HPLC法同时测定多维元素片中维生素A和维生素E的含量

范 菲，杨会鸽，周 娜，郑 妍

(西安市食品药品检验所，西安 710054)



HPLC法同时测定多维元素片中维生素A和维生素E的含量

范 菲，杨会鸽，周 娜，郑 妍

(西安市食品药品检验所，西安 710054)

目的 建立高效液相色谱(HPLC)法同时测定多维元素片中维生素A和维生素E的含量。方法 采用C18色谱柱(250mm×4.6mm，5μm);流动相为甲醇-水(98∶2);流速为1.0mL·min-1;检测波长为265nm;柱温为25 ℃。结果 维生素A和维生素E的线性关系良好，相关系数(r)均大于0.999 9；专属性强，维生素A、维生素E与药品中其他成分之间均有良好的分离度；稳定性和精密度良好，相对标准偏差(RSD值)均小于1.0%；回收率良好，回收率在91.07%～92.85%之间；稳定性能满足实验要求。结论 该法可同时定性和定量分析多维元素片中的维生素A和维生素E，其方法的精密度、回收率和检出限能满足实际检测要求，可用于该制剂中维生素A和维生素E的监测。

维生素A；维生素E；HPLC；多维元素片

多维元素片临床上主要应用于预防和治疗因维生素与矿物质缺乏所引起的各种疾病，是一种由多种维生素和微量元素制成的复方制剂，由于活性成分种类多，其质量控制方法也极为复杂[1]。高效液相色谱法同时测定多维元素片中多种水溶性维生素的报道[1-2]较多，而同时测定其脂溶性维生素的方法较少[3-6]。多维元素片成分复杂，有报道用梯度洗脱法测定，但是梯度方法较为繁琐，本实验建立在一个等度洗脱的色谱条件下同时测定多维元素片中维生素A和维生素E的方法。

1 仪器与试药

1.1 仪器Ultimate3000高效液相色谱仪(美国戴安公司)，配有二极管阵列检测器；BSA124S-CW万分之一电子天平(赛多利斯科学仪器有限公司)；MS105十万分之一电子天平(梅特勒-托利多仪器有限公司)。

1.2 试药 多维元素片(由25种元素组成，贵州神奇药业有限公司)；维生素A对照品(中国食品药品检定研究院，批号100061-201208)、维生素E对照品(中国食品药品检定研究院，批号100062-201110)；甲醇为色谱纯(赛默飞世尔科技公司)；水为高纯水；其他试剂均为分析纯；辅料为淀粉、糊精、羧甲基淀粉钠和硬脂酸镁(贵州神奇药业有限公司)。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液的制备 精密称取维生素A17.21mg，置于100mL量瓶中，加入异丙醇稀释至刻度，摇匀；再精密称取维生素E304.70mg，置于20mL量瓶中;精密吸取上述维生素A溶液1mL，置于装有维生素E的 20mL量瓶中，加入异丙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2 供试品溶液的制备 取本品50片，除去薄膜衣，精密称定，研细，称取适量(约相当于维生素E30单位)，加入20mL二甲基亚砜，在40～50 ℃超声约20min，放冷至室温，以3 000r·min-1离心10min；精密量取上清液10mL，置于分液漏斗中，用正己烷萃取4次，将萃取液定容至100mL量瓶中，摇匀，精密量取25mL，用氮气吹干，加入异丙醇2mL使残渣溶解，混匀，即得。

2.3 阴性对照溶液的制备 根据多维元素片说明书提供的制剂配方，配制不含维生素A和维生素E的阴性对照粉末，按照2.2项下方法制备阴性对照溶液。2.4 色谱条件 色谱柱：WelchUltimateXB-C18(250mm×4.6mm，5μm)；流动相：甲醇-水(98∶2)；流速：1.0mL·min-1；检测波长：265nm；柱温：25 ℃；进样量：20μL。

2.5 专属性实验 精密量取阴性对照溶液、混合对照品溶液和供试品溶液，按照2.4项下色谱条件进样分析，色谱图见图1，在此色谱条件下，维生素A和维生素E的保留时间分别为17.35和30.46min，与相邻杂质峰分离度大于1.67，峰形良好，理论塔板数大于12 658，样品中其他成分不干扰维生素A和维生素E的测定。

2.6 线性关系和最低检测限 分别精密量取对照品溶液1，2，4，6，8和10mL，置于20mL量瓶中，加异丙醇稀释至刻度，按照2.4项下色谱条件进样分析，记录色谱数据，以峰面积X与质量浓度Y做线性回归。维生素A的回归方程：Y=1.582 43 X-0.000 580，r=0.999 98，线性范围为0.28～2.84μg·mL-1；维生素E的回归方程：Y= 0.052 37 X +0.021 64，r=0.999 98，线性范围为0.76～7.62mg·mL-1。维生素A和维生素E的最低检测限分别为0.14和7.62μg·mL-1。

