苦参碱联合胸腺五肽对卵巢癌腹腔热化疗后大鼠一般状态的影响

王兴玲，于明新

(中国医科大学肿瘤医院，辽宁 沈阳 110042)



苦参碱联合胸腺五肽对卵巢癌腹腔热化疗后大鼠一般状态的影响

王兴玲，于明新

(中国医科大学肿瘤医院，辽宁 沈阳 110042)

目的探讨苦参碱联合胸腺五肽对经腹腔热化疗干预的卵巢癌大鼠一般状态的影响。方法将58只大鼠随机分为对照组和观察组，最后每组各有23只造模成功。2组造模成功大鼠均进行腹腔热化疗(顺铂)并同时给予胸腺五肽腹腔灌注，观察组在此基础上给予苦参碱腹腔灌注，共干预3周。比较2组大鼠造模前后及干预后大鼠体质量、腹围，取血检测CK、AST、LDH水平和CA125水平。采血完成后处死大鼠，观察腹腔内情况，测定腹水量及肿瘤质量。结果2组大鼠造模后体质量、腹围及血清酶学指标、CA125水平均明显高于造模前(P均<0.05)，但是2组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；2组大鼠干预后体质量、腹围及血清酶学指标、CA125水平均明显高于造模后(P均<0.05)，但观察组均明显低于对照组(P均<0.05)。干预后观察组腹水量及肿瘤质量均明显低于对照组(P均<0.05)。结论行腹腔热化疗的卵巢癌大鼠给予苦参碱联合胸腺五肽，有助于改善卵巢癌大鼠的一般状态并抑制肿瘤生长，为临床实践提供一定理论基础。

卵巢癌；苦参碱；胸腺五肽；腹腔热化疗；CA125

早期卵巢癌临床症状不明显，一般到晚期才出现临床症状，发现较困难，这给该病的诊断带来了困难，因此卵巢癌居妇科恶性肿瘤病死率之首。临床上往往采取综合治疗(手术结合化疗)，但是其临床疗效仍较差，因此需要寻求一种新的治疗方案[1]。腹腔热化疗(intraperitoneal hyperthermic chemotherapy，IPHC)是近年来出现的一种用于配合手术治疗腹腔恶性肿瘤和腹腔肿瘤复发及转移的综合化疗方案，针对卵巢癌属于热敏感性肿瘤这一特点且转移方式主要以腹腔内局部浸润及种植转移为主，因此非常适合采取IPHC[2-3]。苦参碱是从苦参中提取出来的一种抗肿瘤活性物质，能通过激活肿瘤凋亡基因的表达及激活自身免疫活性来发挥抗肿瘤活性[4]。胸腺五肽是一种常用的免疫调节剂，广泛用于恶性肿瘤辅助化疗[5]。本实验成功建立卵巢癌大鼠模型，给予IPHC及免疫调节剂干预，旨在进一步评价该治疗方案的可行性及疗效，现将结果报道如下。

1　实验资料

1.1实验动物与卵巢癌细胞株的选择选用58只近交系健康雌性Fischer344大鼠，北京维通利华实验动物科技有限公司，合格证号：SCXK(京)2012-0001，周龄8～10周，体质量120～150 g；NuTu19卵巢癌细胞株(上海纪宁生物科研有限公司)。

1.2主要试剂苦参碱(粉末，纯度>99%)由美国Sigma公司提供；胸腺五肽由深圳翰宇药业股份有限公司提供(5 mg/支，白色粉末状)；顺铂(20 mg/支，白色粉末状)为齐鲁制药有限公司提供；酶联免疫法检测试剂盒(CA125)由美国Sigma公司提供；血清肌酸激酶(CK)、天门冬氨基酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)检测试剂盒均为南京建成生物技术公司提供。

1.3主要仪器Model2300CO2培养箱(美国Sheldon公司提供)；EG162型低温离心机(美国Sigma公司提供)。

1.4实验方法

1.4.1分组按照随机数字表法将大鼠分为观察组和对照组，每组29只。大鼠每4只一笼普通颗粒饲料喂养，自由饮水取食，人工控温20～26 ℃，12 h光照，12 h黑暗。2组大鼠基础资料比较差异无统计学意义(P>0.05)。见表1。

表1　2组大鼠造模前基本情况比较±s)

1.4.2细胞培养方案在RPMI-1640培养液(含10%小牛血清)中接种NuTu-19细胞，放于CO2培养箱中培养(37 ℃)。

1.4.3Fischer344大鼠上皮性卵巢癌动物模型建立方法[6]用胰酶消化所培养出来的对数生长期NuTu-19细胞并调整细胞计数，将细胞(5×106/只)注射入大鼠腹腔中，然后在SPF条件下饲养，每周测1次体质量，观察动物生长情况(体质量增长)，记录一般状态(毛发情况、行动速度、反应速度、饮食情况)，饲养3周后进行干预。

