1 350例新生儿溶血三项试验的血清学检测分析

郭莹莹　霍姿含　王　震　刘　冰

(吉林大学白求恩第一医院,长春130021)



1 350例新生儿溶血三项试验的血清学检测分析

郭莹莹霍姿含王震①刘冰

(吉林大学白求恩第一医院,长春130021)

目的：探讨由母婴血型不合引起的新生儿溶血病(HDN)的血型分布及其溶血三项试验在HDN诊断中的价值。方法：对2014年1月到2016年1月临床送检的O型或Rh阴性的产妇脐带血标本及高胆红素血症的新生儿血液标本用微柱凝胶检测卡进行溶血三项试验，并对结果进行统计学分析。结果：(1)1 350例标本中，母婴血型不合者占918例，确诊为HDN的有569例， 阳性率为62.0%。569例HDN三项试验结果为：直抗试验阳性率为27.9%(159/569)，游离抗体试验阳性率为86.5%(492/569)，抗体释放试验均为阳性。其中直抗阴性+游离阳性+释放阳性的组合与其他各组合相比有统计学差异(P<0.05)。(2)918例血型不合标本中，ABO HDN阳性率为73.8%(551/747)，Rh HDN阳性率为10.5%(18/171)，两者差异有统计学意义(P<0.05)。(3)747例ABO血型不合标本中，A型阳性率为80.0%(280/350)，B型阳性率为68.3%(271/397)，两者差异有统计学意义(P<0.05)。(4)171例Rh血型不合标本中，Rh D阳性率为17.7%(14/79)，Rh E阳性率为6.8%(4/59)，Rh C阳性率为0(0/33)，三者差异有统计学意义(P<0.05)。结论：抗体释放试验敏感度最高，是判定HDN最有力的证据。母婴ABO 血型不合引起的HDN发生概率明显高于Rh不合，A型血患儿发生HDN的概率明显高于B型血患儿，Rh D不合引起的HDN发生概率明显高于Rh E和Rh C。

新生儿溶血病； 直接抗人球蛋白试验； 游离抗体试验； 抗体释放试验

新生儿溶血病(Hemolytic disease of newborn,HDN)是指母婴血型不合而引起的胎儿或新生儿的免疫性溶血性疾病。胎儿的红细胞进入母体循环中，致使母体产生相应的IgG抗体，该类抗体通过胎盘作用于胎儿的红细胞，使其产生不同程度的溶血现象。临床表现为胎儿水肿、贫血、早产或死胎，新生儿黄疸、贫血 、 肝脾肿大、水肿、 核黄疸后遗症等。在人类30多个血型系统中，多数血型系统都能引起HDN 。在我国最常见的是母婴ABO血型系统不合引起，人群中HDN发病率为15.6%[1]。在国外Rh血型系统不合发病率较高，其他罕见血型系统不合少有报道[2]。因此，准确的围产期HDN 监测可为早期防治提供依据，对优生优育、提高婴儿生存质量具有重要的现实意义 。

对HDN的早期诊断与防治，现已成为临床研究的热点。HDN实验室血清学检测在早期诊断中广泛应用，为临床预防和诊治HDN的发病提供重要参考价值。HDN的血清学检测主要采用“三项试验”，即直抗试验(直接抗人球蛋白试验)、游离试验(游离抗体试验)和释放试验(抗体释放试验)。近几年国内对于当地HDN血清学检测报道也不少，但可能由于样本量不够多，或地区血型分布不一，所得出结论不一。针对长春地区患者量最大的医院，本实验室对近两年产科和新生儿科送来的1 350例疑似HDN的母婴血液标本进行了相关检测与统计，结果报道如下。

1　材料与方法

1.1材料

1.1.1标本来源选择2014年1月到2016年1月，吉林大学白求恩第一医院产科和新生儿科的1 350例疑似HDN的标本。包括O型和Rh阴性产妇(年龄20～46岁、孕龄36～40周)的脐带血，以及出生3 d内发生高胆红素血症的新生儿的血液标本。血样取自母婴双方，用EDTA-K2抗凝全血2～5 ml，抽血后即时送检，3 h内完成检验。

1.1.2主要试剂和仪器戴安娜微柱凝胶检测卡包括ABO-Rh血型检测卡和抗人球蛋白卡由北京斑珀斯公司提供，配套的WADiana专用离心机和专用微柱孵育器也由北京斑珀斯公司提供；ABO标准红细胞和酸放散试剂盒购自长春博迅生物技术有限责任公司。

