茶叶种类及添加量对斑点叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指标的影响

岳鼎鼎 宛晓春，周裔彬 杨严鸥，张建立 桑八一，张尧北平

(安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036) 安徽农业大学茶与食品科技学院，农业部茶叶生物技术重点开放实验室，安徽合肥230036 (安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036) 安徽农业大学茶与食品科技学院，农业部茶叶生物技术重点开放实验室，安徽合肥230036



茶叶种类及添加量对斑点叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指标的影响

岳鼎鼎 宛晓春，周裔彬 杨严鸥，张建立 桑八一，张尧北平

(安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036) 安徽农业大学茶与食品科技学院，农业部茶叶生物技术重点开放实验室，安徽合肥230036 (安徽农业大学动物科技学院，安徽 合肥 230036) 安徽农业大学茶与食品科技学院，农业部茶叶生物技术重点开放实验室，安徽合肥230036

选择屏山炒青、霍山黄芽、黄山毛峰、龙井4种非发酵茶和祁门红茶、普洱茶2种发酵茶，分别按1%和2%添加量加入斑点叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)基础饲料中，进行为期8周的养殖试验。试验结束后，每箱随机捞取7尾试验鱼，测定各组鱼体肝脏组织的谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)活性；然后降低水位，对每箱剩余的23尾试验鱼进行3d的拥挤胁迫，再每箱随机捞取7尾测定肝脏组织的3项指标。结果显示：龙井(1%、2%组)在胁迫前可显著提高GSH含量，霍山黄芽(1%、2%组)和祁门红茶(1%组)在胁迫后提高GSH含量的作用更为显著；胁迫前，所有茶叶都不能提高GSH-Px活力；胁迫后，1%屏山炒青、霍山黄芽、祁门红茶组和2%霍山黄芽、龙井组可使GSH-Px活力显著高于对照组；龙井(1%组)在胁迫前能够显著提高GR活力；胁迫后，多数1%组能显著提高GR活力，2%组中，霍山黄芽和龙井组显著高于对照组。结果表明：茶叶可提高GSH含量以及GSH-Px与GR活性，这种提高主要是在胁迫后体现出来，其中霍山黄芽、龙井和祁门红茶的效果更为明显；2种添加量中，1%添加量效果更为明显。

斑点叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)；茶叶；谷胱甘肽抗氧化

谷胱甘肽抗氧化体系是生物体抗氧化体系的重要组成部分，其主要指标包括还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)等[1,2]。GSH是生物体内重要的抗氧化剂，能够清除活性氧自由基[3]。GSH-Px是清除过氧化氢和氢过氧化物的重要过氧化物酶，并且是肝胰腺中最敏感的抗氧化酶[4]。GR能将GSSG催化反应成GSH[5]，GR通过保持较高的GSH/GSSG比率在维持细胞内稳定的氧化还原水平中具有重要作用[6]。茶叶具有抗氧化的功能[7,8]，并且可作为添加剂应用于饲料中[9]。但关于茶叶对鱼类的谷胱甘肽抗氧化体系影响的研究目前还很缺乏。本研究以斑点叉尾鮰(Ietaluruspunetaus)为对象，通过在日粮中按不同添加量分别添加6种不同品种的茶末，测定斑点叉尾鮰肝脏的GSH含量和GSH-Px、GR活性的变化，探讨茶叶对斑点叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化体系指标的影响，以期为茶叶在斑点叉尾鮰饲料中的应用提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 试验鱼与饲料

试验鱼购自安徽合肥市巢湖三珍养殖场，运回后用2%食盐水消毒。试验开始前，将试验鱼在循环水水族箱内暂养2周，以适应试验环境和试验饲料。

暂养期间投喂基础饲料，基础饲料营养需求参考NRC(2011)，其干物质含量92.20%，粗蛋白含量35.20%，粗脂肪5.56%，灰分10.51%，能值17.52kJ/g；基础配方为：白鱼粉含量18.50%，豆粕40.00%，面粉28.50%，维生素C 0.11%，色拉油2.50%，维生素预混料0.39%，矿物盐预混料1.50%，磷酸二氢钙2.00%，氯化胆碱0.10%，α-淀粉4.00%，纤维素2.00%，甜菜碱0.40%。

试验设置1对照组，投喂基础饲料；设置12个试验组，各试验组分别投喂由6种茶叶(祁门红茶、黄山毛峰、屏山炒青、普洱、霍山黄芽和龙井茶)的加工下脚料碾磨成粉后分别按1%、2%的添加量加入基础饲料中配制而得的饲料。试验所用饲料通过颗粒机制成直径2mm颗粒，60℃烘干，过筛，4℃保存使用。

1.2 试验方法

养殖试验在循环水养鱼系统中进行。每种饲料设置3个重复，共使用39个水族箱，箱体尺寸为60cm×60cm×65cm(有效水体180L)，为灰色塑料制成。水源为曝气自来水，使用沸石、活性炭净化水体；真空泵提水，单个箱体循环水量为2.5L/min；罗茨鼓风机间断性充氧；自然水温，变化范围25.2～28.5℃；节能日光灯提供照明，光照时间8:30～20:00。选取体质健康、规格一致的个体进行试验。试验开始前，将试验鱼饥饿24h，然后随机捞取称重，每箱放入试验鱼30尾，每尾平均初始体重为1.80～1.90g。试验持续8周，每天9:00和15:00各投适量饲料1次，1h后回收残饵，70℃烘干。