1.4.4干预方案根据NuTu-19细胞的生物学特征[6]及其体外细胞药敏实验证实对顺铂敏感性高[半抑制浓度(IC50)值=0.83 μg/mL]，因此将顺铂注射液浓度用生理盐水调整为0.83 μg/mL。2组大鼠均每日给予腹腔注射辅助性免疫增强剂胸腺五肽1 mg/(kg·d)、顺铂20 mL(每周三进行，每周1次)，灌注液利用电热恒温水浴箱一次性加热，使药液进入腹腔时温度维持在43 ℃。观察组在对照组干预基础上给予腹腔注射苦参碱注射液1 mg/(kg·d)。苦参碱、胸腺五肽均溶解于生理盐水中(1 mg/mL)配成混悬液，现用现配。2组均连续干预3周。

1.5检测指标①造模前后及干预后测大鼠体质量、腹围。②造模前后及干预后抽取静脉血3 mL，注入玻璃试管中，静置10 min，3 000 r/min离心10 min，提取血清在-70 ℃保存，按照试剂盒说明检测CK、AST、LDH水平。③造模前后及干预后抽取尾缘静脉血2 mL，将血清1 000 r/min离心20 min后抽取上清液置于试管中，测定血清CA125水平，具体步骤依据试剂盒说明进行。④采血完成后处死大鼠，观察腹腔内情况，分离瘤体，测定腹水量及肿瘤质量。

2　结　　果

2.1大鼠造模情况及一般状态58只大鼠成功造模46只，其中造模过程中死亡6只，造模后出现严重腹水导致恶病质4只，造模未达到实验所需的卵巢癌模型2只。造模过程中大鼠均出现不同程度的腹围增加与食欲减退、毛色暗淡、反应力减慢。2组各有23只大鼠造模成功，干预中对照组死亡2只、观察组死亡3只，对照组完成实验大鼠21只、观察组完成实验大鼠20只。

2.22组造模前后及干预后体质量、腹围比较2组大鼠造模前体质量、腹围比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；2组大鼠造模后体质量、腹围均明显高于造模前(P均<0.05)，但是2组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；2组大鼠干预后体质量、腹围均明显高于造模后(P均<0.05)，但观察组均明显低于对照组(P均<0.05)。见表2。

表2　2组造模前后及干预后体质量、腹围比较±s)

注：①与对照组比较，P<0.05。

2.32组造模前后及干预后血清酶学指标比较2组大鼠造模前血清酶学指标比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；2组大鼠造模后血清酶学指标均明显高于造模前(P均<0.05)，但2组间比较差异均无统计学意义(P均>0.05)；2组大鼠干预后血清酶学指标均明显高于造模后(P均<0.05)，但观察组均明显低于对照组(P均<0.05)。见表3。

2.42组造模前后及干预后血清CA125水平比较2组大鼠造模前血清CA125水平比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组大鼠造模后血清CA125水平均明显高于造模前(P均<0.05)，但2组间比较差异无统计学意义(P>0.05)；2组大鼠干预后血清CA125水平均明显高于造模后(P均<0.05)，但观察组明显低于对照组(P<0.05)。见表4。

表3　2组造模前后及干预后血清酶学指标比较±s,IU/L)

注：①与对照组比较,P<0.05。

表4　2组造模前后及干预后血清CA125水平 比较

注：①与对照组比较，P<0.05。

2.52组大鼠处死后腹腔内情况及腹水、肿瘤质量比较2组大鼠腹腔内均有大量腹水，大网膜增厚并粘连，腹膜、肠管等处均有直径1～3 mm粟粒状结节，2组均未发现肝、肺转移；且肉眼观察发现观察组大鼠肠粘连严重程度轻于对照组。观察组腹水量与肿瘤质量均明显低于对照组(P均<0.05)。见表5。

表5　2组干预后腹水及肿瘤质量比较±s)

3　讨　　论

卵巢恶性肿瘤约90%来源于上皮，其主要的转移途径是腹盆腔内播散种植，因该病早期临床表现不明显，大部分患者就诊时就进入晚期，腹腔内已发生广泛转移，手术难以根治，5年生存率只有30%[7]。IPHC近年来广泛应用于临床，Ⅱ期以上卵巢癌行减瘤术后常用该类方法治疗[8]。顺铂是有着优良临床使用经验的化疗药物，但同时存在不良反应多(骨髓抑制、胃肠反应为主)及患者耐受性差的缺点，降低了其临床疗效[9]。苦参碱是从中药苦参的干燥根中提取的一类生物活性物质，其具有较全面且较强的抗肿瘤活性，通过诱导肿瘤细胞分化凋亡来达到抗肿瘤目的，同时能很好地抑制肿瘤的浸润和远处转移，抑制肿瘤新生血管的形成，可以增强宿主的自身免疫力与抗肿瘤活力，降低肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，治疗过程中还有一定的止痛效果，可降低化疗药物的不良反应，也可以用作肿瘤的预防性化疗[10]。胸腺五肽是人工化学合成的免疫调节剂，是胸腺生成素Ⅱ第32～36位的氨基酸片段，但具有胸腺生成素的活性，胸腺五肽可诱导T淋巴细胞分化，促进T淋巴细胞亚群发育成熟并活化，同时调节T淋巴细胞亚群的比例，使之趋于正常[11]。

