乙型肝炎病毒母婴垂直传播与Th1/Th2型细胞因子相关性研究

栗军香，沈香荣，郑丽娟，翟淑景，李红梅，王文霞，刘艳竹

(1. 河北工程大学附属医院，河北 邯郸 056002；2. 河北省涉县妇幼保健院，河北 涉县 056400；3. 五矿邯邢总医院，河北 邯郸 056001；4. 河北省涉县中医院，河北 涉县 056400)



乙型肝炎病毒母婴垂直传播与Th1/Th2型细胞因子相关性研究

栗军香1，沈香荣1，郑丽娟2，翟淑景3，李红梅2，王文霞2，刘艳竹4

(1. 河北工程大学附属医院，河北 邯郸 056002；2. 河北省涉县妇幼保健院，河北 涉县 056400；3. 五矿邯邢总医院，河北 邯郸 056001；4. 河北省涉县中医院，河北 涉县 056400)

目的研究探讨乙型肝炎病毒(HBV)母婴垂直传播与1型及2型辅助性T细胞相应细胞因子的相关性。方法选择乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)阳性的孕妇87例作为观察组，并根据新生儿脐血乙肝五项及HBV DNA检测结果，将其中14例检测阳性发生胎儿宫内感染者为宫内感染组，73例检测阴性未发生宫内感染者为宫内未感染组；同时选择44例正常孕妇作为对照组。应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测每组孕妇外周血及新生儿脐血相关细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-4(IL-4)和白细胞介素-6(IL-6)水平，比较各组IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平变化及与HBV母婴垂直传播的相关性。结果宫内感染组孕妇血清IFN-γ、IL-12水平较宫内未感染组及正常对照组均显著降低(P均<0.05)，IL-4、IL-6水平则较未感染组及对照组显著升高(P均<0.05)；而宫内未感染组以上各因子水平与对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。各组孕妇血清IFN-γ与IL-12、IL-4与IL-6均呈显著正相关关系(P均<0.05)，IFN-γ与IL-4 、IL-6及IL-12与IL-4及IL-6均呈显著负相关关系(P均<0.05)。各组新生儿脐血中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。结论HBsAg阳性孕妇Th1/Th2型细胞免疫功能紊乱，导致Th1和Th2相关的细胞因子免疫水平失衡，IFN-γ、IL-12水平显著降低，抗病毒能力下降，导致孕妇体内HBV清除障碍，从而易引起HBV母婴垂直传播而发生胎儿宫内感染。

乙型肝炎病毒；垂直传播；Th1/Th2型细胞；细胞因子；相关性

乙型肝炎病毒(HBV)感染是世界范围内最常见的传染病之一，也是一直以来都不能彻底消除的疾病。HBV感染后病情极易反复和慢性化，很难治愈，逐渐发展会引起肝硬化、肝癌等严重危及患者生命的并发症。母婴垂直传播是HBV感染的主要传播途径之一。慢性HBV携带者约占HBV感染的1/4，而在全部携带者中约一半的患者是由母婴垂直传播引发的[1]。WHO推荐新生儿出生后按常规免疫程序及时注射乙肝疫苗和乙肝免疫球蛋白以阻断产时、产后HBV的母婴垂直传播，然而对于一些携带HBV孕妇虽然进行了预防性联合免疫治疗，其后代中仍有新生儿发生HBV早期感染，说明他们可能发生了HBV宫内感染。可见如何提高母体的细胞免疫功能和特异性免疫应答，对清除其体内的感染HBV，阻断HBV宫内感染具有重要意义[2]。肝炎是多种免疫细胞及细胞因子参与免疫异常反应性疾病，已知Th1/Th2细胞及相关细胞因子的免疫平衡失调参与多种疾病的发生发展，Th1/Th2型细胞因子免疫平衡失调与机体内HBV的清除有关，然而有关Th1/Th2细胞因子与HBV母婴垂直传播的研究报道较少。Th1型细胞免疫反应可增强机体抵抗病毒等微生物感染的能力，而Th2型细胞免疫反应则会促进感染的进展、慢性化，故宿主对感染病毒的清除与否，要看体内的免疫反应是以Th1型为主还是以Th2型为主[3]。本研究通过检测孕妇及新生儿Th1/Th2细胞相关细胞因子水平，探讨干扰素-γ(IFN-γ)、白细胞介素-12(IL-12)、白细胞介素-4(IL-4)及白细胞介素-6(IL-6)与HBV母婴垂直传播的相关性，从而为有效防止HBV母婴垂直传播及胎儿宫内感染寻找新的途径和思路。

