祛瘀生新胶囊挥发性部位研究

郭 冬，王洪波，杜 霞，张 红，李彤晖

(陕西省中医药研究院，西安 710003)



祛瘀生新胶囊挥发性部位研究

郭 冬，王洪波，杜 霞，张 红，李彤晖

(陕西省中医药研究院，西安 710003)

目的 筛选祛瘀生新胶囊挥发油部位提取工艺并建立质量标准。方法 以L9(34)正交实验，考察挥发油提取及包合条件，以HPLC定量及TLC定性控制挥发油包合物质量。结果 提取工艺为：加9倍量水，浸泡1 h，提取9 h；包合工艺为：挥发油∶β-环糊精=1∶11，包合时间3 h，包合温度40 ℃；建立了挥发油包合物质量标准。结论 优化后工艺可操作性强、稳定、合理，质量控制标准专一、全面、可行。

祛瘀生新胶囊；挥发性部位；正交实验；质量标准

A.stract:Objective To screen the extract procedure and establish the quality standard of the volatile oil for Quyushengxin Capsules. Methods The orthogonal test L9(34) was used to investigate the degree of extraction and inclusion for the volatile oil. The quality of the inclusion compound for the volatile was controlled by HPLC and TLC. Results The extraction procedure:9 times water，soak for 1 h， extraction 9 h. The inclusion procedure, volatile oil∶β-cyclodextrin=1∶11，inclusion time 3 h， and the package junction temperature 40 ℃. Conclusion The optimized process is feasible，stable and reasonable. The quality control standard is specific， comprehensive and feasible.

祛瘀生新胶囊是我院临床常用经验方，主要由桂枝、三棱、莪术等7味中药组成；具有破气行血、散结止痛之功效；用于治疗风、寒、湿、邪等多种原因引起的髋部疼痛、肿胀、屈伸活动受限、行走困难等功能障碍性疾病，主治股骨头环死。临床常用为汤剂，但其具有服用剂量大、携带不方便等缺点，因此改为胶囊剂。其挥发性部位是该制剂工艺研究的一部分。桂枝中的活性成分主要为挥发油，含量为0.12%～0.19%。据文献报道[1]，三棱、莪术混合提取挥发油可提高彼此挥发油的提取率，因此将含挥发性成分的桂枝、三棱和莪术混合提挥发油，并用β-环糊精包合，可有效保存其活性成分，提高疗效，增加制剂的稳定性，同时建立桂皮醛的含量测定方法，以控制挥发油包合物的质量，为开发治疗股骨头坏死的新型中药奠定基础。

1 仪器与试药

1.1 仪器 98-1-B型电子调温电热套(天津市泰斯特仪器有限公司)；HJ-6多头磁力加热搅拌器(常州国华电器有限公司)；SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)；KH-300D型数控超声波清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；TGL-16G离心机(上海安亭科学仪器厂)；HCTP11B10托盘药物天平(北京市宣武区天平厂)；BP211D型电子分析天平(德国赛多利斯天平有限公司)；2010A-UV型高效液相色谱仪，CLASS-VP色谱工作站(日本岛津公司)。

1.2 试药 三棱、莪术和桂枝购自盛兴中药饮片厂，经检验均符合《中国药典》2010年版一部的规定。β-环糊精(淄博千汇生物科技有限公司)；乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其他试剂均为分析纯；桂皮醛为对照品(中国食品药品检定研究院，供含量测定用，批号110725-200512)。

2 方法与结果

2.1 挥发性部位提取研究

2.1.1 正交设计实验 据查新[2]及预试，药材粒度、浸泡时间、加水量和提取时间是影响提取的主要因素，而大生产为了避免颗粒小造成糊化，常以药材饮片投料，因此仅考虑提取时间(A)、浸泡时间(B)和加水量(C)3项因素，每个因素制定3个水平，见表1。

