HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量

王卓琰，杜妍，赵云鹤

1.吉林省白城市食品药品检验所，吉林白城137000；2.吉林省吉林市食品药品检验所，吉林吉林132000

HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量

王卓琰1，杜妍2，赵云鹤1

1.吉林省白城市食品药品检验所，吉林白城137000；2.吉林省吉林市食品药品检验所，吉林吉林132000

目的用HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量。方法以格列本脲对照品作对照，采用HPLC法测定益康胶囊中非法添加的格列本脲含量。结果在优化色谱条件下，益康胶囊中含有格列本脲，其中的格列本脲线性范围1.0～50 μg。回归方程为：Y=390.1006 814X-13.531 980 3 r=0.999 9。含量测定的回收率为：98.34%RSD=0.798 2%。结论所建立的方法专属性强，操作简便，结果准确，重现性好，适用于对益康胶囊中非法添加的格列本脲含量的测定。

高效液相色谱法；格列本脲；益康胶囊；非法添加；含量测定

益康胶囊是由山药，肉桂，黄精，葛根，大麦芽，苦瓜精等组成的胶囊剂，主要成份是黄酮，苦瓜素，多糖，微量元素等，是用于糖尿病患者的保健食品。益康胶囊中可能非法添加格列本脲（别名：优降糖，达安疗，达安宁，乙磺己脲，优格鲁康，氯磺环己脲；外文名Glibenclamide）。格列本脲是第二代磺脲类药，具有明显的降糖作用，但是其不良反应也比较多，因此很多患者不适合服用。如果在不知情的情况下服用格列本脲就更加危险了，长期大量的服用，可导致患者低血糖和肾病，甚至死亡。益康胶囊是降糖类的食品，标识不含化药成分，如果非法添加，而患者在不知情的情况下长期服用，会产生严重的后果，因此，我们建立HPLC法测益康胶囊中非法添加格列本脲的含量［1］，使益康胶囊质量可控，确保人民使用安全有效。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1仪器Agilent 1260高效液相色谱仪，Sartorlus-BP211D型电子天平，JCX—400G超声清洗器，UV-2450日本岛津紫外分光光度计

1.1.2试药①对照品：格列本脲对照品［中国药品生物制品检定所，批号：100135-200404（供含量测定用）103℃干燥3 h后使用，约50 mg］。②药品：某厂家生产的益康胶囊（批号为：20130916，20130920，20130924）；③试剂：甲醇：色谱纯（美国），超纯水（自制），其他试剂均为分析纯。

2　方法与结果

2.1色谱条件

2.1.1溶液的制备供试品溶液取本品2粒，倾出内容物，称取约0.8 g（相当2粒重量），精密称定，加甲醇30 mL，超声处理30 min，滤过，残渣加甲醇同上，再重复提取2次，合并滤液，蒸干，残渣加甲醇适量溶解，转移至50 mL容量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。对照品溶液取格列本脲对照品10 mg，精密称定，置100 mL容量瓶，加甲醇适量溶解，稀释至刻度，摇匀，制成浓度为每1 mL含0.1 mg的对照品溶液。阴性对照品溶液取处方中药材的1/10量，按法制成片，再按供试品溶液的制备方法，制成阴性对照溶液。

2.1.2色谱条件的确定色谱柱：①ODS HYPERSIL C18 200 mm×4.6 mm 5 μm。②Shim-pack VP-ODS C18 150mm×4.6mm5μm。③AlltimaODSC18150mm×4.6 mm 5 μm；流动相：A：乙腈B：0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）；柱温：25℃；流速：0.8 mL/min；检测波长：230 nm；理论板数以格列本脲峰计算应不低于2000。波长：根据光谱扫描结果及参考有关格列本脲研究资料［2-3］，选用230 nm作为该试验格列本脲含量测定的检测波长。流动相：采用A：乙腈B：0.02 mol/L乙酸铵-0.1%乙酸：甲酸：乙腈（60∶20∶20）为流动相，经试验，分离效果好，保留时间适度，故确定其为本法的流动相。取格列本脲对照品溶液，滤膜滤过，自动进样测定。结果无干扰，色谱条件符合要求。

2.2线性关系考察

分别精密吸取对照品溶液1、3、5、10、15、30、50 μL注入色谱仪中，记录峰面积，见表1。

表1　标准曲线的实验结果

计算得回归方程：Y=390.100 6814 X-13.531 980 3 r=0.999 97。结果表明格列本脲在1.0～50 μg范围内呈线性。

2.3精密度试验

取格列本脲对照品（批号：100135-200404），按含量测定方法制得供试品溶液，重复进样6次，记录峰面积［4］，实验结果见表2。

表2　精密度的试验结果

试验结果：RSD=0.139 6%。表明该方法所用仪器精密度良好。

2.4稳定性试验

取益康胶囊样品（批号：20130916），按含量测定方法制得供试品溶液，分别于0、3、6、12、24 h间隔进样测定，记录峰面积，以峰面积为指标，考察其稳定性［5］，结果见表3。