图1 高效液相色谱图

A.阴性对照溶液；B.混合对照品溶液；C.供试品溶液；1.维生素A；2.维生素E

Fig.1HPLCchromatograms

A.negativecontrol;B.combinedstandards;C.analyticalsample; 1.vitaminA; 2.vitaminE

2.7 精密度实验 取同一对照品溶液，按照2.4项下色谱条件重复进样5次，维生素A和维生素E的RSD值分别为0.42%和0.19%。

2.8 重复性实验 取同一批号样品5份，按照2.4项下色谱条件进行测定，维生素A和维生素E的标示量分别为91.27%(RSD=1.0%)和92.05%(RSD=0.8%)，表明重复性良好。

2.9 稳定性实验 取同一供试品溶液(140203)，按照2.4项下色谱条件在0，1，2，4，8和12h进样测定峰面积，RSD值均小于1.0%，结果表明，维生素A和维生素E在12h内稳定。

2.10 加样回收率实验 精密称取已知含量的供试品(140203)粉末适量，分别加入适量的混合对照溶液，按照2.2项下规定制备高、中、低3个质量浓度(相当于供试品溶液75%，100%和125%)的供试品溶液，每个质量浓度制备3份，按照2.4项下规定的色谱条件进行测定，结果见表1，各成分的回收率在91.07%～92.85%之间。

表1 回收率实验结果

Tab.1 Results of recovery test(n=3)

2.11 样品含量测定 精密称取3份不同批号的多维元素片，按照2.4项下色谱条件每批测定5次，维生素A和维生素E的平均含量在91.31%～92.00%之间。

3 讨论

本实验比较了流动相水-甲醇(15∶85)、水-甲醇(2∶98)及梯度洗脱等条件，比较维生素A和维生素E的色谱峰形及分离情况，梯度洗脱虽然色谱峰形及分离效果也不错，但比较麻烦，最后确定采用水-甲醇(2∶98)作为流动相，在此条件下，维生素A和维生素E的峰形及分离度均理想，且未见其他成分干扰。该方法简便快速，准确可靠，能同时测定维生素A和维生素E的含量。

[1] 姜文清,金鹏飞,朱峰,等.HPLC同时测定多维元素片中维生素B1、维生素C、维生素B6和烟酰胺的含量[J]. 中国药学杂志, 2011, 46(14):1122-1125.

[2] 田颖,黄挺,刘军,等.高效液相色谱法同时测定多维元素片中9种水溶性维生素[J].分析实验室, 2010, 29 (11):52-56.

[3] 朱姜,张鹏,杨嘉,等.高效液相色谱-串联质谱法测定奶粉中的维生素A、维生素D、维生素E[J].中国卫生检验杂志, 2015, 25(11):1733-1739.

[4] 宋金春,李韵秋,曾俊芬.HPLC法测定注射用12种复合维生素中维生素D2、维生素A与维生素E的含量[J]. 中国药房, 2007, 18(31):2456-2457.

[5] 柳小秦,尹琳,吴少平.八维钙锌片中维生素D2含量测定方法的改进[J]. 西北药学杂志, 2011,26(5):349-350.

[6] 徐长根,柳小秦,吴昊,等.HPLC法测定复方炔雌醇甲羟孕酮胶囊中3种维生素的含量[J]. 西北药学杂志, 2013, 28(6):580-583.

Simultaneous determination of vitamin A and vitamin E in Vitamins with Minerals Tablets by HPLC

FANFei,YANGHuige,ZHOUNa,ZHENGYan

(Xi′anInstituteforFoodandDrugControl,Xi′an710054,China)

ObjectiveToestablishanHPLCmethodforthesimultaneousdeterminationofvitaminAandvitaminEinVitaminswithVineralsTablets.MethodsTheHPLCmethodwascarriedonaC18column(250mm×4.6mm，5μm),methanol-water(98∶2)asthemobilephaseanddetectedat265nm.Theflowratewas1.0mL·min-1,andcolumntemperaturewassetat25 ℃.ResultsGoodlinearrelationshipbetweenthepeakareaandsamplevolumewasfoundforvitaminAandvitaminEwithallcorrelation(r)greaterthan0.999 9.ThespecificitystudyshowedsatisfactoryresolutionsbetweenvitaminAandvitaminEwithotheringredients.Themethodproposedshowedgoodstabilityandprecisionwithallrelativestandarddeviations(RSD)lowerthan1.0%,andtherecoveriesrangedfrom91.07%to92.85%forthetwocompounds.ConclusionThemethodcanbeusedforthequalitativeandquantitativeanalysisofvitaminAandvitaminEinVitaminswithMineralsTablets.Precision,recoveryanddetectionlimitofthemethodcanmeetthepracticalrequirementsofdetection.ItcanbeusedformonitoringthevitaminAandvitaminEcontentinthepreparation.

vitaminA；vitaminE;HPLC；VitaminswithMineralsTablets

10.3969/j.issn.1004-2407.2016.06.012

R

A

2016-05-04)