2.1.2 挥发油提取 以处方量称取桂枝、三棱、莪术各9份，分别提取挥发油，并进行方差分析，结果见表2～3。

表1 提取挥发油因素水平表

Tab.1 The factor and level of extraction of the volatile oil

水平因素A,提取时间/hB,浸泡时间/hC,加水量/倍空白150.571271.092391.5113

表2 提取挥发油正交实验结果

Tab.2 The results of the orthogonal test of the volatile oil

实验号ABCD(空白)挥发油含量/%111111.36212221.44313331.40421231.57522311.47623121.38731321.60832131.88933211.68K14.204.534.624.51K24.424.794.694.42K35.164.464.474.85R0.170.020.010.03

表3 提取挥发油方差分析结果

Tab.3 The results of analysis of variance of the volatile oil

方差来源离差平方和自由度均值F值显著性SSA0.168620.084320.02*SSB0.020220.01012.39SSC0.034320.01714.07SSD0.008420.0042

注：F0.1(2，2)=9.0，F0.05(2，2)=19.0，F0.01(2，2)=99.0;*有显著性差异。

由表3可知，A因素有显著性差异；B因素与C因素无显著性差异，且B2>B1>B3，C2>C1>C3；结果为A3B2C2，即加9倍量水，浸泡1 h，提取9 h。

2.2 挥发性部位包合研究

2.2.1 挥发油包合正交实验 通常挥发油包合[3]有饱和水溶液法、超声波法、研磨法等，因饱和水溶液法易操作，适合大生产，所以选用此法，以包油率为指标，筛选β-环糊精量、包合时间、包合温度[4]。结果见表4～6。

表4 挥发油包合因素与水平

Tab.4 The factor and level of inclusion of the volatile oil

水平因素A,挥发油∶β-CD(v/w)B,包合温度/℃C,包合时间/h空白11∶7403121∶9604231∶118053

表5 挥发油包合正交实验结果

Tab.5 The results of the orthogonal test for the inclusion of the volatile oil

实验号ABCD(空白)包油率/%1111168.562122271.983133363.384212372.505223176.256231266.197313282.408321389.209332185.30K1203.92223.46223.95230.11K2214.94237.43229.78220.57K3256.90214.87222.03225.08Sj521.0086.4310.8615.18

表6 挥发油包合方差分析结果

Tab.6 The results of variance analysis of the volatile oil

方差来源离差平方和自由度方差F值显著性SSA520.99582260.497934.3130*SSB86.4336243.21685.6926SSC10.859825.42990.7152SSD15.183627.5918

注：F0.1(2，2)=9.0，F0.05(2，2)=19.0，F0.01(2，2)=99.0；*有显著性差异。

由表5～6可知，因素A差异性最大，因素B、C无差异性，结合大生产现状，选A3B1C1即：挥发油∶β-环糊精=1∶11，包合3 h，包合温度40 ℃。以此条件重复实验3次，得平均包油率(包封率)为85%，即10 g包合物中载挥发油为0.83 mL。

2.3 挥发油包合物质量标准

2.3.1 薄层鉴别 取挥发油包合物1 g，加乙醚30 mL，超声30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。另取三棱对照药材2 g，同法制成对照药材溶液。按照挥发油包合物制备方法及供试品处理方法制备缺三棱的阴性对照液。依次吸取上述3种溶液各15，10和15 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-水(8∶4∶1)溶剂系统展开，取出，晾干，喷以0.01 g·L-1香草醛-硫酸溶液，105 ℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，与对照药材色谱相应位置上，有相同颜色的斑点。而阴性对照无此斑点。

2.3.2 挥发油包合物含量测定 以君药桂枝中活性成分桂皮醛(cinnamaldehyde)为指标，采用HPLC法[5]，建立挥发油包合物含量测定方法。

2.3.2.1 色谱条件与系统适用性实验 色谱柱Welchrom C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，月旭科技(上海)股份有限公司；流动相为乙腈-水(32∶68)；检测波长为290 nm；流速为1 mL·min-1；柱温：室温。在此条件下供试品中的桂皮醛得到良好分离，理论板数以桂皮醛峰计算为4 543，阴性对照在此处无干扰，见图1。