1　临床资料

1.1一般资料选择2014年4月—2015年12月在河北工程大学附属医院进行产前检查和分娩的单胎足月HBsAg阳性孕妇87例作为观察组，年龄20～39岁，孕周36～43周，孕妇肝功能均正常。排除标准：具有先兆流产或早产史、病原体感染史及其他妊娠合并症者，近期服用抗病毒或激素药物者，患有其他病毒性肝炎或非病毒性肝炎及严重全身疾病者，胎儿先天畸形和配偶HBV携带者。根据新生儿脐血乙肝五项及HBV DNA检测结果，将14例检测结果阳性发生HBV宫内感染者作为宫内感染组，将73例检测结果阴性未发生HBV宫内感染者作为宫内未感染组。并选择同期分娩的HBsAg阴性的正常孕妇44例作为对照组，年龄19～39岁，孕周36.5～43周。各组孕妇的年龄、孕周、分娩方式差异均无统计学意义(P均>0.05)，具有可比性。

1.2研究方法

1.2.1样本采集采集所有孕妇分娩时空腹静脉血3 mL，血标本以3 000 r/min，离心15 min取上清，置于EP管中，于-80 ℃冰箱保存待检，以检测血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平。在新生儿出生脐带结扎切断后首针乙肝疫苗免疫接种前，留取无菌条件下脐静脉血2 mL，以3 000 r/min，离心15 min取上清，一部分用于检测乙肝五项及HBVDNA，其余-80 ℃冰箱保存，待检测血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平。

1.2.2检测方法新生儿脐血乙肝五项测定采用全自动化学发光分析仪，用双抗夹心酶联免疫吸附法(ELISA)进行定量，试剂盒购自武汉众生生物工程有限公司；采用荧光定量PCR法进行脐血HBV DNA的定量检测，试剂购自珠海赛乐奇生物技术公司，以上实验均严格按试剂盒说明书操作。采用双抗夹心ELISA法测定孕妇外周血及新生儿脐血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平，试剂盒购自美国TPI公司，严格按说明书操作。

1.3HBV母婴垂直传播的判断新生儿出生脐血检测血清HBsAg、HBV DNA两项指标中任一指标阳性即诊断为发生宫内感染；新生儿脐血检测HBsAg、HBV DNA两项指标均为阴性即未发生宫内感染。

2　结　　果

2.1各组孕妇血清中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的水平比较宫内感染组孕妇血清IFN -γ、IL-12 水平均显著低于宫内未感染组及对照组(P均<0.05)，宫内未感染组上述两细胞因子水平与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。宫内感染组孕妇血清IL-4、IL-6水平均显著高于宫内未感染组及对照组(P均<0.05)，而宫内未感染组与对照组比较差异无统计学意义(P均>0.05)。见表1。

表1　3组孕妇外周血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的 水平比较

注：①与宫内感染组比较，P<0.05。

2.2孕妇血清IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6的相关性分析宫内感染组、宫内未感染组及对照组三组孕妇血清IFN-γ水平与IL-12水平均呈正相关关系(r=0.947，0.925，0.861，P均<0.05)；3组IL-4水平与IL-6水平亦呈正相关关系(r=0.904，0.892，0.854，P均<0.05)；而IFN-γ与IL-4、IL-6水平(r=-0.874，-0.912，-0.903，P均<0.05；r=-0.859，-0.811，-0.763，P均<0.05)及IL-12与IL-4、IL-6水平(r=-0.931，-0.926，-0.915，P均<0.05；r=-0.938，-0.914，-0.902，P均<0.05)均呈负相关关系。

2.3各组新生儿血清中IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比较3组新生儿脐血IFN -γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比较差异均无明显统计学意义(P均>0.05)。见表2。