1.2方法

1.2.1血型血清学检测参照《全国临床检验操作规程》[3]，采用微柱凝胶技术对血液标本进行血型血清学检测[4]，如下：测定母亲及患儿ABO血型和Rh(D、C和E)血型，并对母婴血型不合的患儿进行直接抗球蛋白试验、游离抗体试验和抗体释放试验。其中，抗体释放试验采用酸放散试剂盒进行检测。

1.2.2结果判读红细胞留在微柱上端或分布在凝胶中为试验结果阳性，红细胞沉降至微柱底部为试验结果阴性。

1.3统计学处理采用SPSS17.0统计学软件进行数据处理，率的比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1母婴血型鉴定结果1 350例标本中，母婴ABO血型均为O型、Rh血型为母阳性婴阴性或两者完全同型的，共计432例。母婴血型不合者共计918例，有母O型、婴A型或B型，或母Rh某抗原阴性婴Rh相应抗原阳性。

2.2溶血三项试验结果经检测，母婴血型不合的918例标本中，HDN阳性结果为569例， 阳性率为62.0%。569例HDN三项试验阳性结果为：直抗试验阳性为159例，阳性率为27.9%；游离抗体试验阳性为492例，阳性率为86.5%；放散抗体试验均为阳性。三项试验各种组合情况如表1。阳性率从高到低依次为游离+释放阳性、直抗+游离+释放阳性、单项释放阳性、直抗+释放阳性。其中游离+释放的阳性率与各项差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.3HDN血型分布结果母婴血型不合的918例标本中，ABO系统不合者有747例，HDN阳性结果占551例，阳性率达73.8%；Rh系统不合者有171例，HDN阳性结果占18例，阳性率达10.5%，见表2。ABO HDN与Rh HDN的阳性率有统计学差异(P<0.05)。747例ABO系统不合标本中，A型有350例， HDN阳性占280例，阳性率达80.0%；B型有397例， HDN阳性占271例，阳性率达68.3%，见表3；A型和B型HDN阳性发生率有统计学差异(P<0.05)。171例Rh系统不合标本中，Rh D占79例， HDN阳性占14例，阳性率达17.7%；Rh E有59例， HDN阳性占4例，阳性率达6.8%；Rh C有33例，均为HDN阴性，见表4。D、C、E阳性率有统计学差异(P<0.05)。

表1569例HDN阳性的三项试验组合情况

Tab.1569 cases of HDN positive combination of three trials

Directanti-globulintestFreeanti-bodytestAntibdyrelea-sedtestn(%)--+68(12.0)-++342(60.0)+++150(26.4)+-+9(1.6)

Note：+.Positive；-.Negative.

表2918例HDN结果比较

Tab.2Comparison of 918 HDN results

BloodgroupsystemTestcasesPositivecasesPositiverateABO74755173.80%Rh1711810.50%

表3747例ABO HDN结果比较

Tab.3Comparison of 747 ABO HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateA35028080.00%B39727168.30%

表4171例 Rh HDN结果比较

Tab.4Comparison of 171 Rh HDN results

BloodgroupTestcasesPositivecasesPositiverateRhD791417.70%RhE5946.80%RhC3300

3　讨论

HDN 可由多种原因引起，以母婴血型不合最为常见。其中ABO血型不合最常见，其次为Rh血型不合。国内文章大多报道ABO HDN，少有Rh HDN的概况。在本研究中，对ABO和Rh 血型系统均做检测，得出ABO HDN阳性率73.8%远远高于Rh HDN阳性率10.5%。

HDN的发病与母亲体内IgG血型免疫抗体种类和胎儿红细胞表面抗原密切相关，只有IgG抗体可经胎盘进入胎儿体内，引发溶血现象[5]。O型血人体内有IgG抗A和IgG抗B两种抗体，ABO HDN多发生于怀有A型或B型胎儿的O型母亲中，故临床主要针对O型产妇和A型或B型婴儿进行HDN检测。自然界广泛存在类A和类B，故ABO HDN多发生于第一胎。临床上由抗-A 引起的HDN要比抗-B 常见[6]，由于胎儿红细胞上的A位点(抗原决定簇)比B位点多，故A型HDN发病率比B型高[7]。本研究也发现，本地区A型HDN阳性率80%远高于B型阳性率68.3%。与国内辛荣传等[8]报道一致，在高胆红素血症新生儿中，A型血患儿发生HDN的概率明显较B型血患儿高。