2.3.2.2 溶液的制备 精密称取在五氧化二磷减压干燥器中干燥36 h的桂皮醛对照品适量，加甲醇制成9.687 μg·mL-1的溶液，作为对照品溶液。另取挥发油包合物5 g，精密称定，置于25 mL量瓶中，加甲醇适量，浸泡1 h，超声30 min，取出，放至室温，加甲醇定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，得供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。

2.3.2.3 线性关系考察 精密吸取对照品溶液1，2，3，4和5 μL，按照2.3.2.1项下色谱条件进行测定。结果表明，桂皮醛在10.208 8～50.088 μg之间呈良好的线性关系。回归方程为：A=1 101 800C-12 400，相关系数r=1。

图1 HPLC图

A. 桂皮醛对照品；B.供试品；C.阴性对照品；1.桂皮醛

Fig.1 HPLC chromatograms

2.3.2.4 精密度实验 精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，记录峰面积，测得RSD值为0.16%。

2.3.2.5 重复性实验 取挥发油包合物6份，按供试品制备方法制备样品，按照2.3.2.1项下方法进行测定。平均含量为5.25 μg ·g-1，RSD值为0.68%。2.3.2.6 稳定性实验 取重复性实验中的2号样品，分别于0，2，4，6，8，10和12 h进样，记录峰面积，RSD值为0.19%，表明此样品在12 h内稳定。

2.3.2.7 加样回收实验 取已知含量的同一批样品5份，分别加入对照品溶液(9.687 μg·mL-1)1.5 mL，依照供试品溶液处理方法及2.3.2.1项下方法进行测定。平均回收率为103.14%，RSD值为1.05%，见表7。

表7 加样回收实验结果

Tab.7 Test results of the recovery rate

序号取样量/g相当于桂皮醛的量/μg加对照品量/μg 测得总量/μg回收率/%平均回收率/%RSD/%12.500713.1314.5327.90101.65103.141.0522.507413.1614.5328.20103.5132.506413.1614.5328.30104.2042.500513.1314.5328.01102.4152.505313.1514.5328.25103.92

2.3.2.8 供试品测定 取挥发油包合物3批，按照供试品制备方法和2.3.2.1项下色谱条件进行测定，结果桂皮醛的含量分别为5.21，5.36和5.18 μg·g-1。

3 讨论

桂枝为祛瘀生新胶囊中的君药，所含挥发性活性成分桂皮醛可随水蒸汽蒸馏，具有明显的镇痛、解热、抗炎作用[6]。而莪术为气中血药，善破气中之血，以破气消积；三棱为血中气药，善破血中之气，以破血通经。二药配伍，气血兼顾，活血祛瘀，行气止痛，化积消癥之力增强[7-8]，两者的有效部位均为挥发油。挥发油具有易挥发、强烈刺激性气味的缺点，因此用β-环糊精包合，掩盖其不良气味，防止有效成分的氧化、分解，以增加其稳定性，从而保证药品质量和临床疗效。

由挥发油包合物中桂皮醛含量测定结果(含量较高)可知，祛瘀生新胶囊挥发性部位提取、包合工艺科学、合理，可操作性强，能很好地保留挥发性成分，特别是桂皮醛包合量高，损失较少，其质量标准全面、科学。

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Research of the volatile part for Quyushengxin Capsules

GUO Dong，WANG Hongbo，DU Xia，ZHANG Hong，LI Tonghui

(Shaanxi Academy of Traditional Chinese Medicine，Xi′an 710003，China)

Quyushengxin Capsules；volatile site；orthogonal test；quality standard

ence substance of cinnamic aldehyde； B.the test sample； C.the negative

ubstance；1.cinnamic aldehyde

陕西省科学技术研究发展计划项目(编号：2011k12-03-05 )

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.06.005

R284

A

1004-2407(2016)06-0568-04

2016-05-13)