夏枯草不同溶剂提取物抗氧化活性研究

宋莉，倪世峰，李亚君，王春侠

（1.江苏省徐州医药高等职业学校，江苏徐州221116；2.徐州市工会干部学校，江苏徐州221000）

夏枯草不同溶剂提取物抗氧化活性研究

宋莉1，倪世峰2，*，李亚君1，王春侠1

（1.江苏省徐州医药高等职业学校，江苏徐州221116；2.徐州市工会干部学校，江苏徐州221000）

比较夏枯草不同溶剂提取物的抗氧化活性。分别以蒸馏水、70%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇为溶剂制备夏枯草提取物，以VC为阳性对照考察各溶剂提取物的抗氧化活性；结果表明夏枯草不同溶剂提取物均具有抗氧化活性，70%乙醇提取物具有较高的DPPH·、·OH清除活性和脂质体过氧化抑制活性，蒸馏水提取物O2-·清除活性最高。总酚含量与提取物DPPH·清除活性、·OH清除活性、O2-·清除活性、脂质体过氧化抑制活性相关性较高，黄酮含量与DPPH·清除活性相关性较高。夏枯草70%乙醇提取物和蒸馏水提取物抗氧化活性相对较高。

夏枯草；抗氧化活性；多糖；总酚；黄酮

夏枯草有降血压、增强免疫力等多种功效［1］，在我国有悠久的药用和食用历史。自由基是一类具有氧化活性的分子或原子，与机体许多疾病的发生密切相关［2］。由于一些合成抗氧化剂存在不同程度的毒副作用，从植物中提取的天然抗氧化剂以其安全、无毒等优点正成为研究热点，越来越受到欢迎。目前夏枯草抗氧化活性的研究主要集中在单一成分，整体活性研究相对缺乏，因此本研究考察夏枯草不同溶剂提取物的体外抗氧化能力，旨在为夏枯草在食品领域的应用提供试验支持。

1　材料与方法

1.1材料、试剂与仪器

夏枯草：购于安国中药材市场。

没食子酸（批号为110831-201403）：芦丁标准品（批号为100080-201408）：中国药品生物制品检定所；Folin-Ciocalteu试剂（分析纯）：Sigma公司；1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH，分析纯）：Sigma公司；其余试剂均为市售分析纯。

DGX-92438-2型干燥箱：上海福玛实验设备有限公司；分析天平：METTLER TOLEDO；RE52CS-1旋转蒸发仪：上海亚荣生化仪器厂；FD-1B-50冷冻干燥机：北京博医康实验仪器有限公司；752PC型紫外可见分光光度计：上海光谱仪器有限公司。

1.2方法

1.2.1夏枯草不同溶剂提取物制备

将夏枯草55℃干燥，粉碎过20目筛，按料液比1∶30（g/mL）分别加入不同提取溶剂（蒸馏水、70%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇），回流提取1 h，提取2次，抽滤，合并滤液并浓缩，冷冻干燥得提取物。

1.2.2多糖含量测定

参考《中国药典2015版》测定提取物中多糖含量。葡萄糖标准曲线方程为y=6.5x+0.03，R2=0.996 1。

图1　葡萄糖标准曲线Fig.1The standard curve of glucose

1.2.3总酚含量测定

标准曲线绘制：精密称取12.5 mg没食子酸标准品于5 mL容量瓶中，用50%甲醇溶解并定容，吸取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 mL于EP管中，用50%甲醇补至1.0 mL。分别吸取上述溶液各0.2 mL，加入2.0 mL 50%Folin-Ciocalteu试剂、4.0 mL 0.2 g/L NaCO3溶液，用蒸馏水定容至10.0mL，混匀，40℃水浴2h，于760nm处测定吸光值。以吸光值为横坐标，没食子酸浓度为纵坐标，绘制标准曲线［3］。没食子酸标准曲线方程为y= 0.169 2x+0.004 6，R2=0.993 9。

图2　没食子酸标准曲线Fig.2The standard curve of gallic acid

样品测定：以0.2 mL样品溶液代替没食子酸标准溶液测定样品中总酚含量。

1.2.4黄酮含量测定

标准曲线绘制：精密称取5mg芦丁标准品于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容，吸取0.0、0.5、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL于10 mL容量瓶中，加入10%AlCl30.4 mL，摇匀，加入4%NaOH溶液4.0 mL，蒸馏水定容，摇匀放置15 min，以蒸馏水为空白对照，于510 nm处测定吸光值。以吸光值为横坐标，芦丁浓度为纵坐标，绘制标准曲线［4-5］。芦丁标准曲线方程为y=10.571x-0.004 3，R2=0.998。

