胃癌组织TET2、ANXA2表达及意义

杨邵峰

(济宁市第一人民医院，山东济宁272002)



胃癌组织TET2、ANXA2表达及意义

杨邵峰

(济宁市第一人民医院，山东济宁272002)

目的 探讨TET癌基因家族成员2(TET2)、膜联蛋白A2(ANXA2)在胃癌发生、发展中的作用。方法 取67例原发性胃癌患者术后癌组织标本(病理组织检查确诊为胃腺癌)及其癌旁组织标本(距离癌组织边界>5 cm)。采用免疫组化法检测TET2、ANXA2阳性表达率；分析癌组织TET2、ANXA2表达与患者临床病理参数的关系。结果 胃癌及癌旁组织TET2阳性表达率分别为34.33%(23/67)、62.69%(42/67)，两者比较P<0.05；ANXA2阳性表达率分别为67.15%(45/67)、31.34%(21/67)，两者比较P<0.05。胃癌组织TET2、ANXA2阳性表达与分化程度、TNM分期有关(P均<0.05)，与患者性别、年龄、肿瘤直径均无关(P均>0.05)。结论 胃癌组织中TET2表达降低、ANXA2表达升高，二者的表达变化参与了胃癌的发生、发展。

胃癌；TET癌基因家族成员2；膜联蛋白A2

近年来流行病学调查发现，我国胃癌发病率呈上升趋势。胃癌的发生是一个多因素、多步骤的进行性发展过程，涉及多种癌基因激活、染色体杂合缺失、抑癌基因失活等[1,2]。研究发现，TET癌基因家族成员2(TET2)、膜联蛋白A2(ANXA2)与肿瘤的发生、发展具有一定相关性，但二者与胃癌发生、发展的关系报道较少[3～6]。本研究探讨胃癌组织TET2、ANXA2表达及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 选取2014年9月～2015年9月济宁市第一人民医院收治的原发性胃癌患者67例，均经手术治疗，术后病理组织检查进一步确诊为胃腺癌。其中男43例、女24例，年龄30～78(54.72±7.48)岁；肿瘤直径<5 cm 37例，≥5 cm 30例；组织分化程度为高分化10例，中分化21例，低分化36例；临床分期Ⅰ～Ⅱ期27例，Ⅲ～Ⅳ期40例。术中分别取胃癌组织标本及距离癌组织边界>5 cm的癌旁组织标本。

1.2 胃癌组织及癌旁组织TET2、ANXA2表达检测 采用免疫组化法。胃癌和癌旁组织标本均经4%中性缓冲甲醛固定，常规石蜡包埋，轮转式石蜡切片机切片，分别加入兔抗人TET2多克隆抗体、兔抗人ANXA2多克隆抗体(稀释倍数均为1∶1 000)，进行免疫组化染色，具体步骤参照试剂盒说明书。以PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果判定标准：TET2在胃癌组织中主要表达于细胞核，癌旁组织中主要表达于细胞质，以出现棕黄色颗粒状为阳性；ANXA2在胃癌组织中主要表达于细胞膜，癌旁组织中主要表达于细胞质，以出现棕黄色颗粒为阳性。在400倍光学显微镜下随机选取5个不同视野，判断阳性表达细胞着色强度、计数阳性细胞百分率。阳性表达细胞着色强度：无着色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；阳性细胞百分率：阳性细胞<5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，>75%为4分。以阳性细胞着色强度与百分率的乘积判断结果，>1为阳性，≤1为阴性。

1.3 相关性分析 采用Spearson相关分析法分析胃癌组织TET2、ANXA2表达与患者临床病理参数的关系，以及TET2、ANXA2表达的关系。

1.4 统计学方法 采用SPSS22.0统计软件。计数资料比较采用Fisher确切概率或χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 胃癌及癌旁组织TET2、ANXA2表达 胃癌组织TET2阳性表达率为34.33%(23/67)、ANXA2阳性表达率为67.15%(45/67)，癌旁组织分别为62.69%(42/67)、31.34%(21/67)，两者比较P均<0.05。

2.2 胃癌组织TET2、ANXA2表达与患者临床病理特征的关系 胃癌组织TET2、ANXA2阳性表达与肿瘤分化程度、TNM分期均有关(P<0.05或<0.01)，与患者性别、年龄、肿瘤直径均无关(P均>0.05)。见表1。

表1 胃癌组织TET2、ANXA2表达与患者临床病理特征的关系(例)

