卵巢癌个体化治疗的可行性

刘贤英　程杰平　祁盛昆　陈　晗　向　梅　侯丽娜　于龙光

(吉林大学第二医院，吉林　长春　130041)



卵巢癌个体化治疗的可行性

刘贤英程杰平祁盛昆1陈晗向梅侯丽娜2于龙光

(吉林大学第二医院，吉林长春130041)

目的探讨原代人卵巢癌细胞对4种化疗药物的敏感性。方法应用原代人卵巢癌细胞为靶点，观察其对4种化疗药物的敏感性。MTT法检测原代卵巢癌细胞的增殖抑制率，流式细胞仪检测细胞周期进程的变化，透射电子显微镜观察其亚细胞结构改变。结果MTT结果显示，斑蝥酸钠维生素B6、顺铂对培养的卵巢癌细胞敏感性较强，而紫杉醇、环磷酰胺敏感性次之，组间比较差异显著(P<0.05)。流式细胞仪结果显示不同的化疗药物诱导原代卵巢癌细胞周期分布表现为G0/G1期细胞增多，S期细胞减少，G2/M期细胞相对增多，细胞凋亡率升高，组间比较差异显著(P<0.05)。透射电子显微镜下可见细胞核染色质趋边凝集、线粒体肿胀，可见凋亡小体改变。结论原代人卵巢癌细胞培养及药物敏感性实验为卵巢癌术后个体治疗提供重要参考依据。此对降低化疗药物的毒副作用，避免多药耐药的产生，尤其对远端微小转移灶的治疗有重要意义。

卵巢癌；个体化治疗；细胞周期；凋亡

1吉林大学临床学院2012级

2空军航空大学教官训练基地一团卫生队

卵巢癌为三大妇科恶性肿瘤之一，发病隐匿，早期诊断率低，大部分患者确诊时已是晚期，其死亡率居妇科肿瘤首位，随着肿瘤细胞学的发展和大量靶向药物的临床应用及临床试验，使得肿瘤治疗的个体化领域得到了迅速发展，从细胞水平预测治疗方式的有效性和药物敏感性不仅成为可能，而且也成为必然趋势〔1〕。因此，对卵巢癌发病机制和诊断及靶向治疗策略，具有一定的研究和应用价值。

1　材料与方法

1.1材料8例人卵巢癌组织由我科住院病人提供，均有病理诊断。RPMI1640培养基，噻唑蓝(MTT)试剂购于美国sigma公司。4种抗肿瘤药物：斑蝥酸钠维生素B6、顺铂、环磷酰胺、紫杉醇由我院药剂科提供，

1.2方法(1)原代卵巢癌细胞制备方法参考文献〔2〕进行，略加改进。(2)MTT比色法：取制备好的人卵巢癌细胞悬液，调细胞数为2×105/ml，加入96孔塑料培养板内，每孔100 μl。根据预实验结果，分别加入斑蝥酸钠维生素B6终浓度为5 μg/ml，顺铂5 μg/ml,紫杉醇5 μg/ml及环磷酰胺20 μg/ml，置37℃5%二氧化碳培养箱内静止培养24 h。(3)流式细胞术、细胞培养及分组同(2)，不同之处是将96孔塑料培养板改为25 ml培养瓶进行。(4)透射电子显微镜技术，细胞培养及分组同(3)。

1.3统计学处理采用SPSS17.0软件行t检验。

2　结　果

2.1MTT结果对照组、斑蝥酸钠组、顺铂组、紫杉醇组、环磷酰胺组A值分别为1.36±0.12，0.78±0.19，0.89±0.17，0.95±0.23，1.04±0.17。斑蝥酸钠维生素B6、顺铂对原代人卵巢癌细胞敏感性好，抑制率41.8%和34.6%，而紫杉醇，环磷酰胺抑制率为30.2%和23.6%，组间比较差异显著(P<0.01,P<0.05)。

2.2流式细胞仪结果4种抗肿瘤药物对原代人卵巢癌细胞周期进程均有影响，G0/G1期细胞增多，S期细胞减少，G2/M期细胞相对增多。但是，斑蝥酸钠维生素B6、顺铂敏感性较好，优于紫杉醇、环磷酰胺组。见表1。

表1　4种抗癌药物对人卵巢癌细胞周期进程的影响±s，%)

与对照组比较：1)P<0.05;2)P<0.01

2.3透射电子显微镜结果四种抗肿瘤药物均致卵巢癌细胞超微结构改变，可见细胞空化，膜系统破坏，染色质凝集深染，可见凋亡小体。见图1。

A：斑蝥酸钠组原代卵巢癌细胞染色质趋边、凝集，可见凋亡小体；B：顺铂组原代卵巢癌细胞染色质呈条索状，膜系统破坏；C：紫杉醇组原代卵巢癌细胞线粒体肿胀、胞器肿胀,大量空泡出现；D：环磷酰胺组原代卵巢癌细胞可见空泡形成图1　四组细胞透射电子显微镜下改变(×5 000)

