苦参碱联合胸腺五肽对胃癌放化疗大鼠免疫功能的影响

李雨欣，马 易，孙 哲

(中国医科大学附属第一医院，辽宁 沈阳 110001)



苦参碱联合胸腺五肽对胃癌放化疗大鼠免疫功能的影响

李雨欣，马 易，孙 哲

(中国医科大学附属第一医院，辽宁 沈阳 110001)

目的 探讨苦参碱联合胸腺五肽对胃癌行放化疗大鼠免疫功能的影响。方法将130只成功造模的胃癌大鼠随机分为对照组和观察组，每组65只。2组大鼠均进行放疗(10～12 Gy)、化疗(顺铂+5-氟尿嘧啶)，并同时给予胸腺五肽腹腔注射隔日1次，观察组大鼠在上述基础上给予苦参碱腹腔注射，连续15 d。观察2组大鼠干预前术后免疫功能的变化情况。结果 2组大鼠干预后血清CD3+、CD4+、自然杀伤细胞(NK)、IgG、IgM、IgA水平与CD4+/CD8+均较干预前明显降低(P均<0.05)，CD8+较干预前明显升高(P均<0.05)，但观察组各指标水平均明显优于对照组(P均<0.05)；2组大鼠干预后IL-2水平均明显低于干预前(P均<0.05)，IL-6水平明显高于干预前(P均<0.05)，但观察组变化较对照组更明显(P均<0.05)。结论 苦参碱联合胸腺五肽可明显改善行放化疗胃癌大鼠的免疫功能，为临床实践提供了一定的理论基础。

胃癌；苦参碱；胸腺五肽；放化疗；免疫功能

Key words: gastric cancer; Matrine; Thymopeptin; chemoradiotherapy; immune function

胃癌是发病率、病死率均较高的消化系统恶性肿瘤。临床上主要治疗方式是手术结合放化疗，手术为首选，但是对于一些中晚期无手术机会的患者只能采取放化疗治疗，而放化疗临床有效率仅为40%～50%，且不良反应较大，患者耐受性差，治疗的同时会破坏患者自身免疫功能[1-3]。苦参碱从苦参中提取，其主要通过激活肿瘤细胞凋亡相关基因来发挥抗肿瘤活性[4]。胸腺五肽是临床中常用的一种免疫增强剂，广泛应用于肿瘤的治疗[5]。本实验观察了苦参碱联合胸腺五肽对胃癌行放化疗大鼠免疫功能的影响，旨在为指导临床治疗提供依据。

1 实验资料

1.1 实验动物与胃癌细胞株 130只健康且性成熟的Wistar大鼠，由中国医科大学实验动物中心提供,动物合格证号:SCSK11-00-0005，周龄8～10周，雄鼠体质量230～250 g、雌鼠体质量210～230 g；人BGC823胃癌细胞株由上海市肿瘤研究所提供。造模前雌雄大鼠分开饲养，自由饮水取食，人工控温 20～26 ℃，12 h光照，12 h黑暗。

1.2 主要试剂 苦参碱(粉末，纯度>99%)由美国Sigma公司提供；胸腺五肽由深圳翰宇药业股份有限公司提供(5 mg/支，白色粉末状)；5-氟尿嘧啶(5-Fu)与顺铂均为齐鲁制药有限公司提供；酶联免疫法检测试剂盒(IL-2、IL-6)由美国Sigma公司提供；淋巴细胞分离液(Ficoll-hypque)为美国Sigma公司提供；IgGrl-FITC/IgGr2a-PE、CD3-FITC/ CD4-PE、CD3-FITC/ CD8-PE和FACS Lysing Solution溶血素为BD公司产品；IgG、IgM、IgA检测双色荧光试剂盒由美国BD公司提供。

1.3 主要仪器 AxSYM型全自动免疫发光分度仪与FACSCalibur流式细胞仪均为美国雅培公司产品。

1.4 方法

1.4.1 分组及造模 将130只大鼠随机分为2组：观察组65只，雄性33只，雌性32只；(8.85±1.32)周；体质量(244.54±26.45)g。对照组65只，雄性35只，雌性30只；(8.78±1.23)周；体质量(247.54±35.32)g。2组大鼠的周龄、雌雄比、体质量比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。均参照文献[6]方法造模：人BGC823胃癌细胞株传代培养后制成活细胞悬液(细胞浓度为 1.0×107mL-1)，在每只大鼠大腿内侧近腹股沟处皮下接种0.5 mL制作胃癌大鼠动物模型。

