绵萆薢化学成分的分离与结构鉴定*

晁利平，阮静雅，刘艳霞，韩立峰，王 涛，张 祎

（天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193）

绵萆薢化学成分的分离与结构鉴定*

晁利平，阮静雅，刘艳霞，韩立峰，王 涛，张 祎

（天津市中药化学与分析重点实验室，天津 300193）

［目的］对绵萆薢的化学成分进行研究。［方法］采用大孔吸附树脂、ODS、Sephadex LH-20等柱色谱及制备型高效液相色谱法对其所含化学成分进行分离、制备，并利用波谱学方法鉴定了结构。［结果］从绵萆薢提取物中分离鉴定了Tachioside（1）、Isotachioside（2）、3，5-二甲氧基熊果苷（3）、2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、淫羊藿次苷D2（5）、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）和腺苷（7）等7个单体成分。［结论］化合物1～3为首次从薯蓣属中分离得到，4～7为首次从该植物中分离得到。

绵萆薢；化学成分；结构鉴定

DOI：10.11656/j.issn.1673-9043.2016.05.13

作为传统中药，绵萆薢（Dioscoreae spongiosae Rhizoma）以其干燥根茎入药，具有利湿去浊，祛风除痹之功效，用于治疗膏淋、白浊、白带过多、风湿痹痛、关节不利、腰膝疼痛等症［1］，主产于湖南、湖北、浙江、江西、福建、广东及广西等地［2］。绵萆薢中含有的化学成分主要为甾体、二芳基庚烷、木脂素、有机酸及酯等［3］。药理活性研究表明，绵萆薢及其有效成分具有抗骨质疏松［4］、抗心肌缺血、抗肿瘤［5］、抗真菌、调血脂、降尿酸［6］、预防动脉粥样硬化等作用。临床上用于治疗乳糜尿、慢性前列腺炎、骨质疏松、风湿及类风湿性关节炎及骨关节炎等症状。

笔者在对绵萆薢化学成分研究的过程中，利用与文献［7-13］类似的方法，分离鉴定出7个单体化合物。其中，1～3为首次从薯蓣属中分离得到，4～7为首次从该植物中分离得到，结构见图1。

1 仪器与材料

Bruker500MR超导核磁共振波谱仪（瑞士Bruker公司，AvanceⅢ500MR），大孔吸附树脂（天津海光化工有限公司），ODS（ChromatorexODSMB，40～75μm，日本YMC有限公司）；Sephadex LH-20（瑞典Ge Healthcare Bio-Sciences AB公司），Cosmosil 5C18-MS-Ⅱ制备柱和分析柱（250 mm×4.6 mm和250 mm×20 mm，均为5 μm，Japan，Nacalai Tesque公司），TLC Silica gel 60 F254（Aluminium sheets 20 cm×20 cm，德国Merck公司）。

色谱/分析纯氯仿、甲醇、乙腈、丙酮、冰醋酸等试剂购自天津康科德科技有限公司。

绵萆薢购自河北安国，由天津中医药大学李天祥副教授鉴定为薯蓣科植物绵萆薢（Dioscoreaspongiosa J.Q.Xi，M.Mizuno et W.L.Zhao）。

2 提取与分离

取绵萆薢干燥根（7.8 kg）经18、16倍量70% EtOH加热回流2次（3、2 h），合并滤液，减压回收溶剂，得浸膏1 150.0 g。上述浸膏（1 000.0 g）经D101大孔吸附树脂处理（H2O→95%EtOH→Acetone），得到 H2O、95%EtOH和 Acetone洗脱物分别为725.0、245.0及1.9 g。

95%EtOH洗脱物（150.0g）经硅胶柱层析［CHCl3-MeOH（100∶1→100∶3→100∶7，V/V）→CHCl3-MeOHH2O（10∶3∶1→7∶3∶1→6∶4∶1，V/V/V，下层）］，共得12个组分（Fr.1～12）。