表3　稳定性的试验结果

试验结果：RSD=0.190 8%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.5重复性试验

取同一批样品（批号：20130916），依法独立含量测定6次［6］，试验结果，见表4。

表4　重复性试验结果

试验结果：RSD=1.914%，表明该法重现性良好。

2.6回收率测定试验

采用加样回收测定法［7-8］，取本品已知含量的样品（批号：20130916、格列本脲含量为1.41 mg/粒、平均粒重为0.401 2 g）适量，分别取6份（每份约0.4g），精密称定，每份各精密加入格列本脲对照品溶液14.1 mL，混匀，按含量测定法制备供试品溶液，并依法测定含量，结果见表5。

表5　格列本脲回收率试验结果

结果表明：该法平均回收率为98.34%，RSD为0.798 2%，表明本法准确度较好，方法可行。

2.7样品含量测定

取益康胶囊样品（20130916，20130920，20130924），按制备供试品溶液及对照品溶液的方法制备，分别各取10 μL，注入色谱仪，依法测得，按外标法计算含量（n=3），结果见表6。

表6　格列本脲含量测定结果

3　讨论

3.1测定波长的选择

根据光谱扫描结果及参考有关格列本脲研究资料，试验表明选用230 nm作为该试验格列本脲含量测定的检测波长，测定结果适宜。

3.2线性关系考察试验

格列本脲在1.0～50 μg范围内与峰面积呈线性关系，表明该法可行。

3.3精密度试验

RSD值为0.139 6%，表明实验仪器精密度良好。

3.4稳定性试验

本品甲醇溶液在常温24 h内基本稳定。此外，样品甲醇溶液在实验过程中放置24 h内含量基本未发生变化。

3.5重现性试验

RSD值为1.914%，表明该试验方法重现性好。

3.6回收率试验

平均回收率为98.34%，RSD为0.798 2%，表明该试验方法准确、可靠。

4　结语

通过实验探究发现运用高效液相色谱法测定益康胶囊中非法添加格列本脲的含量，该方法结果准确，方法简便，重现性及回收率均理想，对于制定该药的质量控制标准具有重要的参考价值。

［1］国家药典委员会.《中国药典》2010年版二部［M］.北京.中国医药科技出版社，2010.

［2］刘亚丽，段木盛，彭方.降糖中成药中格列苯脲的检测［J］.中国药师，2005，8（7）：613.

［3］张翠英，李振国，徐金玲.中药制剂及保健品中违禁添加7种降糖药物的LC-MS/MS定性检测［J］.中国药学杂志，2008，43（9）：707.

［4］薛恒跃，王玉兰，于黎明，等.中药制剂中添加化学药品苯巴比妥的检测方法研究［J］.时珍国医国药，2006，17（2）：216.

［5］张平，黄赵刚，程刚，等.降糖宁中掺有西药降糖成分的检测［J］.安徽医药，2006，10（3）：184.

［6］FDA.Guidance for Industry：Analytical procedures and methods Validation，chemistry，manufacturing，and controls documen tation（Draft）［S］.2000.

［7］ICH Q2A：Test on Validation of Analytical Procedures［S］. 2007.

［8］ICH Q2B：Validation of Analytical Procedures：Methodology［S］. 2007.

HPLC Method in Measuring the Content of Illegal Additive of Glibenclamide in Yikang Capsule

WANG Zhuo-yan1，DU Yan2，ZHAO Yun-he1
1.Food and Drug Inspection Institute，Baicheng，Jilin Province，137000 China；2.Food and Drug Inspection Institute，Jilin，Jilin Province，132000 China

Objective To measure the content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule by HPLC method. Methods The content of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule was measured by HPLC method taking the glibenclamide control articles for control.Results Under the optimized chromatography condition，yikang capsule included the glibenclamide，the glibenclamide linearity range was from 1.0 μg to 50 μg，and the regression equation was Y=390.100 681 4X-13.531 980 3 r=0.999 9，the recycle rate of content measure was 98.34%RSD=0.7982%.Conclusion The specificity of the established method is strong with easy operation，accurate result and good repeatability，which is suitable for the measurement of illegal additive of glibenclamide in yikang capsule.

High performance liquid chromatography；Glibenclamide；Yikang capsule；Illegal additive；Content measurement

R19

A

1672-5654（2016）10（a）-0079-03

10.16659/j.cnki.1672-5654.2016.28.079

王卓琰（1989.5-），女，吉林白城人，本科，药师，研究方向：药品检验。

（2016-07-06）