薄层扫描法测定毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元的含量

赵 爽， 骆秀珍， 唐 瑶， 韦 朔， 古丽阿扎提·买合买提， 周晓英

(新疆医科大学药学院， 乌鲁木齐 830011)



薄层扫描法测定毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元的含量

赵 爽， 骆秀珍， 唐 瑶， 韦 朔， 古丽阿扎提·买合买提， 周晓英

(新疆医科大学药学院， 乌鲁木齐 830011)

目的 测定毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元的含量。方法 以氯仿-甲醇(10∶1)为展开剂，在高效薄层板上对毛头牛蒡子中的牛蒡苷及苷元进行分离，并以280 nm为检测波长对毛头牛蒡子进行扫描测定。结果 牛蒡苷和牛蒡苷元的线性范围分别为1.020～6.120、0.101～0.606 μg；加样回收率分别为99.71%和98.11%,毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元的含量分别为93.75 mg/g 和2.05 mg/g。结论 薄层扫描法简便、准确、重复性好，可用于测定毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元的含量。

毛头牛蒡子； 薄层扫描； 牛蒡苷； 苷元

毛头牛蒡(Arctium tomentosum Mill)在新疆分布广泛，是新疆特有的药用植物，其干燥成熟果实毛头牛蒡子在维吾尔医中用于多种疾病的治疗[1]。毛头牛蒡子中含有氨基酸、多糖、木脂素、脂肪油等多种化学成分[2-4]。有研究表明木脂素类化学成分具有抗肿瘤、抗炎等活性[5-7]。本研究采用薄层色谱扫描法测定毛头牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量，该法操作方便、快速，可为毛头牛蒡子的质量控制提供依据,现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 XS105型十万分之一电子天平(瑞士梅特勒-托利多)，RE-52A旋转蒸发仪器(上海亚荣生化仪器厂)，Linomat5薄层色谱点样器(CAMAG)，薄层色谱点样针(CAMAG)，薄层色谱照相仪(REPROSTAR3)，TLC SCANNER3薄层扫描仪(CAMAG)，薄层板加热器(CAMAG)，薄层色谱展开缸(上海信宜仪器厂)，超声清洗仪(SK3200H，上海汉克科学仪器有限公司)。

1.2 试药 毛头牛蒡子采集于新疆阿勒泰地区，经新疆医科大学中医学院李永和主任药师鉴定为毛头牛蒡(Arctium tomentosum Mill)的干燥成熟果实，牛蒡子苷对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号：090516)，牛蒡苷元对照品(上海融禾医药科技有限公司，批号：090712)，甲醇、氯仿均为分析纯试剂(天津市富宇精细化工有限公司)。

2 方法与结果

2.1 样品溶液的制备 精密称取毛头牛蒡子粉末0.300 0 g用石油醚回流脱脂后,将毛头牛蒡子粉末置于锥形瓶中，加入甲醇30 mL，超声提取30 min，将提取液过滤，蒸干，残渣加适量甲醇溶解，定容至10 mL，过0.22 μm微孔滤膜，备用。

2.2 对照品溶液的配制 精密称取牛蒡苷0.010 2 g和牛蒡苷元0.010 1 g，分别加甲醇溶解定容至5 mL。吸取牛蒡苷和牛蒡苷元对照品溶液各5 mL和0.5mL，加甲醇定容至10 mL，作为混合对照品溶液，备用(其中牛蒡苷和牛蒡苷元的浓度分别为1.020 mg/mL和0.101mg/mL)。

2.3 薄层层析及薄层扫描条件 高效硅胶G板(安徽良臣)预先在110℃活化30 min，冷却至室温备用。分别取对照品溶液3 μL、样品溶液2 μL点于薄层板，以氯仿∶甲醇(10∶1)为展开剂展开，取出晾干，在365 nm下扫描。检测波长：280 nm，带宽：6 mm，狭缝：4.00 mm×0.3 mm，扫描速度：20 mm/s，扫描结果见图1～3。

图1 混合对照品薄层扫描图

图2 毛头牛蒡子样品薄层扫描图

图3 毛头牛蒡子样品及混合对照品的3D扫描图

2.4 线性关系考察 精密吸取混合对照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 μL点于同一高效硅胶G板，按“2.3”项下方法测定吸光度积分值，以混合对照品点样量为自变量(X)，峰面积积分值为因变量(Y)，进行线性回归，得牛蒡苷回归方程：Y=2 131X+1 504.7，r=0.999 3；牛蒡苷元回归方程：Y=775.04X-255.37，r=0.999 4。结果表明，牛蒡苷和牛蒡苷元分别在1.020～6.120 μg和0.101～0.606 μg范围内线性关系良好。

2.5 精密度试验 精密吸取混合对照品溶液2、4、6 μL，在1 d内分别测定相同点样量的对照品6份，为日内精密度；分别测定相同点样量的样品各6份，连续测定3 d，为日间精密度，操作方法同“2.3”项下。结果牛蒡苷和牛蒡苷元日内精密度的RSD分别为1.82%、2.36%，牛蒡苷和牛蒡苷元日间精密度的RSD分别为1.14%、1.34%，表明精密度良好。

2.6 稳定性试验 精密吸取供试品溶液，按“2.3”项下方法处理，于0、2、4、6、8、12、24、48 h测定结果，牛蒡苷和牛蒡苷元峰面积积分值的RSD(n=6)分别为1.54%、1.92%，表明供试品溶液在48 h内稳定性较好。

2.7 稳健性试验 稳健性试验是通过改变某个特定的色谱参数，进行重复的试验，来考察结果是否随着色谱参数的变化而产生改变。本试验通过对展开剂的组成、饱和时间、展开剂的体积、相对湿度、扫描时间及展开距离进行微小改变来考察稳健性。结果这些改变对牛蒡苷和牛蒡苷元的影响较小，RSD为0.94%～2.58%，RSD均<3%，表明试验稳健性较好，见表1。