1.3 指标测定方法

试验结束时，将鱼饥饿24h，再从每箱中随机捞取7尾，取内脏团，冰浴条件下分离肝胰脏，每条鱼切取部分肝脏，等量混合，-70℃冰箱保存。取样后将养殖箱水体高度从60cm降至10cm，充氧，拥挤胁迫3d，再从每箱随机捞取7尾，并按上述操作进行取样。肝脏样品谷胱甘肽(GSH)含量、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、谷胱甘肽还原酶(GR)的测定参考南京建成生物研究所生产的试剂盒方法进行测定。

1.4 数据处理

试验所得描述性统计值用平均值±标准差表示(Mean±SD)。采用单因素方差分析(ANOVA)后进行组间差异的多重比较(Duncan’s procedure)，显著性水平设置为α=0.05。胁迫前后比较用t检验表示，显著性水平设置为α=0.05。

2 结果与分析

2.1 对还原型谷胱甘肽(GSH)含量的影响

由表1可知，试验结束时，2种添加量的龙井组可显著提高斑点叉尾鮰肝脏的GSH含量(P<0.05)，其余各组与对照组无显著差异或显著低于对照组。胁迫后，除个别组外，2种添加量的各茶叶组GSH含量均高于对照组，其中一些组的差异达到显著水平(P<0.05)。胁迫前，茶叶组的GSH略低于对照组但无显著差异(P>0.05)；胁迫后，茶叶组GSH含量有明显提高，其中1%组提高了21.33%，2%组提高了15.70%。

表1 茶叶种类、添加量以及拥挤胁迫对斑点叉尾鮰鱼体肝脏GSH 含量的影响

注：*表示1%组与对照组差异显著(P<0.05)，#表示2%组与对照组差异显著(P<0.05)；XY不同表示同种茶叶的不同添加量之间有显著差异。表2、表3同。

2.2 对谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性影响

由表2可知，试验结束时，除了2%黄山毛峰组，其余各茶叶组的GSH-Px活性均显著低于对照组(P<0.05)。胁迫后，1%屏山炒青、霍山黄芽和祁门红茶组与2%霍山黄芽和龙井组可使GSH-Px活性显著高于对照组(P<0.05)。胁迫前，1%组的GSH-Px活性高于2%组，胁迫后与之相反，但均无显著差异。

表2 茶叶种类、添加量以及拥挤胁迫对斑点叉尾鮰鱼体肝脏GSH-Px活性的影响

2.3 对谷胱甘肽还原酶(GR)活性的影响

由表3可知，试验结束时,1%龙井组GR活性显著高于对照组(P<0.05)，其余各组与对照组无显著差异或显著低于对照组。胁迫后，1%茶叶组多数显著高于对照组(P<0.05)，2%组中，霍山黄芽和龙井组显著高于对照组(P<0.05)，其余各组与对照组无显著差异。胁迫前，茶叶组的GR活性与对照组无显著差异；胁迫后，茶叶组比对照组有所提高，1%组提高18.11%，2%组提高12.70%。

表3 茶叶种类、添加量以及拥挤胁迫对斑点叉尾鮰鱼体肝脏GR活性的影响

3 讨论

在生理条件下，谷胱甘肽主要以还原型(GSH)和氧化型(GSSG)2种形式存在,其中有活性的GSH约占90%[10]。本研究结果显示，6种茶叶对GSH含量的提升作用主要表现在胁迫后，这可能是因为胁迫导致活性氧自由基增加[11]，机体产生应激反应，GSH含量升高以清除大量产生的活性氧自由基。从添加量来看，1%添加量效果更好。类似的研究表明，罗非鱼(Oreochromisniloticus)饲料添加 333mg/kg茶多酚比666mg/kg对提升鱼体抗氧化能力更有帮助[12]；饲料中添加50～100mg/kg茶多酚可提高虹鳟(Oncorhynchusmykiss)[13]抗氧化能力，但超过500mg/kg时未产生有益作用。这说明添加有一个适宜的量。

本研究结果显示，茶叶导致鱼体肝脏的GSH-Px活性显著降低，在青鱼(Mylopharyngodonpiceus)[14]和异育银鲫(Carassiusauratusgibelio)[15]饲料中添加茶多酚，鱼体血清与肝脏GSH-Px活性也分别有显著下降。但本研究中，在胁迫后，部分茶叶组的GSH-Px活性获得提高，而且这种变化趋势与胁迫后GSH含量升高趋势一致，由于GSH-Px能催化 GSH 变为 GSSG[16]，这种一致性的变化可能与胁迫造成的应激反应有关。本研究中，从添加量来看，1%组效果更为明显。

GR能将GSSG催化反应成GSH[5,6]。本研究中，茶叶对GR活力的提高也主要是表现在胁迫后，与GSH含量的变化趋势基本一致，其中屏山炒青(1%组)、黄山毛峰(1%组)、普洱(1%组)和祁门红茶(1%组)以及霍山黄芽(2%组)和龙井(2%组)等有显著提高。可以看出，茶叶种类对作用效果有显著影响，这应该与不同茶叶中有效成分不同有关[17,18]。

本研究结果表明，茶叶可提高GSH含量、GSH-Px活性和GR活性，这种提高主要是在胁迫后体现出来，其中霍山黄芽、龙井和祁门红茶的效果更为明显；2种添加量中，1%添加量效果更为明显。

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2016-10-05

国际交流合作项目(2011DFG33280)。

岳鼎鼎(1993-)，男，硕士生，研究方向为水产动物营养与饲料。通信作者:杨严鸥，cdyyo@126.com。

S963;S965.128

A

1673-1409(2016)33-0032-05

[引著格式]岳鼎鼎，宛晓春，周裔彬，等.茶叶种类及添加量对斑点叉尾鮰谷胱甘肽抗氧化指标的影响[J].长江大学学报(自科版)，2016，13(33)：32～36.