3　讨　论

卵巢癌的常规治疗是手术为主，并辅以术后化疗的联合治疗。然而由于中晚期卵巢癌肿瘤体积大，肿瘤细胞在腹腔内形成多种组织器官的种植转移，临床治疗时相对比较辣手〔3〕。因此，如何正确对卵巢癌术后复发实施恰当合理的治疗是一个值得研究和探讨的临床问题〔4〕。本研究结果显示斑蝥酸钠维生素B6、顺铂对原代人卵巢癌细胞有明显的增殖抑制作用，而紫衫醇、环磷酰胺次之，抑制细胞增殖是细胞凋亡的一种有效方式，这一点从细胞凋亡率上得到体现。研究证实MTT实验可准确反映活细胞数量及细胞活化状态，被广泛于抗肿瘤药物筛选和细胞毒性实验研究，具有一定的客观性。

流式细胞仪结果显示，4种化疗药物对原代卵巢癌细胞周期进程均有影响，使细胞周期发生明显改变，G0/G1期细胞比例升高，S期细胞比例减少，从而使G2/M期细胞相对增多，与正常对照组相比差异有统计学意义。细胞周期是细胞生命活动中一个重要过程。在细胞周期4个时相中，G0/G1期是启动细胞周期循环的关键，细胞增殖是一个高度保守且备受多种细胞因子的严格控制〔5〕，任何一个环节失控即可发生功能和形态学改变。通过流式细胞仪分析，斑蝥酸钠维生素B6组的细胞周期被阻滞在G0/G1期，增殖能力减弱，效果最好。斑蝥酸钠是斑蝥素的半合成衍生物，保留了斑蝥素的抗肿瘤作用〔6〕，其机制为：①抑制肿瘤细胞蛋白质和核酸的合成，继而影响RNA、DNA的生物合成；②降低肿瘤细胞CAMP磷酸二酯酶活性；③改变线粒体膜的通透性，尤其是斑蝥酸钠与维生素B6合剂应用可进一步减轻化疗的不良反应，效果明显优于其他抗肿瘤药物。文献报道，人卵巢癌细胞对铂类药物敏感〔7〕。本文结果显示5 μg/ml顺铂对人卵巢癌细胞抑制率为34.6%，较斑蝥酸钠维生素B6次之。但是铂类药物毒副作用较强，且易产生耐药，不宜长期使用；而紫杉醇虽然也是从植物中提取的抗肿瘤药物，对人卵巢癌细胞抑制率为30.2%，但是由于昂贵的价格限制了临床应用；而环磷酰胺属于化学合成药，具有一定的副作用，且疗效一般。

此外，笔者还应用透射电子显微镜观察不同抗肿瘤药物对原代卵巢癌细胞的亚细胞水平改变。可见细胞器肿胀，线粒体膜破裂，有大量空泡呈现，细胞核染色质凝集，可见凋亡小体。

综上所述，取手术切除的卵巢癌组织，制备单细胞培养，进行药物敏感性实验，用于卵巢癌术后的个体化治疗，将为预防卵巢癌的复发提供最佳治疗途径。

1苏丹，马胜林，祁鸣.基因导向性肿瘤治疗个体化研究进展〔J〕.国际肿瘤学杂志,2010;37(3)：176-8.

2程海光，李超.原代骨肉瘤细胞培养及药敏试验〔J〕.中国老年学杂志,2012;32(24):6223-5.

3Ahmed N,Abubakert K,Findlay J,etal.Epithelial mesenchymal transition and cancer stem cell-like phenotypes facilitate chemoresistance in recurrent ovarian cancer〔J〕.Curr Cancer Drug Targets,2010;10(3);268-78.

3Hope JM,Blank SV.Current status of maintenance therapy for advanced ovarian cancer〔J〕.Int J Women Health,2010;1:173-80.

4Cai Y,Xia Q,Luo R,etal.Berberine inhibits the growth of human colorectal adenocarcinoma in vitro and in vivo〔J〕.J Nat Med,2014;68(1):53-62.

5Pratheeshkumar P,Kuttan G.Oieanolie acid induces apoptosis by modulating P53,Bax,Bcl-2 and caspase-3 gene expression and regu-lates the activstion of transcription factors and cytokine profile in B16F〔J〕.J Environ pathil Toxico J Oncol,2011;30(1):21-31.

6刘忠虎,陈艾江,马新刚,等.斑蝥酸钠维生素B6注射液辅以胸腔镜内脏神经切断术治疗癌腹痛〔J〕.国际肿瘤学杂志,2013;40(5)：398-9.

7赵晓艳.晚期上皮性卵巢癌新辅助化疗的疗效分析〔J〕.国际肿瘤学杂志,2014;41(10):792-4.

〔2015-12-31修回〕

(编辑曲莉)

于龙光(1960-)，男，副教授，主要从事四肢关节研究。

刘贤英(1966-)，女，医学博士，主要从事妇科肿瘤研究。

R735.3

A

1005-9202(2016)17-4167-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.014