表1 稳健性试验结果(n=6)

2.8 回收率试验 取已知含量的牛蒡苷和牛蒡苷元的毛头牛蒡子粉末5份，分别加入牛蒡苷9.376 mg、牛蒡苷元0.204 mg，加标样品按“2.1”项下方法提取，按“2.3”项下方法展开及测定。结果牛蒡苷的平均回收率为99.71%，RSD=1.19%；牛蒡苷元的平均回收率为98.11%，RSD=1.38%(n=5)。结果表明，该方法用于测定牛蒡苷和牛蒡苷元含量准确可靠。

2.9 检测限和定量限 精密量取一定量的牛蒡苷和牛蒡苷元对照品，用甲醇稀释成每1 mL含0.005 1 mg牛蒡苷和牛蒡苷元0.004 0 mg的溶液，点于同一高效硅胶G板，分别点样1、2、3、4、5 μL，每个点点3次，按“2.3”项下条件展开，扫描。信噪比S/N为3∶1时的样品浓度为检测限，信噪比S/N为10∶1时的样品浓度为定量限。结果牛蒡苷的检测限为15.3 ng，定量限为51.0 ng；牛蒡苷元的检测限为12.0 ng，定量限为40.0 ng。

2.10 样品含量的测定 按“2.1”项下方法对毛头牛蒡子样品进行提取，按“2.3”项下方法展开及测定，计算样品中牛蒡苷和牛蒡苷元的含量，结果牛蒡苷和牛蒡苷元的含量分别为93.75 mg/g和 2.05 mg/g，见表2。

表2 毛头牛蒡子中牛蒡苷和牛蒡苷元含量(n=3)

3 讨论

在供试品溶液的制备过程中，由于毛头牛蒡子中含有大量的脂肪油，故在提取前需进行脱脂，避免干扰，故采用石油醚回流脱脂。本研究考察了氯仿-甲醇、氯仿-甲醇-冰乙酸、氯仿-甲醇-水-甲酸-冰乙酸3种展开系统对毛头牛蒡子中的牛蒡子苷及苷元的展开效果，结果氯仿-甲醇系统展开效果较好，且氯仿-甲醇比例为10∶1时展开所得薄层色谱图分离效果最好，故采用此展开条件。方法学验证结果表明，薄层色谱扫描法测定毛头牛蒡子中的牛蒡苷和牛蒡苷元，操作简单、方便，线性、精密度、稳定性、稳健性均良好，可用于毛头牛蒡子中牛蒡苷和苷元含量的测定。

[1] 骆秀珍,张浩科,周晓英,等.毛头牛蒡子的红外光谱分析及薄层色谱鉴别[J].西北药学杂志,2015,30(4):352-354.

[2] 季志红,阻力皮亚·艾山,周晓英.大孔吸附树脂分离纯化毛头牛蒡子多糖的工艺研究[J]. 环球中医药,2013,6(2):81-83.

[3] 杜为军,马翠娇,周晓英.毛头牛蒡子中总木脂素含量测定[J].新疆师范大学学报:自然科学版,2013,32(4):41-43.

[4] 周晓英,季志红,刘露,等.维药毛头牛蒡子脂肪酸成分的GC-MS分析[J].新疆医科大学学报,2013,36(4):464-471.

[5] 苏勤勇,李晓梅,姚景春,等.牛蒡子苷元对大鼠脑胶质瘤的作用及初步作用机制探讨[J].中国药理学通报,2015,31 (6):805-809.

[6] Wu JG,Wu JR,Sun LN, et al. Ameliorative effects of arctiin from Arctium lappa on experimental glomerulonephritis in rats[J]. J of Phytomed, 2009, 16(11): 1033-1041.

[7] Wu X, Dou YN, Yang Y, et al. Arctigenin exerts anti-colitis efficacy through inhibiting the differentiation of Th1 and Th17 cellsviaan mTORC1-dependent pathway[J]. Bioch Pharm, 2015, 96(11): 323-336.

(本文编辑 施洋)

Determination of arctiin and arctigenin in Arctium tomentosum Mill seeds with TLCS

ZHAO Shuang, LUO Xiuzhen， TANG Yao, WEI Shuo, Gulazat Mahmut, ZHOU Xiaoying

(PharmacyCollege，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi830011，China)

Objective To set up the contents determination method of arctiin and arctigenin in Arctium tomentosum Mill seeds. Methods A TLCS method was used. The developer was consisted of chloroform and n-butyl alcohol of 10∶1, arctiin and arctigenin were isolated by high performance thin layer plate and scanned at 280 nm. Results The liner ranges of calibration curves were 1.020-6.120 mg/mL and 0.101-0.606 mg/mL for arctiin and arctigenin respectively. The sample recovery rate of arctiin and arctigenin were 99.71% and 98.11% respectively. Contents of arctiin and arctigenin in Arctium tomentosum Mill seeds were 93.75 mg/g and 2.05 mg/g respectively. Conclusion The method is simple, accurate, reproducible and can be used to determine the contents of arctiin and arctigenin of Arctium tomentosum mill.

ArctiumtomentosumMill seeds; TLCS; arctiin; arctigenin

新疆医科大学第十期大学生创新性实验计划项目(201510760020)

赵 爽(1995-)，女，在读本科，研究方向：天然产物的活性筛选。

周晓英，女，硕士，教授，硕士生导师，研究方向：天然产物的质量控制与活性筛选，E-mail：xy_zhou@qq.com。

R914

A

1009-5551(2016)12-1566-03

10.3969/j.issn.1009-5551.2016.12.020

20196-4-16]