2.3 胃癌组织中TET2与ANXA2表达的相关性 胃癌组织中TET2与ANXA2表达呈负相关性(r=-0.292，P<0.05)。

3 讨论

近年来，表观遗传学修饰在胃癌发生过程中所扮演的角色逐渐成为研究的热点。DNA胞嘧啶甲基化是表观遗传学的重要组成部分，在基因表达调节、X染色体失活、基因组印记和癌症发生等方面均发挥重要的调节作用[3]。TET蛋白家族具有调节DNA胞嘧啶甲基化的作用[4]。人TET蛋白家族共有3个成员，分别为TET1、TET2 和TET3。TET1主要在胎儿组织和干细胞中表达，TET2在造血系统中含量较高，TET3则在结肠和肌肉等组织中表达。有研究显示，TET蛋白在肝癌、乳腺癌组织中表达缺失或下降[5]，其表达缺失或下降参与了肿瘤的发生、发展。在急性髓细胞样真性红细胞增多症、原发性骨髓纤维化、骨髓增生异常综合征、特发性血小板增多症、急性髓细胞样白血病患者机体内均发现TET2基因突变[6,7]。小鼠TET2基因表达下调可导致造血前体细胞向单核细胞/巨嗜细胞分化过程受阻，提示TET2是一种骨髓生成必需因子，其突变造成酶活性破坏，导致骨髓生成异常而引发肿瘤[8]。上述研究结果提示，TET蛋白可能一方面通过基因突变等本身结构改变影响其在肿瘤中的表达；另一方面，可能通过调控DNA甲基化/去甲基化循环而发挥抑癌基因的作用。

膜联蛋白(ANX)是一类在进化上保守的钙依赖性磷脂结合蛋白超家族，ANXA2是其中重要一员，全长14 000 bp，编码339个氨基酸，定位于人染色体15q21-q22，由13个外显子和12个内含子组成[9]。ANXA2广泛表达于内皮细胞、单核细胞、神经细胞等的细胞核和细胞质中，参与细胞增殖、分化、信号转导、胞吞胞吐作用、生长调节以及细胞运动迁移等多种生物学行为[10]。研究发现，在不同肿瘤组织中ANXA2表达不尽相同，提示在不同肿瘤发生、发展过程中ANXA2可能发挥不同作用。张彩霞等[11]研究结果显示，敲除ANXA2基因可抑制人结直肠癌细胞系caco2细胞的增殖与迁移能力，提示ANXA2在人结直肠癌发展过程中发挥癌基因作用。Zhong等[12]报道，在口腔上皮鳞状细胞癌组织中ANXA2蛋白表达上调，且与肿瘤临床分期呈负相关。Feng等[13]报道，食管癌组织ANXA2表达低于癌旁正常组织，且其表达与淋巴结转移及肿瘤组织分化程度相关。本研究结果显示，TET2在胃癌组织中的阳性表达率明显低于癌旁组织，ANXA2在胃癌组织中的阳性表达率明显高于癌旁组织，二者表达变化均与肿瘤分化程度、TNM分期有关，且胃癌组织中TET2与ANXA2表达呈负相关，提示TET2表达降低、ANXA2表达升高参与了胃癌的发生、发展；但两种因子的作用机制及二者内部之间的联系机制有待进一步探讨。

综上所述，胃癌组织中TET2表达降低、ANXA2表达增加，二者的表达变化参与了胃癌的发生、发展。

[1] 石岩岩,丁士刚.胃癌病因及发病机制的研究进展[J].中华临床医师杂志(电子版),2013,9(17):19-20.

[2] 王吉恒,张占东,孔烨,等.胃癌相关基因的研究进展[J].河南医学研究,2013,17(1):147-150.

[3] Dahl C, Grnbk K, Guldberg P. Advances in DNA methylation: 5-hydroxymethylcytosine revisited[J]. Clin Chim Acta, 2011,412(11-12):831-836.

[4] Loenarz C, Schofield CJ. Oxygenase catalyzed 5-methylcytosine Hydroxylation[J]. Chem Biol, 2009,16(6):580-583.

[5] 郭严,王斌,王军,等.TET蛋白家族和5-羟甲基胞嘧啶在肿瘤发病中的研究进展[J].医学综述,2015,21(6):1013-1015.

[6] 吴怡晨,凌志强.TET家族DNA羟化酶与5-hmC在肿瘤中的作用机制的研究进展[J].中国细胞生物学学报,2013,35(12):1806-1812.

[7] 王娜娜,王建业,史晓红,等.TET2 LMTK2和FAM84B基因与前列腺癌的关系[J].中华肿瘤杂志,2013,35(4):262-267.

[8] Ko M, Huang Y, Jankowska AM, et al. Impaired hydroxylation of 5-methylcytosine in myeloid cancers with mutant TET2[J]. Nature, 2010,468(7325):839-843.

[9] 谢蕊,李燕京,隋红,等.ANXA2调节胃癌细胞的增殖、侵袭和转移[J].临床与病理杂志,2015,35(13):78-79.

[10] 张志栋,李勇,赵群,等.胃癌组织膜联蛋白A2表达与肿瘤转移及预后的关系[J].中华实验外科杂志,2015,52(10):2542-2545.

[11] 张彩霞,武浩杰,奉艳,等.ANXA2对人结直肠癌caco2细胞行为及细胞骨架结构的调节[J].中国细胞生物学学报,2013,35(12):1741-1747.

[12] Zhong LP, Wei KJ, Yang X, et al. Increased expression of Annexin A2 in oral squamous cell carcinoma[J]. Arch Oral Binl, 2009,54(1):17-25.

[13] Feng JG, Liu Q, Qin X, et al. Clinicopathological pattern and Annexin A2 and Cd042 status in patients presenting with differentiation and lymphnode metastasis of esophageal squamous cell carcinomas[J]. Mol Binl Rep, 2012,39(2):1267-1274.

10.3969/j.issn.1002-266X.2016.36.031

R735.2

B

1002-266X(2016)36-0088-03

2016-04-06)