鸡腿菇复合制剂的抗S180肿瘤作用*

刘芹，耿雪冉，许瀛引，张薇薇，王贺祥**

（1.河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所，河南郑州450002；2.中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100193）

鸡腿菇复合制剂的抗S180肿瘤作用*

刘芹1，耿雪冉2，许瀛引2，张薇薇2，王贺祥2**

（1.河南省农业科学院植物营养与资源环境研究所，河南郑州450002；2.中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100193）

旨在探讨鸡腿菇复合制剂的抗肿瘤作用，为鸡腿菇复合制剂的推广应用提供理论基础。通过腹股沟皮下注射S180肿瘤细胞建立小鼠肿瘤模型，把接种肿瘤细胞后的小鼠随机分为阴性对照组，阳性对照组，鸡腿菇复合制剂低、中、高剂量组，2周后检测小鼠体重和肿瘤大小的不同。结果表明抗癌药物环磷酰胺的肿瘤抑制率为71.8%；鸡腿菇复合制剂低剂量组（1 233 mg·kg-1）、中剂量组（2 466 mg·kg-1）和高剂量组（3 699 mg·kg-1）的肿瘤抑制率分别为14.3%、43.5%和50.4%。这说明在实验条件下，鸡腿菇复合制剂具有明显抑瘤作用，并呈现一定的剂量依赖性。

鸡腿菇复合制剂；环磷酰胺；抗肿瘤

肿瘤已成为威胁人类健康与生命的主要疾病之一。目前，放、化疗技术在治疗肿瘤方面已经取得了很大的进步，但是放、化疗也具有很大的副作用［1-3］。环磷酰胺是目前临床上常用的抗肿瘤药物，其本身不具有抗肿瘤的作用，但是经肝线粒体细胞色素P450和肝微粒体酶作用后生成的具有较强烷化作用的磷酰胺氮芥，对肿瘤细胞有较强的细胞毒性作用，同时也对免疫相关细胞呈现出较强的免疫抑制作用，所以用环磷酰胺治疗时会引起机体免疫力的下降，副作用较大［3-4］。寻求天然无毒副作用的抗癌药物已经成为近年来研究的重点［1，5-6］。鸡腿菇复合制剂主要是由鸡腿菇等多种食用菌及中草药组成。本研究采用腋下接种S180肿瘤的方法建立荷瘤小鼠模型，探究此制剂的抗肿瘤作用，为其进一步开发利用提供理论基础。

1　材料和方法

1.1药品及主要试剂

鸡腿菇复合制剂由苏州佛果生物科技有限公司提供，主要成分为鸡腿菇、猴头菇、金针菇、草菇、香菇、茯苓、人参、枸杞子、佛手等。

环磷酰胺购自通化茂祥制药有限公司。

1.2实验动物

雄性昆明鼠，体重18 g～22 g，由北京兴隆实验动物养殖厂提供。动物实验设施持续保持屏障环境标准。主要环境指标的控制范围：温度（25±2）℃，相对湿度（55±5）%，光照明∶暗为12 h∶12 h。动物饲养在标准盒内，每周2次更换垫料和笼具，保持盒内环境清洁干燥；每日添加饲料和饮水，保持动物自由饮食活动。实验遵循中国农业大学实验动物伦理规范。

1.3实验方法

1.3.1小鼠S180肿瘤体内传代

将肿瘤细胞悬液在离心机上以1 000 r·min-1，离心5 min，小心去除上清，用无菌生理盐水清洗2次后，吹打成单细胞悬液，调整浓度为1×105个·mL-1备用。吸取肿瘤细胞悬液0.2 mL注射入小鼠腹腔；在实验室条件饲养小鼠，大致1周后可见小鼠腹部明显隆起。引颈处死小鼠后，用无菌注射器抽取乳白色的瘤液，注入健康小鼠腹腔传代3次，使S180肿瘤细胞在小鼠体内能够稳定生长。

1.3.2肿瘤动物模型的建立

在无菌条件下，取传代7 d的S180瘤源小鼠，引颈处死，无菌操作从小鼠腹腔内抽取乳白色的瘤液，用生理盐水稀释成瘤细胞悬液，并调整细胞浓度为1×107个·mL-1，在昆明小鼠右腹股沟皮下注射瘤细胞悬液，每只小鼠0.2 mL。

1.3.3分组与给药方式

接种肿瘤细胞后的小鼠随机分为5组，每组12只。5组小鼠分别为阴性对照组（生理盐水组）、阳性对照组（环磷酰胺组，30 mg·kg-1）以及鸡腿菇复合制剂低剂量组（1 233 mg·kg-1）、中剂量组（2 466 mg·kg-1）和高剂量组（3 699 mg·kg-1）；另取12只未注射肿瘤细胞的小鼠作为正常组。