Fr.6（14.0 g）经ODS柱层析［MeOH-H2O（20∶80 →30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→80∶20→100∶0，V/V）］，得到17个组分（Fr.6-1～6-17）。Fr.6-1（1170.0mg）经制备型高效液相色谱法（PHPLC）分离制备［CH3CN-H2O（3∶97，V/V）］，得到17个组分（Fr.6-1-1～6-1-17）。Fr.6-1-6（26.9 mg）、6-1-9 （13.8 mg）、6-1-11（29.0 mg）、Fr.6-1-14（90.9 mg）分别经Sephadex LH-20凝胶柱层析（MeOH），得到Tachioside（1，20.0 mg）、Isotachioside（2，7.9 mg）、3，5-二甲氧基熊果苷（3，25.6 mg）和2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4，36.3 mg）。Fr.6-1-15（119.4 mg）经PHPLC分离制备［MeOHH2O（8∶92，V/V）+1%HAc］，得到腺苷（7，50.0 mg）和淫羊藿次苷D2（5，36.0 mg）。Fr.6-3（241.0 mg）经PHPLC分离制备［CH3CN-H2O（10∶90，V/V）+1%HAc］，得到苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6，9.8 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 301.093 2［M-H］-，确定其分子式为C13H18O（8Calcd for C13H17O8，301.092 9）。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）：δ 7.14（1H，br.s，H-3），7.04（1H，br.d，ca.J=9 Hz，H-5），7.13（1H，d，J=8.5 Hz，H-6），5.54（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），4.36（2H，m，overlapped，H-2′andH-3′），4.32（1H，dd，J=7.5、8.0Hz，H-4′），4.10（1H，m，H-5′），［4.38（1H，dd，J=4.5、11.5 Hz）、4.57（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6'］，3.70 （3H，s，2-OCH）3。其1H-、13C-NMR（125 MHz，C5D5N，见表1）谱数据与文献［14］相对照，鉴定该化合物为Tachioside。

化合物2：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 301.092 8［M-H］-，确定其分子式为C13H18O1（3Calcd for C13H17O13，301.092 9）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 6.46（1H，d，J=2.0 Hz，H-3），6.30（1H，dd，J=2.0、8.5 Hz，H-5），7.02（1H，d，J=8.5 Hz，H-6），4.70（1H，d，J=7.0 Hz，H-1'），3.44（2H，m，overlapped，H-2′and H-5′），3.33（1H，dd，J=7.5、8.0 Hz，H-3′），3.38（1H，dd，J=8.0、9.5 Hz，H-4′），［3.69（1H，dd，J=5.5、12.0 Hz）、3.86（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′，3.81（3H，s，2-OCH3）。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，见表1）谱数据与文献［15］相对照，鉴定该化合物为Isotachioside。

化合物3：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 331.103 9［M-H］-，确定其分子式为C14H20O9（Calcd for C14H19O9，331.103 5）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 6.38（2H，s，H-2，6），4.69（1H，d，J=7.5 Hz，H-1′），3.20（1H，dd，J= 7.5、9.0 Hz，H-2′），3.26（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-3′），3.11（1H，dd，J=9.0、9.0 Hz，H-4′），3.30（1H，m，H-5′），［3.40（1H，dd，J=5.0、12.0 Hz）、3.72（1H，m，overlapped），H2-6′］，3.72（6H，s，3，5-OCH3）。其1H-、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，见表1）谱数据与文献［16］相对照，鉴定该化合物为3，5-二甲氧基熊果苷（koaburaside）。

化合物4：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 331.104 2［M-H］-，确定其分子式为C14H20O9（Calcd for C14H19O9，331.103 5）。1H-NMR（500 MHz，C5D5N）：δ 6.55（2H，s，H-3，5），5.53（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），4.28（3H，m，overlapped，H-2′-4′），3.88（1H，m，H-5′），［4.30（1H，dd，J=5.5、12.0 Hz）、4.38（1H，dd，J=2.0、11.5 Hz），H2-6′］，3.70（6H，s，2，6-OCH3）。其1H-、13CNMR（125 MHz，C5D5N，见表1）谱数据结合1H-1H COSY、HSQC、HMBC等2D-NMR谱的解析，鉴定该化合物为文献［17］所报道的2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside）。

化合物5：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 345.120 2［M+COOH］-，确定其分子式为C14H20O7（CalcdforC15H21O9，345.119 1）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 7.14（2H，d，J=8.5 Hz，H-2，6），7.02（2H，d，J=8.5 Hz，H-3，5），2.76（2H，t，J= 7.0 Hz，H2-7），3.69（2H，t，J=7.0 Hz，H2-8），4.86 （1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），3.45（2H，m，overlapped，H-2′and 3′），3.40（2H，overlapped，H-4′and 5′），［3.69（1H，m，overlapped）、3.88（1H，dd，J=1.5、13.0 Hz），H2-6′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，见表1）谱数据与文献［18］相对照，鉴定该化合物为淫羊藿次苷D（2Icariside D2）。

