肺耐药相关蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与多药耐药的相关性

刘　亮　左　静　武中林　王光大　倪晓辰　赵　丽　左连富

(河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式细胞室，河北　石家庄　050011)



肺耐药相关蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及其与多药耐药的相关性

刘亮左静1武中林2王光大3倪晓辰4赵丽左连富

(河北医科大学第四医院肿瘤研究所流式细胞室，河北石家庄050011)

目的检测肺耐药相关蛋白(LRP)在食管鳞状细胞癌中的表达及其与食管癌多药耐药的相关性。方法通过免疫组化S-P法检测LRP在食管鳞状细胞癌及正常食管黏膜组织中的表达，并检测LRP与食管鳞状细胞癌不同临床病理特征的相关性。结果LRP在食管鳞状细胞癌中表达水平显著高于正常食管组织(P<0.01)，食管鳞状细胞癌组织中LRP阳性表达水平与各临床病理特征无相关性(P>0.05)。结论LRP在食管鳞状细胞癌组织中的高表达可能参与了食管鳞状细胞癌多药耐药的形成。

食管鳞癌；免疫组化；多药耐药；肺耐药相关蛋白

大多食管癌患者发现疾病时已是癌症晚期，丧失了手术治疗的机会，只能进行化疗或放疗，且化疗是控制食管癌术后复发、转移的重要手段，但目前药物治疗效果不理想。且肿瘤细胞对化疗药物的耐药性，严重影响了疗效。肺耐药相关蛋白(LRP)与肿瘤的多药耐药密切相关，广泛分布在多种肿瘤组织中〔1～3〕。本文探讨LRP在不同食管组织中的表达及其与食管鳞状细胞癌耐药的相关性。

1　材料与方法

1.1食管组织收集河北医科大学第四医院2008年1月至2009年12月经病理诊断证实的食管癌病例150例，从中选出80例食管鳞状细胞癌和正常食管黏膜组织用于LRP蛋白的免疫组化检测，男55例，女25例；年龄38～83〔平均(58.38±6.70)〕岁。

1.2主要试剂LRP抗体、二氨基联苯胺(DAB)试剂盒、免疫组化二抗试剂盒均由北京中杉金桥生物技术有限公司生产。

1.3免疫组化方法检测LRP蛋白按常规免疫组化S-P法操作，结果判定：细胞质和(或)细胞核出现棕黄色颗粒为阳性细胞。根据肿瘤细胞染色程度及阳性细胞所占百分比进行综合评分，①阳性(+)，阳性细胞数>10%；②阴性(-)，无阳性细胞或阳性细胞数≤10%。

1.4统计学方法采用SPSS11.5统计软件进行χ2检验。

2　结　果

图1　不同食管黏膜组织中LRP蛋白表达(DAB，×200)

2.1LRP蛋白在不同食管黏膜组织中的表达图1可见，LRP阳性产物定位于细胞质和细胞核，呈棕黄色颗粒状，弥散或散在分布。食管正常黏膜中LRP蛋白表达阳性率35.00%(28/80)，明显低于食管鳞状细胞癌组织LRP蛋白阳性表达率55.00%(44/80)(P=0.005)。

2.2食管鳞状细胞癌中LRP蛋白阳性表达与不同临床病理特征的关系食管鳞状细胞癌中LRP蛋白的阳性表达与癌组织分化程度、浸润深度及淋巴结转移无相关性(P>0.05)，见表1。

表1　食管鳞癌中LRP蛋白表达与临床病理特征的关系(n)

3　讨　论

肿瘤细胞对化疗药物的耐药一直是临床最为重视的问题，它影响到治疗效果和愈后情况，有观点认为肿瘤细胞的耐药性是肿瘤细胞在化疗药物的作用下所发生的生物学改变，如药物外流的增多〔4〕，药物吸收的减少〔5〕，药物代谢酶的功能恢复，结合酶的活动〔6～8〕，DNA的修复使细胞对凋亡的敏感性降低〔9,10〕及药物靶点的突变〔11～13〕等。近年研究的热点集中在药物外流增多，目前的研究机制认为化疗药物可通过细胞膜和(或)细胞核上的蛋白和(或)通道将药物输送到细胞外，从而使得肿瘤细胞内化疗药物的浓度降低，导致化疗药物不能杀伤肿瘤细胞，表现为肿瘤细胞对化疗药物的耐药。在过去的研究中本研究小组发现具有药物外排泵作用的三磷酸腺苷结合盒(ABC)B1及G2与食管鳞状细胞癌的多药耐药有关〔14～16〕。