图3　芦丁标准曲线Fig.3The standard curve of rutin

样品测定：以1.0 mL样品溶液代替芦丁标准溶液测定样品中黄酮含量。

1.2.5抗氧化活性测定

1.2.5.1DPPH·清除能力测定

将提取物配制成浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mg/mL的溶液，作为待测样品备用，按文献［6］方法测定DPPH·清除能力。

1.2.5.2·OH清除能力的测定

将夏枯草提取物配制成浓度分别为0.1、0.3、0.5、0.7、0.9、1.1、1.3、1.5 mg/mL的溶液，作为待测样品备用，按文献［7］方法测定·OH清除能力。

1.2.5.3O2-·清除能力的测定

将夏枯草提取物配制成浓度分别为0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8 mg/mL的溶液，作为待测样品备用，按文献［8］方法测定O2-·清除能力。

1.2.5.4抑制脂质体过氧化能力的测定

将夏枯草提取物配制成浓度分别为5、10、15、20、25、30、35、40 mg/L的溶液，作为待测样品备用，按文献［9］方法测定脂质体过氧化抑制能力。

2　结果与分析

2.1夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、总酚和黄酮含量

不同溶剂提取物得率以及提取物中多糖、总酚和黄酮含量测定结果见表1。

表1　夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、总酚和黄酮含量（±sD）Table 1The solid recovery，polysaccharide，total phenols and flavonoids contents of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

表1　夏枯草固形物得率以及提取物中多糖、总酚和黄酮含量（±sD）Table 1The solid recovery，polysaccharide，total phenols and flavonoids contents of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

注：同一列字母不同表示差异显著（P＜0.05）；“-”表示未检测到该成分。

溶剂固形物/%多糖/（mg/g）总酚/（mg/g）黄酮/（mg/g）蒸馏水17.52±1.43a42.37±2.36a121.36±2.14b10.31±0.07b70%乙醇14.54±0.98b5.473±0.33b134.29±3.14a14.46±0.16a无水乙醇13.23±1.13bc-88.14±1.39d4.73±0.10e乙酸乙酯15.33±0.68ab-102.34±2.17c9.13±0.07c正丁醇11.14±0.83c-72.38±2.30e7.39±0.09d

结果表明，夏枯草提取物中固形物、多糖、总酚和黄酮含量随提取溶剂不同而不同。以水为提取溶剂时固形物得率最高、提取物中多糖含量最高，以70%乙醇为提取溶剂时提取物中总酚和黄酮含量最高。

2.2夏枯草不同溶剂提取物DPPH·清除活性

夏枯草不同溶剂提取物DPPH·清除活性见图4。

图4　夏枯草不同溶剂提取物的DPPH·清除活性Fig.4Comparison of the DPPH·scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由图4可知，夏枯草不同溶剂提取物均具有DPPH·清除活性，在0.1 mg/mL～0.8 mg/mL浓度范围内，DPPH·清除率随提取物浓度的增加先逐渐升高后变化不再明显，且70%乙醇提取物活性最高，当浓度为0.8 mg/mL时，清除率为69.94%。蒸馏水提取物与VC效果相当，其次是乙酸乙酯提取物、正丁醇提取物、无水乙醇提取物。

2.3夏枯草不同溶剂提取物·OH清除活性

夏枯草不同溶剂提取物·OH清除活性见图5。

图5　夏枯草不同溶剂提取物的·OH清除活性Fig.5Comparison of the·OH scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由图5可知，夏枯草不同溶剂提取物均具有·OH清除活性，在0.2 mg/mL～1.6 mg/mL浓度范围内，清除率随提取物浓度的增加先逐渐升高后变化不再明显，当浓度达到1.1 mg/mL时，5种不同溶剂提取物中70%乙醇提取物活性最高，当浓度为1.5 mg/mL时，·OH清除率为78.64%。蒸馏水提取物与70%乙醇提取物效果相当，其次是乙酸乙酯提取物、无水乙醇提取物、正丁醇提取物。