母婴Rh血型系统不合是指母亲为Rh抗原阴性、胎儿为Rh抗原阳性。Rh抗原存在于胎儿红细胞膜上，其抗原数量随着妊娠时间的延长而增加，其患病风险也随之增高[9]。Rh HDN好发于多胎、多次输血后的孕产妇。与ABO HDN相比，Rh HDN较少发生，但一旦发病，其溶血程度更为严重。Rh血型系统含有多种抗原，常见的有D、C、c、E和e，其中以D抗原的免疫原性最强，其溶血程度远高于其他抗原[10]。在本研究中，对母婴Rh血型的D、C和E三种抗原进行检测。171例Rh系统不合标本中，Rh D引起的HDN阳性率17.7%远高于Rh E阳性率6.8%，尚未发现Rh C不合引起的HDN。这与丁晶等[11]文献中报道的Rh血型系统引起的HDN的比例一般为15%～20%，且D抗原在其发病总数中占多数相符。

HDN的确诊依赖于溶血三项试验包括直抗试验、游离抗体试验和抗体释放试验[12]。其中，直抗试验是检测新生儿的红细胞是否已被母体IgG类抗体所致敏，在HDN诊断中有重要作用，阳性结果提示患儿红细胞被抗体致敏， 阳性范围提示发生溶血的相关程度[13]。但由于ABO HDN患儿红细胞上抗体往往结合的很少，使直抗试验常出现阴性的结果。在本研究中，直抗试验阳性率仅占27.9%(159/569)得以印证。但在Rh HDN中，18例直抗试验均为强阳性，足以说明Rh血型不合所致的HDN，其溶血程度更为严重，仅凭直抗试验即可初步有效诊断Rh HDN。直接抗人球蛋白试验阳性结果是区别ABO和Rh溶血病的重要标志[14]。

游离抗体试验则检测患儿血清中是否有IgG类抗体的存在，有助于观察疾病的发展趋势和治疗。本研究中，游离试验的阳性率高达86.5%(492/569)，说明大多检测结果均为阳性。但HDN发病患儿的游离抗体也有部分检测结果为阴性。这与母体IgG进入胎儿体内的量有关，如果进入量少吸附到红细胞上，血浆中则无游离抗体，若有游离抗体，则提示病情严重。

在HDN的溶血三项试验中，以抗体释放试验最为重要，是确诊试验[15]。抗体释放试验是诊断ABO HDN最有力证据，阳性结果表明患儿红细胞被母体IgG抗A(B)抗体所致敏[16]。本研究阳性率为100%(569/569)。统计三项试验结果不同阴阳性组合发现，确诊为ABO HDN的结果最常见的是直抗阴性、游离阳性和释放阳性。确诊为Rh HDN的结果为直抗、游离和释放三项均呈阳性。也充分表明，Rh HDN一旦发病，其严重程度远高于ABO HDN。

实验室溶血三项试验的血清学检测为临床上诊断新生儿溶血病提供了重要依据，此项试验的开展和普及具有重要的临床意义。对产科O型及Rh阴性产妇的脐带血进行三项试验的检测，实现了早

期对HDN的筛查和预防。对高胆红素血症的新生儿进行三项试验的检测，可以快速实现对新生儿溶血病的确诊，为患儿的治疗争取时间，提高治疗效率，减少后遗症的发生。

[1]胡丽华,余忠清,曹奎杰.黄疸患儿ABO /Rh新生儿溶血病发病率的调查[J].中国输血杂志,2002,13(1):120-121.

[2]余忠清,梁涛,胡丽华.新生儿溶血病临床研究进展[J].中华临床医师杂志,2011,5(12):3554-3556.

[3]叶应妩,王毓三,申子瑜 .全国临床检验操作规程[M].第3版.南京:东南大学出版社,2006:256.

[4]刘达庄.免疫血液学[M].上海:上海科学技术出版社,2002:224-225.

[5]贾波,靳十周,李晓雪.标本溶血对ABO和Rh血型鉴定的影响[J].中国输血杂志，2011,24(12):1065-1066.