表2　3组新生儿脐血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6 水平比较

3　讨　　论

HBV感染人体后，通常不会直接造成组织功能破坏而是引发一定的免疫反应，产生CD4+T细胞介导的细胞毒作用或免疫复合物作用而造成机体细胞的损害。胎儿期HBV感染往往会发展为慢性携带状态，甚至发展为肝硬化和肝癌[4]。因此，对乙肝表面抗原阳性的产妇采取有效措施避免通过母婴垂直传播方式造成其后代的HBV宫内感染显得尤为重要。机体内感染HBV的清除与特异性免疫应答有关，目前认为Th1/Th2细胞系统的免疫平衡紊乱是HBV感染慢性化及母婴垂直传播的可能机制之一，而Th1/Th2细胞失衡又会影响相应的细胞因子之间的平衡[5]。当机体正常状态时，Th1和Th2两种细胞因子相互作用而处于动态平衡，以维持机体正常的细胞及体液免疫功能，而以上两种类型的细胞因子也是正常妊娠过程中所需要的重要调节因子，这种细胞因子间的动态平衡一旦被打破，则将会引起疾病的发生、发展[6]。IFN-γ水平通常作为Th1细胞功能的重要特征性指标，是由淋巴细胞、巨噬细胞等分泌的一种重要细胞因子，具有免疫调节作用，可促进Th1型细胞的分化，上调相应的免疫反应，可起到抑制病毒复制及清除病毒的作用。IFN-γ可抑制IL-4的转录、活化，从而可拮抗IL-4因子的作用。IL-12属于促炎性细胞因子，主要功能是介导和增强细胞免疫反应。研究指出IL-12可促进Th1细胞的生成及增加其活性，同时可抑制Th2细胞的生成，促进Th1型细胞因子如IFN-γ、IL-2等的表达，增强机体的细胞免疫功能，从而可有效抵抗病毒的感染[7]。IL-4水平是代表Th2 细胞功能的重要细胞因子，其可刺激和诱导Th0细胞转化为Th2细胞，从而增强Th2型细胞免疫应答[8]。IL-6主要是由Th2细胞分泌的免疫调节关键因子，参与机体的多种免疫生理及病理过程。研究表明慢性乙肝患者血清IL-6水平显著升高，且与肝炎病情的严重程度密切相关[9]。因此，对以上Th1和Th2两种相关细胞因子的研究对阻断HBV母婴垂直传播具有重要的现实意义。

本研究中87例HBsAg阳性的孕妇发生新生儿HBV宫内感染率为16.1%。宫内感染组孕妇血清IFN -γ、IL-12水平均显著低于宫内未感染组及对照组，而IL-4、IL-6水平均显著高于宫内未感染组及对照组；宫内未感染组与对照组比较上述细胞因子水平差异无明显统计学意义。这与林海英等[10]研究结果基本一致。这说明存在HBV宫内感染的孕妇其机体的免疫状态失衡，表现为Th2型免疫反应占优势而抑制了Th1型免疫反应，孕妇Th1/Th2系统的免疫失衡可能是HBV母婴垂直传播的重要机制。Th2型细胞因子IL-4、IL-6的水平升高使得IFN -γ、IL-12水平下降，机体的防御能力和抗病毒作用减弱，抑制了Th1细胞免疫反应对HBV的清除，而致使孕妇体内病毒载量逐渐升高，而此种情况又可反过来进一步加大Th1/Th2细胞间的失衡，从而导致易发生胎儿HBV宫内感染[11]。本研究显示，宫内感染组、宫内未感染组及对照组3组孕妇血清IFN-γ水平与IL-12水平均呈正相关；3组IL-4水平与IL-6水平亦呈正相关；而IFN-γ与IL-4、IL-6水平及IL-12与IL-4、IL-6水平均呈负相关。说明Th1型和Th2型的同种类型细胞因子之间是互相促进的，随着IL-12升高，IFN-γ水平升高，而IL-12的抗病毒也是通过诱导IFN-γ阻止HBV的复制而发挥作用的。而Th1型和Th2型的不同细胞因子之间是互相抑制的，随着IL-4、IL-6水平的升高，IFN-γ、IL-12水平随之降低，而导致其抗病毒作用减弱，易使胎儿发生HBV母婴垂直传播。另外，本研究结果显示，3组新生儿脐血IFN -γ、IL-12、IL-4及IL-6水平比较差异均无统计学意义。这说明胎儿和新生儿机体的免疫功能尚未完全发育成熟，各种免疫细胞功能低下，抗体及相应的细胞因子缺陷或水平低下，故易发生病毒感染，且可能会产生免疫耐受而不利于及时有效地清除病毒而极易导致感染的持续和慢性化。可见，对HBV母婴垂直传播的预防关键环节是孕妇的防治。通过检测孕妇血清Th1/Th2型细胞因子的水平可判断母体的免疫状态及对病毒清除的能力，从而预测胎儿HBV宫内感染的可能性。

综上所述，Th1/Th2型细胞因子的免疫失衡与HBV母婴垂直传播密切相关。建议对胎儿及新生儿HBV宫内感染的预防重点应放在对孕妇的管理，可通过检测孕妇外周血IFN-γ、IL-12、IL-4及IL-6等细胞因子的水平，对胎儿HBV宫内感染做出初步的预测。同时应进行大样本的多中心研究，以确定可能发生胎儿HBV感染的细胞因子界值水平，进一步研究如何通过调节孕妇体内细胞因子的水平阻断HBV母婴传播，寻找降低HBV宫内感染的新方法。

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10.3969/j.issn.1008-8849.2016.29.028

R512.62

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1008-8849(2016)29-3269-03

2016-03-25