对阳性对照组和复合制剂处理组的每只小鼠于接种肿瘤细胞24 h后开始灌胃给药，连续给药2周；阴性对照组和正常组小鼠每天灌胃同样体积的生理盐水。

1.3.4称量体重

分别于0天（接种肿瘤细胞前）、第5天、第10天和第16天称量并记录各组小鼠的体重。

1.3.5肿瘤抑制率

第16天引颈处死小鼠，分离肿瘤并用电子天平称取重量。抑瘤率（P）公式为：

P=（C-T）/C×100%

式中：C为阴性对照组小鼠平均瘤重；T为实验组小鼠平均瘤重。

1.4统计学分析

实验数据采用SPSS 20.0软件进行统计学分析，组间差异采用t检验，以P＜0.05为有统计学意义。

2　结果与分析

不同剂量的鸡腿菇复合制剂对小鼠体内S180肿瘤生长抑制率见表1。

表1　鸡腿菇复合制剂对小鼠体内S180肿瘤生长的影响Tab.1Effects of Coprinus comatus-compound on S180 tumor growth in mice

由表1可见，与阴性对照组相比，抗癌药物环磷酰胺的肿瘤抑制率为71.8%，差异极显著（P＜0.01）。鸡腿菇复合制剂低剂量组的肿瘤抑制率为14.3%，差异不显著；而中剂量组和高剂量组的肿瘤抑制率分别为43.5%和50.4%，都达到了差异极显著水平（P＜0.01）。这说明鸡腿菇复合制剂具有很好的抗肿瘤作用，且呈现出一定的剂量依赖性。鸡腿菇复合制剂的低剂量、中剂量和高剂量折合60 kg体重的成年人每天的服用量分别为6 g、12 g和18 g。

鸡腿菇复合制剂对小鼠体重的影响见表2和图1。

表2　鸡腿菇复合制剂对小鼠体重的影响Tab.2Effects of Coprinus comatus-compound on body weight in mice

图1　鸡腿菇复合制剂对小鼠体重的影响Fig.1Effects of Coprinus comatus-compound on body weight in mice

由表2和图1可知，与阴性对照组相比，阳性对照组小鼠的体重明显偏低，且后期有下降的趋势，说明抗癌药物环磷酰胺的肿瘤抑制率虽高，但毒副作用明显。鸡腿菇复合制剂的肿瘤抑制率虽不如环磷酰胺，但实验小鼠的体重逐步上升，预示其没有毒副作用或毒副作用不大。

3　结论

根据文献报道及预实验，建立了小鼠荷S180肿瘤模型。实验过程中对各组小鼠灌胃不同剂量的鸡腿菇复合制剂，结果表明鸡腿菇复合制剂具有很好的抗肿瘤作用。

［1］Zong A，Cao H，Wang F.Anticancer polysaccharides from natural resources：a review of recent research［J］.Carbohydr Polym，2012，90（4）：1395-1410.

［2］Bao X，Yuan H，Wang C，et al.Antitumor and immunomodulatory activities of a polysaccharide from Artemisia argyi［J］. Carbohydr Polym，2013，98（1）：1236-1243.

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［4］Ding X，Zhu F，Gao S.Purification，antitumour and immunomodulatory activity of water-extractable and alkali-extractable polysaccharides from Solanum nigrum L.［J］.Food C-hemistry，2012，131（2）：677-684.

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Antitumor Effect of Coprinus comatus-compound on S180 Tumor-bearing Mice

LIU Qin1，GENG Xue-ran2，XU Ying-yin2，ZHANG Wei-wei2，WANG He-xiang2
（1.Institute of Plant Nutrition and Resource Environment，Henan Academy of Agricultural Sciences，Zhengzhou 450002，China；2.State Key Laboratory for Agrobiotechnology and Department of Microbiology，China Agricultural University，Beijing 100193，China）

The antitumor activities of Coprinus comatus-compound were evaluated in Sarcoma 180 tumor-bearing mice by intraperitoneal administration.The tumor-bearing mice were randomly divided into five groups（twelve mice in each group），such as tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with cyclophosphamide（CTX）at the dose of 30 mg·kg-1；tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with Coprinus comatus-compound at the respective dose of 1 233 mg·kg-1，2 466 mg·kg-1，3 699 mg·kg-1；tumor-bearing mice administrated intraperitoneally with the same volume of normal saline.Tumor were dissected and weighed after two weeks.Coprinus comatus-compound inhibited the growth of sarcoma 180 dose-dependently，with the inhibitory rates of 14.3%，43.5%，50.4%at the respective dose of 1 233 mg·kg-1，2 466 mg·kg-1，3 699 mg·kg-1.As expected，CTX，a frequently used chemotherapeutic drug，showed a higher tumor inhibition rate of 71.8%.In the present study，Coprinus comatus-compound could inhibit the growth of sarcoma 180 in vivo through oral administration in mice.

Coprinus comatus-compound；cyclophosphamide；antitumor

S646.9

A

1003-8310（2016）03-0055-03

10.13629/j.cnki.53-1054.2016.03.012

现代农业产业技术体系建设专项基金（CARS-24）。

刘芹（1986-），女，博士，助理研究员，主要从事药用与食用真菌研究。E-mail：liuqin_bio@163.com

**通信作者：王贺祥（1957-），男，博士，教授，主要从事药用与食用真菌研究。E-mail：hxwang@cau.edu.cn

2016-03-10