IgG、IgM抗体在自身免疫性肝病的表达研究

方静怡　朱正鹏　李凯　罗锦　马建波　张睿　申丽娟



IgG、IgM抗体在自身免疫性肝病的表达研究

方静怡朱正鹏李凯罗锦马建波张睿申丽娟

目的研究原发性胆汁性肝硬化(PBC)及自身免疫性肝炎(AIH)的病理特点，寻找有效的病理诊断指标。方法选择2006年-2012年昆明医科大学病理教研室肝穿刺活检病例，从中筛选病理诊断为原发性胆汁性肝硬化(PBC)血清检测AMA-M2阳性病例30例、AMA-M2阴性病例17例和自身免疫性肝炎病例20例。采用免疫组化方法检测肝组织内IgG、IgM的表达情况。结果免疫组化检测显示IgM、IgG阳性颗粒主要分布于肝脏门管区浆细胞胞浆内，PBC AMA-M2阳性组、PBC AMA-M2阴性组、AIH组3组内IgM、IgG阳性细胞数相比差异均有统计学意义(P均<0.05)。PBC患者肝脏门管区浆细胞内主要表达IgM，AIH患者肝脏门管区浆细胞内主要表达IgG；PBC AMA-M2阳性组与AMA-M2阴性组相比，AMA-M2阳性的PBC患者肝脏门管区IgM、IgG表达阳性细胞数比AMA-M2阴性的PBC患者高，IgM、IgG阳性细胞数差异有统计学意义(P<0.05)。结论PBC患者肝脏门管区浆细胞内主要表达IgM，AIH患者肝脏门管区浆细胞内主要表达IgG，肝组织中IgM和IgG的检测及分析有助于PBC和AIH的诊断，且AMA-M2阳性的PBC患者肝脏门管区IgM、IgG阳性表达比AMA-M2阴性的PBC患者高。

PBC；AIH；IgG；IgM；病理

自身免疫性肝病(AILD)是一类以肝功能异常和肝脏病理损害为主要表现的非传染性肝病，包括AIH、PBC和原发性硬化性胆管炎(PSC)。随着医学科技的进步，诊断自身免疫性肝病的血清学、免疫学和影像学技术取得了显著进展，但大量实践证明，这些技术尚不能完全取代肝活体组织病理学技术，肝活体组织病理检查仍是诊断各种慢性肝损伤的重要依据。

资料和方法

一、病例资料

筛选2006年-2012年云南省昆明医科大学病理教研室肝穿刺活检病例，经昆明医科大学病理教研室2位教授统一阅片，病理确诊为PBC且血清检测AMA-M2阳性病例30例、AMA-M2阴性病例17例及AIH病例20例。

二、方法

免疫组化染色采用福州迈新公司MaxVisionTM法。具体参照说明书，石蜡切片脱蜡和水化后，PBS冲洗，抗原修复，孵育，DAB显色，中性树胶封固。鼠抗人IgG单克隆抗体、羊抗人IgM单克隆抗体购自北京中杉金桥生物制剂公司，其他免疫组化试剂均购自福州迈新公司。

计数肝组织门管区IgG、IgM阳性细胞数。

三、统计学处理

结　　果

一、IgG、IgM免疫组化表达结果

免疫组化检测显示IgG和IgM 阳性均表达于浆细胞胞浆内，呈棕黄色。阳性表达细胞评估标准：肝组织中IgM、IgG的免疫组化检测结果按Daniels 等的计数法; 采用两台显微镜，分别对两组免疫组化显色的盲编切片同一区域选定的4 个完整门管区，高倍镜 (×400 )下对所有门管区内阳性表达浆细胞计数。PBC组门管区IgM阳性细胞数较多，AIH组门管区IgG阳性细胞数较多，3组内IgM、IgG的阳性细胞数详见表1。

图2　PBC AMA- M2阳性组 门管区浆细胞胞浆内IgM表达，呈棕褐色颗粒　MaxVisionTM法×400

图3　PBC AMA- M2阴性组 门管区浆细胞胞浆内IgG表达，呈棕褐色颗粒　MaxVisionTM法×400

图4　PBC AMA- M2阴性组 门管区浆细胞胞浆内IgM表达，呈棕褐色颗粒　MaxVisionTM法×400

图5　AIH组 门管区浆细胞胞浆内IgG表达，呈棕褐色颗粒MaxVisionTM法×400

图6　AIH组 门管区浆细胞胞浆内IgM表达，呈棕褐色颗粒MaxVisionTM法×400

指标PBC(AMA⁃M2+)组PBC(AMA⁃M2⁃)组AIH组IgM6．52±2．355．23±1．583．37±1．47IgG4．31±1．183．38±0．965．76±1．95