[6]Roberts IA.The changing face of haemolytic disease of the newborns[J].Early Development,2008,84:515-523.

[7]Sarper N.Mild hemolytic anemia,progressive neuromotor retardation and fatal outcome:a disorder pf glycolysis,triose-phpsphate isomerase deficidency[J].Turk J Pediatr,2013,55(2):198-202.

[8]辛荣传.新生儿溶血病三项试验在临床中的应用[J].国际检验医学杂志,2014,35(6):680-681.

[9]Urbaniak SJ,Greiss MA.RhD hameolytic disease of the fetus and the newborn[J].Blood Rev,2000,14:44-61.

[10]Onesimo R,Rizzo D,Ruggiero A,etal.Intravenous immunoglobulin therapy for anti-E hemolytic disease in the newborn[J].Matern Fetal Neonatal Med,2010,23:1059-1061.

[11]丁晶,刘捷,曾超美,等.足月新生儿贫血发生时间及影响因素的研究[J].中国妇幼保健,2012,27(27):4229-4231.

[12]Cianciarullo MA,Ceecon ME，Vaz FA.Prevalence of immunohematologic tests at birth and the incidence of hemolytic disease in the newborn[J].Rev Assoc Med Bras,2003,49(1):45-53.

[13]金汉珍,樊绍曾.微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用[J].热带医学杂志 ,2006 ,6(5):549-551.

[14]卢磊,刘燕.微柱凝胶技术在新生儿溶血病检测中的应用[J].中国现代医生,2010,48(13):38-39.

[15]Brumit MC,Stubbs JR.Conventional tube agglutination with polyethylene glycol versus Red Cell Affinity Column Technolgy(REACT)：acompanson of antibody deteetion methods[J].Ann Clin Lab Sci,2002,32(2):155-158.

[16]张钦辉.临床输血学[M].上海:上海科学技术出版社,2000:97-105.

[收稿2016-03-07修回2016-04-25]

(编辑张晓舟)

Analysis of three serological tests results of hemolytic disease of newborn in 1 350 cases

GUO Ying-Ying，HUO Zi-Han，WANG Zhen，LIU Bing.

The First Bethune Hospital of Jilin University,Changchun 130021，China

Objective:To explore blood type distribution of newborns hemolytic disease(HDN) caused by maternal and neonatal blood type incompatibility and analyze the value of hemolysis three trials in the diagnosis of HDN.Methods: Hemolysis three trials of type O or Rh negative maternal cord blood samples and hyperbilirubinemia of the newborn blood samples from January 2014 to 2016 were detected by micro-column gel test cards.Then the results were statistically analyzed.Results: (1) There were 918 cases of maternal and neonatal blood type incompatibility in all 1350 cases.569 cases were detected HDN positive with the rate of 62%(569/918).Among 569 cases,the positive rate of direct anti-globulin test,free antibody test and antibody released test were 27.9%(159/569),86.5%(492/569) and 100% respectively.There was statistical difference of the combination of direct anti-globulin test negative,free antibody test positive and antibody released test positive compared with other combinations(P<0.05).(2)There was statistical difference of HDN positive rate between ABO 73.8%(551/747) and Rh 10.5%(18/171)in 918 cases of blood type incompatibility.(3)There was statistical difference between A positive rate of 80%(280/350) and B positive rate of 68.3%(271/397) in 747 cases of ABO incompatibility.(4)There was statistical difference among RhD positive rate of 17.7%(14/79),RhE positive rate of 6.8%(4/59) and RhC positive rate of 0(0/33).Conclusion: Antibody released test was the most sensitive test in hemolysis three trials to diagnose HDN.The probability of HDN positive caused by maternal and neonatal ABO blood type incompatibility was significantly higher than Rh.The probability of HDN positive with type A newborns was significantly higher than type B.The probability of HDN positive caused by RhD blood type incompatibility was significantly higher than RhE and RhC.

Hemolytic disease of newborns;Direct anti-globulin test;Free antibody test;Antibody released test

10.3969/j.issn.1000-484X.2016.09.025

郭莹莹(1984年-)，女，硕士，技师，主要从事输血相容性检测方面的研究。

及指导教师：刘冰(1962年-)，女，主任技师，主任，主要从事疑难血型鉴定及各项输血相关检测方面的研究。

R722.18

A

1000-484X(2016)09-1357-04

①吉林大学中日联谊医院,长春130000。