LRP是1993年Scheper等〔17〕在人非小细胞肺癌的P-gp阴性的多药耐药(MDR)细胞系SW-1573/2R120中首次发现，因此被命名为LRP。LRP基因定位于染色体16p13.1-16p11.2，编码分子量110 000的蛋白。LRP蛋白含有896个氨基酸残基，95%的LRP位于细胞质中，5%位于核膜的胞质和核膜孔附近。LRP广泛分布在肿瘤组织中，且在肿瘤组织中表达率及表达强度明显高于正常组织，但不同肿瘤其表达率不同。LRP可能通过两种机制引起MDR，它可使以细胞核为靶点的药物不能通过核孔进入细胞核，即使进入也在发生药效前被泵出核外；或可使胞质中药物进入囊泡，并通过胞吐作用排出细胞外，从而使细胞内抗癌药的浓度降低，表现出抗癌药对肿瘤细胞的作用降低，即肿瘤细胞对抗癌药的耐药。LRP虽然也具有将药物排出的作用，但它没有消耗ATP，而是主要通过“胞吐作用”将药物排出细胞外，异于ABCB1及ABCG2引起耐药的作用机制。本研究发现LRP可能与食管鳞状细胞癌耐药有关，但与食管癌的疾病程度无关。

1Qiu ZQ，Zhao K.Expression of ERCC1，RRM1 and LRP in non-small cell lung cancers and their influence on chemotherapeutic efficacy of gemcitabine concomitant with nedaplatin〔J〕.Asian Pac J Cancer Prev,2014；15(17)：7303-7.

2Tsuji K，Wang YH，Takanashi M，etal.Overexpression of lung resistance-related protein and P-glycoprotein and response to induction chemotherapy in acute myelogenous leukemia〔J〕.Hematol Rep，2012；4(3)：e18.

3Li S，Shi H，Ji F，etal.The human lung cancer drug resistance-related gene BC006151 regulates chemosensitivity in H446/CDDP cells〔J〕.Biol Pharm Bull,2010；33(8)：1285-90.

4van den Heuvel-Eibrink MM，Sonneveld P，Pieters R.The prognostic significance of membrane transport-associated multidrug resistance(MDR)proteins in leukemia〔J〕.Int J Clin Pharmacol Ther,2000；38(3)：94-110.

5Liu Q，Ohshima K，Kikuchi M.High expression of MDR-1 gene and P-glycoprotein in initial and re-biopsy specimens of relapsed B-cell lymphoma〔J〕.Histopathology,2001；38(3)：209-16.

6Kaufmann WK.Analysis of the topoisomerase Ⅱ-dependent decatenation G2 checkpoint and checkpoint kinases in human cells〔J〕.2009；582()：167-87.

7Hawtin RE，Stockett DE，Byl JA，etal.Voreloxin is an anticancer quinolone derivative that intercalates DNA and poisons topoisomerase Ⅱ〔J〕.PloS One，2010；5(4)：e10186.

8Chen Z，Liang X，Zhang H，etal.A new class of naphthalimide-based antitumor agents that inhibit topoisomerase Ⅱ and induce lysosomal membrane permeabilization and apoptosis〔J〕.J Med Chem，2010；53(6)：2589-600.

9Gariboldi MB，Ravizza R，Riganti L，etal.Molecular determinants of intrinsic resistance to doxorubicin in human cancer cell lines〔J〕.Int J Oncol，2003；22(5)：1057-64.

10余景星，刘星，徐波.多西他赛诱导HL-60/ADR细胞凋亡及对P-gp、BCL-2、BAX蛋白表达的影响〔J〕.中国实验血液学杂志，2010；18(2)：311-6.

11Schildkraut JM，Iversen ES，Wilson MA，etal.Association between DNA damage response and repair genes and risk of invasive serous ovarian cancer〔J〕.PloS One，2010；5(4)：e10061.

12盖晓东，李国利，黄京子，等.野生型p53基因对肝癌细胞多药耐药的逆转作用及其相关机制〔J〕.癌症，2006；25(8)：954-9.

13Li YX，Lin ZB，Tan HR.Wild type p53 increased chemosensitivity of drug-resistant human hepatocellular carcinoma Bel7402/5-FU cells〔J〕.Acta Pharmacol Sin，2004；25(1)：76-82.

14Liu L，Zuo LF，Guo JW.ABCG2 gene amplification and expression in esophageal cancer cells with acquired adriamycin resistance〔J〕.Mol Med Rep，2014；9(4)：1299-304.

15Liu L，Zuo LF，Guo JW.Reversal of multidrug resistance by the anti-malaria drug artesunate in the esophageal cancer Eca109/ABCG2 cell line〔J〕.Oncol Lett，2013；6(5)：1475-81.

16刘亮，左静，赵丽，等.ABCB1、ABCG2与食管癌患者多药耐药的关系〔J〕.中国老年学杂志，2011；31(1)：15-7.

17Scheper RJ，Broxterman HJ，Scheffer GL，etal.Overexpression of a M(r)110，000 vesicular protein in non-P-glycoprotein-mediated multidrug resistance〔J〕.Cancer Res，1993；53(7)：1475-9.

〔2015-05-30修回〕

(编辑苑云杰/曹梦园)

河北省自然科学基金(H2012206107)；河北省医学科学研究重点课题(20160167)；河北省普通高等学校强势特色学科肿瘤学建设经费〔冀教高(2005)52号〕

刘亮(1981-)，男，医学博士，副教授，主要从事食管癌早期诊断及治疗研究。

R735.1

A

1005-9202(2016)17-4141-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.17.002

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