1.4.2 干预方案 2组大鼠均给予连续放化疗+胸腺五肽注射液治疗。放射剂量为10～12 Gy；化疗方案：第1天腹腔注射顺铂6 mg/(kg·d)，第10天注射5-氟尿嘧啶10 mg/(kg·d)，连续化疗15 d；同时每隔1 d给予腹腔注射胸腺五肽1 mg/kg。观察组在此基础上给予腹腔注射液苦参碱注射液1mg/(kg·d)溶解于生理盐水中腹腔注射。

1.5 检测指标 干预前后分别抽取2组大鼠静脉血3 mL，注入玻璃试管中，静置10 min，以3 000 r/min离心10 min，分离血清在-70 ℃超低温冰箱内保存待测，所取标本均在1周内测定。采用流式细胞仪细胞计数仪检测细胞免疫指标外周血T细胞亚群(CD3+、CD4+、CD8+)水平，用淋巴细胞分离液密度梯度离心法分离外周血有核细胞，外周血中有核细胞染色标记30 min，弃去上清液，冲洗2次后上机检测。采用免疫散射比浊法检测体液免疫指标免疫球蛋白(IgG、IgM、IgA)水平，采用酶联免疫法测定血清相关细胞因子IL-2、IL-6水平，均严格按试剂盒说明操作。

2 结 果

2.1 2组完成实验情况 对照组造模成功45只，失败20只；观察组成功47只，失败18只，2组造模成功率比较差异无统计学意义(2=0.149，P>0.05)。干预中对照组死亡5只，观察组死亡4只，2组大鼠干预过程中病死率比较差异无统计学意义(2=0.176，P>0.05)。最后完成实验的大鼠对照组40只，观察组43只。

2.2 2组干预前后细胞免疫功能比较 2组大鼠干预后血清CD3+、CD4+、自然杀伤细胞(NK)与CD4+/CD8+水平均较干预前明显降低(P均<0.05)，CD8+水平较干预前明显升高(P<0.05)；但观察组各指标均明显优于对照组(P均<0.05)。见表1。

表1 2组干预前后细胞免疫功能比较±s)

2.3 2组干预前后体液免疫功能比较 2组大鼠干预后IgG、IgM、IgA水平均较干预前明显降低(P均<0.05)，但观察组均明显优于对照组(P均<0.05)。见表2。

2.4 2组干预前后相关细胞因子水平比较 2组大鼠干预后IL-2水平均较干预前明显降低(P均<0.05)，IL-6水平较干预前明显升高(P均<0.05)，但观察组明显优于对照组(P均<0.05)。见表3。

3 讨 论

我国胃癌以胃体远端多发为主，近年来发病部位有逐渐向近端转移的趋势，病理类型主要以中低分化的腺癌为主，病理类型、分化程度决定着患者的预后好坏，发病部位变化的原因可能与饮食习惯向肉食方向改变有关[6]。对于失去手术机会的胃癌以放化疗为主，其中顺铂+5-氟尿嘧啶化疗是较经典的化疗方案，但存在着毒副反应大、患者不易耐受等弊端，骨髓抑制及胃肠道反应是其最主要的不良反应，限制了临床应用，影响治疗效果；且化疗药物的毒副反应损伤机体的免疫系统，导致自身抗肿瘤活力降低[7]；另外肿瘤细胞侵蚀周围组织可导致患者的营养代谢发生障碍，不利于患者恢复；且普通化疗只能杀灭一定数量的肿瘤细胞，但是对于微小病灶肿瘤细胞的杀灭功能却很弱[8]。

表2 2组干预前后体液免疫功能比较±s,g/L)

表3 2组干预前后相关细胞因子水平比较±s，pg/mL)

