其无性型。到2008年为止，已报道的水生丝孢菌有300多个种，分布在100多个属内[14]。

澜沧江-湄公河全长约4900公里，流经柬埔寨、越南、老挝、缅甸、泰国和我国云南省，上游澜沧江，发源于青藏高原的唐古拉山，流出中国后始称湄公河(Mekong River)。该区域总面积256.86万平方公里，总人口约3.2亿。澜沧江地处全球34个生物多样性热点地区，是欧亚大陆生物群落最富集的地区。而迄今为止，还没有学者对澜沧江水生丝孢菌资源进行过全面的调查。本项目主要对部分澜沧江段(中排乡北-云岭乡北，海拔1554m―2003m)水生丝孢菌资源及其多样性进行调查分析。

2.材料和方法

2.1沉水腐木的采集

2015年3月分别沿澜沧江(中排乡北-云岭乡北，海拔1554m―2003m)下游往上游随机采集腐木，选择浸泡时间较长，腐烂程度良好(以手指可以轻松捏陷、树皮脱落)，直径1-5厘米、长20-30厘米的腐木各50份。采集好的腐木装入自封塑料袋中，记录采样时间、地点，带回实验室进行保湿培养。

2.2培养基

PDA培养基:马铃薯200g，葡萄糖20g，琼脂18g，蒸馏水1000mL。

MEA培养基:麦芽浸膏30g，大豆蛋白胨3g，琼脂18g，蒸馏水1000mL。

WA培养基:琼脂条18g，蒸馏水1000mL。

以上培养基经高压蒸汽灭菌(121℃, 20min)后冷却至50℃(以不烫手为宜)时加入终浓度为100μg/mL氨苄青霉素混匀，倒入平板备用。

2.3样品的观察

保湿培养一周后，将样品置于GL-99BI连续变倍体视镜下进行观察，在所观察到的目标菌株附近插上大头针作为标记。对所观察到的丝孢菌用Nikon-SMZ1000进行外部形态拍照。以无菌水、甘油等作为浮载剂，对所观察到的真菌进行制片，在OLYMPUS BX51显微镜下进行绘图、拍照、测量。

2.4水生丝孢菌的单孢分离

在体式镜下锁定目标菌株，用削尖的无菌牙签将分生孢子挑取下来，转移到WA培养基上，保证每皿至少有7个分生孢子。室温培养，24h后进行观察，将萌发的孢子转接到PDA培养基或MEA培养基上，用保鲜膜封口，室温培养；同时挑取萌发的孢子制片，用OLYMPUS BX51显微镜拍照。以上操作均在无菌条件下进行。每周定期检查菌落的生长情况，若发现污染及时纯化。

2.5拼图

使用Photoshop软件对菌种的外部形态和微观结构图片进行拼图。

2.6形态学鉴定

对真菌在基质上的着生情况、菌丝、孢子梗、产孢结构、分生孢子着生情况及分生孢子形态等特征进行描述，根据形态特征进行分类，主要参照相关文献[15-17]。

3.结果与讨论

3.1澜沧江水生真菌多样性

对采集的700份沉水腐木在实验室进行保湿培养，一周后开始不间断观察，采用形态学分类方法进行分类鉴定，鉴定出水生丝孢菌36属58种，其中30种鉴定到属，未鉴定到种。澜沧江中常见种为Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，检出率分别为1.86%，1.86%。水生丝孢菌的结果统计如表1所示。

3.2澜沧江水生丝孢菌各海拔内的分布情况

由表2可以看出海拔在1500―1600m之间的水生丝孢菌有13属18种，分别占总检出属数和总检出种数的14.44%和14.4%，1600―1700m间有36属53种，分别占总检出属数和总检出种数的40%和42.4%，1700―1800m间有27属37种，分别占总检出属数和总检出种数的30%和29.6%，1800―1900m间有9属12种分别占总检出属数和总检出种数的10%和9.6%，1900―2000m间有5属5种，分别占总检出属数和总检出种数的5.56%和4%。由该数据可以看出1600―1700m之间的水生丝孢菌多样性最为丰富，1900―2000m之间水生丝孢菌多样性最低。

表1 澜沧江水生丝孢菌资源调查结果统计

(注：检出率指被检样本总数中某物种出现的百分率，检出率(%)=(某个物种检出次数/样本总数)×100%。)

表2 澜沧江水生丝孢菌各海拔内的分布情况

3.3讨论

影响水生真菌群落及其多样性的因素有很多，如温度[18]、植被[19―20]、气候带[21―23]、水污染[20]、人为干扰[24]、真菌生长基质[25]等。此次研究选取的为澜沧江不同海拔的地点，共鉴定出水生丝孢菌36属58种，30种鉴定到属，未鉴定到种，其中常见种为Sporoschismasaccardoi、Periconiaatra，检出率分别为1.86%，1.86%。通过数据分析，海拔为1600―1700m之间的水生丝孢菌的多样性最为丰富，1900―2000m之间的水生丝孢菌多样性最低，说明不同海拔水生丝孢菌多样性不同，而且不同海拔的群落结构也不同，这和Sherear[26]2015年的研究结果一致。

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(责任编辑 徐成东)

Investigation on the Resources of Freshwater Hyphomycetes from the Lancang River

BAO Danfeng, TANG Songming, WANG Ruxiao, SU Xijun & SU Hongyun

(CollegeofAgricultureandBiologicalSciences,DaliUniversity,Dali, 671003,YunnanProvince;CollegeofAgricultureandBiologySciences,DaliUniversity,Dali, 671000,YunnanProvince)

Objective: To investigate diversity and resourses of hyphomycetes in Lancang River(middle row rural North-North Yunling Township, altitude 1554m-2003m). Method: In March 2015 collected from tributaries of the Lancang River and the estuary submerged rotten wood 700 samples, using the moisturizing incubation method to incubate the freshwater hyphomycetes and identified them under the morphological characters. Results: Isolated hyphomycetes 88 kinds of raw silk cinerea, under the morphological characters, the investigation indicated that there are 36 genera 58 species of hyphomycetes, 30 species not identified . Conclusion: The rich resources of Lancang River Hyphomycetes silk cinerea, highspecies diversity,whichSporoschismasaccardoi,Periconiaatrafrequency of relatively high detection rate of 1.86%, 1.86% respectively. Altitude of raw silk water sp diversity affected

Lancang River; Hyphomycetes; Resourse investigated; Diversity

国家自然科学基金项目，项目编号：31460015；云南省中青年学术技术带头人后备人才培养计划资助项目，项目编号：2012HB-042。

2016 - 06 - 07

保旦凤(1994―)，女，在读本科生，研究方向：微生物及疾病。

苏鸿雁(1967―)，女，教授，研究方向：菌物学。

Q949.323.2

A

1671 - 7406(2016)09 - 0033 - 06