2.4夏枯草不同溶剂提取物O2-·清除活性

夏枯草不同溶剂提取物O2-·清除活性见图6。

由图6可知，不同溶剂提取物均具有O2-·清除活性，在0.2 mg/mL～0.8 mg/mL浓度范围内，O2-·清除率随提取物浓度的增加而升高后变化不再明显，当浓度达到0.6 mg/mL时，蒸馏水提取物活性最高，浓度为0.8 mg/mL时O2-·清除率为75.22%，高于相同浓度的VC，70%乙醇提取物活性与VC相当，其次是乙酸乙酯提取物、无水乙醇提取物，正丁醇提取物清除率最低。

图6　夏枯草不同溶剂提取物的O2-·清除活性Fig.6Comparison of the O2-·scavenging activities of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

2.5夏枯草不同溶剂提取物脂质体过氧化抑制率

夏枯草不同溶剂提取物脂质体过氧化抑制率见图7。

图7　夏枯草不同溶剂提取物的脂质体过氧化抑制活性Fig.7Comparison of the the ability of restraining liposome oxidation of Prunella vulgaris Linn.extracts with different solvents

由图7可知，不同溶剂提取物均对脂质体过氧化有一定的抑制作用，在5mg/L～40 mg/L浓度范围内，抑制率随浓度的增大而升高后变化不再明显。当浓度达到20 mg/L时，5种不同溶剂提取物中70%乙醇提取物活性最高，浓度为40 mg/L时，抑制率为71.27%，与VC效果接近。其次是蒸馏水提取物活性较高，乙酸乙酯提取物与无水乙醇提取物效果相当，正丁醇提取物活性较差。

2.6夏枯草不同溶剂提取物中总酚、黄酮含量与抗氧化活性的相关性

夏枯草不同溶剂提取物中总酚、黄酮含量与抗氧化活性的相关性如表2所示。

由表2可知，提取物中总酚含量与提取物DPPH·、·OH、O2-·清除活性、脂质体过氧化抑制活性相关性较高，黄酮含量与DPPH·清除活性相关性较高。

表2　提取物中总酚、黄酮含量与抗氧化活性的相关性Table 2The correlation between content of the polysaccharide，total phenols and flavonoids and the activity of different extracts from Prunella vulgaris Linn.

3　结论

夏枯草具有重要的药用价值和广泛的药理作用，其蒸馏水、70%乙醇、无水乙醇、乙酸乙酯、正丁醇提取物均具有一定的抗氧化活性。70%乙醇提取物具有相对较高的DPPH·、·OH清除活性和脂质体过氧化抑制活性，蒸馏水提取物O2-·清除活性最高。

不同溶剂提取物的抗氧化活性在一定范围内都呈现出一定量效关系，即提取物浓度越大，抗氧化活性越高。总酚含量与提取物DPPH·、OH·、O2-清除活性、脂质体过氧化抑制活性相关性较高，黄酮含量与DPPH·清除活性相关性较高，本研究为夏枯草资源的开发利用提供了一定试验支持。

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Study on Antioxidant Activity of Different Solvents Extracts of Prunella vulgaris Linn.

SONG Li1，NI Shi-feng2，*，LI Ya-jun1，WANG Chun-xia1
（1.Jiangsu Provincal Xuzhou Pharmaceutical Vocational College，Xuzhou 221116，Jiangsu，China；2.Xuzhou Trade Union Cadre School，Xuzhou 221000，Jiangsu，China）

The objective of this study was to explore the antioxidant activities of different solvent extracts of Prunella vulgaris Linn..The Prunella vulgaris Linn.were extracted with distilled water，70%ethanol，ethanol，ethyl acetate and n-butanol，the antioxidant activity was investigated with VCas positive control.All the five extracts exhibited antioxidant capacities.The extracts that extracted by 70%ethanol showed strong DPPH·，·OH clearing capacity and lipid peroxidation inhibiting，The extracts that extracted by distilled water showed higher O2-·clearing capacity.The content of total phenolics had a highly significant correlation with the DPPH·，·OH，O2-·clearance rate and lipid peroxidation inhibiting activity，the content of flavonoids had a highly significant correlation with the O2-·clearance rate.The extracts that extracted by 70%ethanol and distilled water had realitively higher antioxidant activity.

PrunellavulgarisLinn.；antioxidantactivity；polysaccharide；totalphenolics；flavonoids

10.3969/j.issn.1005-6521.2016.17.008

2016-03-09

宋莉（1982—），女（汉），讲师，学士，研究方向：天然药物、生物药物。