图1 绵萆薢中分离得到的化合物1~7

化合物6：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 315.110 0［M+COOH］-，确定其分子式为C13H18O（6CalcdforC14H19O8，315.1085）。1H-NMR（500 MHz，CD3OD）：δ 7.42（2H，br.d，ca.J=7 Hz，H-2，6），7.33（2H，t，J=7.0 Hz，H-3，5），7.27 （1H，br.d，ca.J=7 Hz，H-4），4.67、4.93（1H each，both d，J=11.5 Hz，H2-7），4.35（1H，d，J=7.0 Hz，H-1′），3.25（2H，m，H-2′and 5′），3.35（1H，dd，J=7.5、8.0 Hz，H-3′），3.30（1H，dd，J=8.0、8.0 Hz，H-4'），［3.69（1H，dd，J=5.0、12.0 Hz）、3.90（1H，br.d，ca.J=12 Hz），H2-6′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，CD3OD，见表1）谱数据与文献［19］相对照，鉴定该化合物为苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（benzyl alcohol O-β-D-glucopyranoside）。

表1 化合物1～7的13C-NMR（125 MHz，δ）谱数据

化合物7：白色粉末。高分辨Q-TOF-ESI-MS给出其准分子离子峰m/z 266.090 2［M-H］-，确定其分子式为C10H13N5O（4CalcdforC10H12N5O4，266.089 5）。1H-NMR（500 MHz，DMSO-d6）：δ 8.17（1H，s，H-2），8.38（1H，s，H-8），7.38（2H，s，6-NH2），5.91（1H，d，J=5.5 Hz，H-1′），4.64（1H，dd，J=3.0、5.5 Hz，H-2′），4.18（1H，t，J=3.0 Hz，H-3′），4.00（1H，m，H-4′），［3.59 （1H，dd，J=4.0、12.0 Hz）、3.71（1H，dd，J=3.0、12.0 Hz），H2-5′］。其1H-、13C-NMR（125 MHz，DMSO-d6，见表1）谱数据与文献［20］相对照，鉴定该化合物为腺苷（Adenosine）。

4 结果

为了进一步扩大对绵萆薢的开发与利用，笔者运用色谱和波谱学方法，对绵萆薢的化学成分进行了研究，分离并鉴定了以下7个单体成分，分别是Tachioside（1）、Isotachioside（2）、3，5-二甲氧基熊果苷（3）、2，6-二甲氧基-4-羟基-苯酚-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（4）、淫羊藿次苷D2（5）、苯甲醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（6）、腺苷（7）。其中，化合物1～3为首次从薯蓣属中分离得到，4～7为首次从该植物中分离得到。

5 讨论

绵萆薢最早记录于《神农本草经》，历史久远且疗效显著。但国内外对绵萆薢化学成分的研究报道尚少，据文献报道，其化学成分主要是甾体皂苷、二芳基庚烷、木脂素类等；具有抗骨质疏松、抗心肌缺血、抗肿瘤、抗真菌、调血脂、降尿酸、预防动脉粥样硬化等药理作用。因此，进一步开发与利用该植物，加强其化学成分与药理活性的筛选，可对其临床治疗与应用有指导性意义。

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Isolation and structural identification of constituents from Dioscoreae spongiosae Rhizoma

CHAO Li-ping，RUAN Jing-ya，LIU Yan-xia，HAN Li-feng，WANG Tao，ZHANG Yi
（Key Laboratory of Traditional Chinese Medicinal Chemistry and Analytical Chemistry of Tianjin，Tianjin 300193，China）

［Objective］Study on chemical constituents of Dioscoreae spongiosae Rhizoma.［Methods］The chemical constituents were obtained by ODS，Sephadex LH-20 and PHPLC chromatorgraphy isolation，and identified by chemical and spectral analysis.［Results］The structures of seven comounds were elucidated to be tachioside（1），isotachioside（2），koaburaside（3），2，6-dimethoxy-4-hydroxyphenol-1-O-β-D-glucopyranoside（4），icariside D2（5），benzyl alcohol O-β-D-glucopyranoside（6），and adenosine（7），respectively.［Conclusion］Compounds 1～3 were obtained from Dioscoreae genus firstly，and 4～7 was isolated from the plant for the first time.

Dioscoreae spongiosae Rhizoma；chemical constituents；structural identification

R284

A

1673－9043（2016）05－0336-04

2016-05-04）

新世纪优秀人才支持计划资助项目（NCET-12-1069）；天津市高等学校创新团队培养计划资助项目（TD12-5033）。

晁利平（1989-），女，硕士研究生，主要从事中药化学与分析研究。

张 祎，E-mail:zhwwxzh@263.net。