注：PBC AMA- M2阳性组、AMA- M2阴性组及AIH组肝脏门管区IgG、IgM阳性细胞数两两比较，检验水准α=0.05，P<0.05，差异有统计学意义

讨　　论

PBC与AIH同属自身免疫性肝病(AILD)，AILD诊断通常需排除其他病毒感染，药物、酒精性肝病，非酒精性脂肪性肝病，遗传代谢障碍性疾病导致的肝脏损害，并结合临床表现及实验室检查进行综合判断。PBC是一种免疫介导，进展缓慢的胆汁淤积性肝病，常起病隐匿，晚期出现肝硬化症状后才能被识别，从而错过了最佳诊断及治疗时机[1-2]。PBC患者的血清生化学指标是以碱性磷酸酶(ALP)及谷氨酰转肽酶(GGT)升高为主的肝功能异常。PBC患者的血清免疫球蛋白中IgG和IgM升高，尤其IgM显著升高，提示有体液免疫参与。PBC病理改变主要以肝内细小胆管的慢性非化脓性破坏、门管区炎症、慢性胆汁淤积、肝纤维化为特征，最终发展为肝硬化和肝衰竭，甚至死亡[3]。临床及病理工作中，上述PBC的临床表现、实验室指标及病理特点并不总是显而易见，常常需要与其他因素所引起的肝病相鉴别，其中最重要的就是AIH。AIH是遗传易感性、机体自身免疫紊乱和环境因素共同作用的结果[4]，起病方式呈多样性，多数隐匿起病，病程进展缓慢，若得不到及时有效的治疗，多数发展为肝硬化[5]。免疫学指标中以IgG及γ-球蛋白升高最常见，两者可作为诊断AIH的重要参考依据。AIH特征性的组织学改变是肝脏小叶界面炎症，汇管区有较明显的淋巴细胞及浆细胞浸润，损害一般不累及胆管系统[6]。PBC和AIH往往起病隐匿，临床表现不明显，病理特点不典型，比如PBC门管区的上皮性肉芽肿不是总能看到，而AIH的淋巴细胞性界面炎也是较晚期才能见到，因此容易延误最佳治疗时机，导致患者不可逆转的肝脏组织学损害。面临这两种疾病诊断和鉴别诊断所遇到的困难，促使一些学者对其他新检测技术进行了探讨。Moreira等[7]采用免疫组化方法对20例AIH病例肝组织中浆细胞内IgG及IgM的表达状况进行了研究，并与13例PBC的检测结果比较，通过对每例活检标本中IgG和IgM阳性浆细胞分别计数(个/mm2)，发现92.3%的PBC主要为IgM，而90%的AIH患者肝组织门管区内浆细胞主要表达IgG。根据阳性表达细胞的计数比值(IgM/IgG<1或≥1)，可以准确鉴别PBC和AIH，敏感性达到92.3%，特异性为90%，认为肝组织中IgM和IgG的检测及分析有助于PBC的诊断。本试验结果与Moreira等的试验结果较一致。无论是AMA-M2阳性的PBC患者还是AMA-M2阴性的PBC患者，肝脏门管区表达IgM的阳性细胞数较多，而AIH患者肝脏门管区表达IgG的阳性细胞数较多。因此可应用免疫组化法检测肝组织中IgM和IgG的阳性细胞数，对病理特点不典型或早期PBC和AIH加以鉴别，从而更早的选择正确的治疗方法，防止延误最佳治疗时机。

[1]Medina J，Jones EA, Garcia Monzon C, et al. Immunopathogenesis of cholestatic autoimmune liver diseases. Eur J Clin Invest, 2001, 31: 64-71.

[2]Heathcote EJ. Evidence-based therapy of primary biliary cirrhosis. Eur J Gastroenterol Hepatol, 1999, 11: 607-615.

[3]Kim KA， Jeong SH． The diagnosis and treatment of primary biliary cirrhosis. Korean J Hepatol，2011，17: 173-179.

[4]Muratori P, Muratori L, Gershw in ME, et al.True antimitochondrial antibody- negative primary biliary cirrhosis, low sensitivity of the routine assays, or both. Clin Exp Immunol, 2004, 135: 154-158.

[5]Nishio A, Van de Water J, Leung PS, et al. Comparative studies of antimitochondrial autoantibodies in sera and bile in primary biliary cirrhosis. Hepatology, 1997, 25: 1085 - 1089.

[6]潘敏鸿, 周晓军. 自身免疫性肝病的病理诊断.中华病理学杂志, 2007, 36: 772.

[7]Moreira RK，Revetta F，Koehler E，et al．Diagnostic utility of IgG and IgM immunohisto-chemistry in autoimmune liver disease ．World J Gastroenterol，2010，16:453-457.

(本文编辑：易玲)

云南省科技厅—昆明医学院联合专项(2011FB242)

442008十堰湖北医药学院附属东风医院病理科(方静怡，朱正鹏，李凯，罗锦，马建波，张睿)；昆明医科大学病理学与病理生理学教研室(申丽娟)

申丽娟，Email：shenljkm@163.com

2015-12-23)