苦参碱是从中药苦参的干燥根中提取的一类生物活性物质，其具有较全面且较强的抗肿瘤活性，通过诱导肿瘤细胞分化凋亡来达到抗肿瘤目的，同时能抑制肿瘤的浸润和远处转移，抑制肿瘤新生血管的形成，还有一定的止痛效果，可减轻化疗药物的不良反应，增强宿主的自身免疫力与抗肿瘤活力，同时可降低肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，也可以用作肿瘤的预防性化疗[9]。胸腺五肽是人工化学合成的免疫调节剂，是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸片段，但具有胸腺生成素的活性，其可诱导T淋巴细胞分化，促进T淋巴细胞亚群发育成熟并活化，同时调节T淋巴细胞亚群的比例，使之趋于正常[10]。

机体免疫功能主要包括细胞免疫和体液免疫，放化疗可使两者发生功能异常。细胞免疫方面主要表现为T淋巴细胞亚群发生改变，具体表现为CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞以及NK细胞含量减少，而CD3+CD8+T淋巴细胞比例上升，CD4+/CD8+比例下降[11]。体液免疫方面主要表现为B淋巴细胞分泌的IgG、IgM、IgA免疫球蛋白含量降低[12]。IL-2是由活化的CD4+Th1细胞产生的具有广泛生物活性的细胞因子；IL-6是由活化的T细胞和成纤维细胞产生的淋巴因子，能使B细胞前体成为产生抗体的细胞，和集落刺激因子协同，促进原始骨髓源细胞的生长和分化，增强自然杀伤细胞的裂解功能。通过检测IL-2、IL-6水平，可了解机体免疫状态。

本实验结果显示，2组大鼠干预后血清CD3+、CD4+、NK、IgG、IgM、IgA水平与CD4+/CD8+均较干预前明显降低，CD8+较干预前明显升高，但观察组各指标水平均明显优于对照组；2组大鼠干预后IL-2水平均明显低于干预前，IL-6水平明显高于干预前，但观察组IL-2水平明显高于对照组，IL-6水平明显低于对照组。

综上所述，苦参碱联合胸腺五肽可明显调节放化疗胃癌大鼠的机体免疫功能，为今后临床工作提供了很好的指导意义。但是胃癌患者往往存在营养不良，也可以导致机体免疫功能的进一步降低，而本实验没有考虑营养因素对实验结果的影响，今后将进一步研究放化疗过程中给予营养支持及其免疫调节剂共同作用下胃癌大鼠的免疫功能及其营养状态。

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Effects of Matrine combined with Thymopentin on immune function of rats with gastric cancer treated by chemoradiotherapy

LI Yuxin, MA Yi, SUN Zhe

(The First Affiliated Hospital of China Medical University, Shenyang 110001, Liaoning, China)

Objective It is to investigate the effects of Matrine combined with Thymopeptin on immune function of rats with gastric cancer treated by chemoradiotherapy. Methods 130 rats which were successfully modelled gastric cancer were randomly divided into two groups: observation group (n=65) and the control group (n=65). All the rats were given radiation treatment (10-12 Gy), chemotherapy (cis-platinum+5-fluorouracil), at the same time given Thymopenptin intraperitoneal injection once every two days. Whereas the rats in the observation group were given Matrine on this basic, the course of treatment were 15 d. The index of immue function in the two groups of rats were compared before and after treatment. Results After treatment, the levels of CD3+, CD4+, NK, IgG, IgM, IgA, IL-2 and CD4+/CD8+were markedly lower (allP<0.05) but the levels of CD8+and IL-6 were markedly higher than before treatment in two groups (allP<0.05); the level of CD3+, CD4+, NK, IgG, IgM, IgA, IL-2 and CD4+/CD8+of the observation group were significantly higher but the level of CD8+and IL-6 were significantly lower than those of the control group (allP<0.05). Conclusion Matrine combined with Thymopeptin can improve the immune function in rats with gastric cancer treated by chemoradiotherapy, and provide certain theoretical basis for clinical practice.

李雨欣，女，研究方向为胃癌辅助治疗。

孙哲，E-mail:164696305@qq.com

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.18.007

R-332

A

1008-8849(2016)18-1961-03

2015-12-15