本实验结果显示，2组大鼠造模后体质量、腹围及血清酶学指标、CA125水平均明显高于造模前，但是2组间比较差异均无统计学意义；2组大鼠干预后体质量、腹围及血清酶学指标、CA125水平均明显高于造模后，但观察组均明显低于对照组。干预后观察组腹水量及肿瘤质量均明显低于对照组。结果与尹艳英[2]、李盛等[12]研究结果相同。提示卵巢癌会导致腹水增加，而免疫调节剂能延缓腹水增加，化疗药物能抑制瘤体增生，且免疫调节剂能抑制化疗药物所致的肝细胞损伤。

综上所述，行腹腔热化疗的卵巢癌大鼠给予苦参碱联合胸腺五肽，有助于改善卵巢癌大鼠的一般状态并抑制肿瘤生长，为临床实践提供了一定理论基础。

[1]邢堃,孔为民. 卵巢癌放疗的现状和进展[J]. 现代妇产科进展,2015,24(1):69-71

[2]尹艳英. 腹腔热化疗对大鼠卵巢癌血清CA125表达水平影响的研究[J]. 齐齐哈尔医学院学报,2010,31(22):3529-3532

[3]Yoshida Y,Sasaki H. Efficacy of intraperitoneal continuous hyperthermic chemotherapy as consolidation therapy in patientswith advanced epithelial ovarian cancer:along-term follow-up[J]. Oncol Rep,2005,13(1):121-125

[4]毛玲,薛天阳,许伟. 苦参碱对人肾母细胞瘤SK-NEP-1细胞趋化因子受体4表达的影响[J]. 临床儿科杂志,2014,32(5):467-470

[5]李刚. 胸腺五肽对胃癌化疗患者CD4+CD25+Treg细胞的影响及临床意义[J]. 中国社区医师,2011,13(13):244-245

[6]Gurkan Zorlu C,EylemSeker Ari P. Hyperthermia ingynecologiccancers[J]. Eur J Gynaecol Oncol,2003,24(3/4):282-286

[7]Conti M,DeGiorgi U,Tazzari V,et al. Clinical pharmacology of intraperitonealcisplatin-based chemotherapy[J]. Cheother,2004,16(5):23-25

[8]Hildebrandt B,Wust P,Ahlers O,et al.Thecellular and mo-lecular basis of hyperthermia[J]. Crit Rev Oncol Hematol,2002,43(1):33-56

[9]池丽芬,李民驹. 顺铂腹腔热灌注化疗与其他用药方式药代动力学比较[J]. 实用肿瘤杂志,2000,15(3):179-182

[10] 王云,龙发. 苦参抗肿瘤机制的研究进展[J]. 现代肿瘤医学,2015,23(2):280-282

[11] 赵春玲. 胸腺五肽配合化疗治疗中晚期恶性肿瘤疗效观察[J]. 中国营养保健,2013,23(4):612

[12] 李盛,周国勇. 注射用脂质体紫杉醇抗F344大鼠卵巢癌移植瘤的作用[J]. 中国医院药学杂志,2015,35(19):1746-1749

Effects of matrine combined with thymopeptide-5 on general state in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy

WANG Xingling, YU Mingxin

(Tumor Hospital of China Medical University, Shenyang 110042, Liaoning, China)

Objective It is to study the effects of matrine combined with thymopeptide-5 on immune function in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy. Methods 46 rats which were successfully modelled ovariancarcinoma were randomly divided into two groups: observation group (n=23) and control group (n=23). The rats in both groups were given intraperitoneal hyperthermic chemotherapy (cis-platinum) and thymopeptide-5, whereas the rats in the observation group were given matrine on this basic, the course of treatment were 3 weeks. The waist circumference, weight, ascitic fluid, the weight of tumor mass, liver enzyme and the level of CA125 in the two groups of rats were compared before and after molding and after treatment.Results The level of waist circumference, weight, CA125 and liver enzyme indexes were higher than that before treatment in both groups(P<0.05), but the indexes in the observation group were lower than that in control group (P<0.05). Ascitic fluid, the weight of tumor mass were smaller in the observation group than that in control group after treatment (P<0.05).Conclusion Matrine combined with thymopeptide-5 can improve the general state and inhibit the growth of tumor in rats with ovariancarcinoma treated by intraperitoneal hyperthermic chemotherapy, and provide certain theoretical basis for clinical practice.

ovariancarcinoma; matrine; thymopeptide-5; intraperitoneal hyperthermic chemotherapy; general state; CA125

王兴玲，女，硕士，主治医师，从事妇科肿瘤方面研究工作。

于明新，E-mail：986193242@qq.com

辽宁省自然科学基金项目(2013225021)

10.3969/j.issn.1008-8849.2016.29.002

R-332

A

1008-8849(2016)29-3196-03

2016-04-10