直接水解紫外光谱法测定猪肉中色氨酸的含量

张　松　吴　迪

(贵州师范大学 a.贵州省山地环境重点实验室;b.分析测试中心，贵州 贵阳 550001)



直接水解紫外光谱法测定猪肉中色氨酸的含量

张松a，b吴迪a，b

(贵州师范大学 a.贵州省山地环境重点实验室;b.分析测试中心，贵州 贵阳 550001)

通过直接水解，采用对二甲氨基苯甲醛显色的紫外光谱法测定猪肉中色氨酸的含量，建立了一种检出限低、精密度高、回收率高的分析方法。线性范围为0.02—14.0μg/mL，检出限为9.2ng，回收率为98.8%—103.5%。该方法简单快速，灵敏度高，适用于样品数目较多的定量分析。

直接水解；猪肉；色氨酸

色氨酸Tryptophan，(L-2-氨基-3(β-吲哚)丙酸)，在动物体内直接参与血浆蛋白质的更新，可促使核黄素发挥作用，有助于烟酸及血红素的合成，能显著增加怀孕动物胎仔体内抗体，对泌乳期的乳牛和母猪有促进泌乳作用。当畜禽缺乏色氨酸时，生长停滞，体重下降，脂肪积累降低，种公畜睾丸萎缩。色氨酸是一种重要的营养剂，是人类必需的氨基酸之一。它在人体内不能合成，必须由食物供给。色氨酸含量不足时，影响免疫球蛋白的合成，降低免疫功能，还会导致胰岛素分泌降低，所以色氨酸测定是评价食品营养的重要依据[1]。

目前，色氨酸的测定方法主要有比色法、荧光强度测定法、反相高效液相色谱法、气相色谱法和氨基酸分析法[2]。在氨基酸分析时，样品前处理如果采用盐酸水解法会使色氨酸全部被破坏掉；如果采用碱水解法即用淀粉为保护剂，氢氧化钠溶液作碱水解处理，这种方法回收率低，数据精密度差。本文采用直接水解紫外光谱法测定猪肉中的色氨酸，方法简单，易操作，数据重复性好，做了回收率、精密度试验，测定结果与其他方法比对，结果满意。

1　材料与方法

1.1样品采集

新鲜猪肉(里脊肉)，主要采集大三元猪肉3个样品、江口萝卜猪肉6个样品、特种野猪肉6个样品。

1.2实验试剂

硫酸溶液(21.2mol/L)：将576mL 98%的浓硫酸慢慢倒入300mL水中，冷却后定容至1L；对二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液(10mg/mL)：称取2.5g对二甲氨基苯甲醛，用21.2mol/L硫酸溶液溶解定容至250mL；0.2%亚硝酸钠溶液；10% KOH溶液；色氨酸标准储备液(0.1mg/mL)：准确称取0.010 0g L-色氨酸对照品，用少量10% KOH溶液溶解，用水定容至100mL。

1.3实验仪器

瓦里安CRAY 100紫外分光光度计；DFD-700恒温水浴箱。

1.4标准曲线的绘制及反应机理

分别向6支10mL试管中准确加入色氨酸储备液(0.1mg/mL)0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0mL(相当于加入色氨酸0，20，40，60，80，100μg)；再分别加水1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0mL，加入10% KOH 1.0mL，冷水浴，加入5.0mL对二甲氨基苯甲醛—硫酸溶液，摇匀，室温放置30min，加入0.2mL 0.2%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置20min。在590nm处以10mm比色皿测定吸光度，空白调零，以色氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

在酸性条件下，色氨酸与对二甲氨基苯甲醛发生缩合反应：

希夫碱对二甲氨基苯甲醛缩色氨酸为蓝色，在590nm有最大吸收，吸光度与色氨酸浓度成正比。

1.5猪肉样品的检测

取新鲜猪肉(里脊肉)，碎肉机粉碎，取0.25g(准确称量0.000 1g)于50mL比塞管中，加入25mL 10%KOH，37.5℃水解18h，冷却，用水定容到50mL，中速定量滤纸过滤,取续滤液2.0mL，加冷水浴，加入对二甲氨基苯甲醛硫酸溶液5.0mL，摇匀，室温放置30min，加入0.2mL 0.2%亚硝酸钠溶液，摇匀，放置20min，于590nm处测定吸光度。

2　结果

猪肉中色氨酸的含量测定结果如表1所示。

3　讨论

3.1色氨酸的标准曲线

色氨酸标准曲线如图1所示：色氨酸浓度与吸光值线性关系良好，y=0.121 4x-0.127 5，相关系数R=0.999 7，线性范围:0.02—14.0μg/mL，与朗伯—比尔定律相符,故可采用对照法计算测定结果。由信号强度的标准差的3倍与工作曲线斜率之比得出检出限为9.2ng[3]。

表1　猪肉中色氨酸的含量测定结果

3.2回收率试验

准备已知色氨酸含量的样品6份，分别加入不同量的标准色氨酸，按照前面的方法对其进行处理，回收率测定结果如表2所示。样品加标回收率均在95%—105%之内，表明该方法测定猪肉中色氨酸含量是可靠的。

表2　回收率测定结果

3.3精密度试验

本文采用变异系数来表示样品测量的精密度，通常变异系数小于10%，说明方法的精密度好[4]。从表3可以看出，该方法的变异系数均小于10%，说明该方法有很高的精密度。

表3　变异系数表

4　结论

本文采用直接水解法测定猪肉中色氨酸含量，建立了一种检出限低、精密度高、回收率高的分析方法。线性范围为0.02—14.0μg/mL，检出限为9.2ng，回收率为98.8%—103.5%。该方法简单快速，灵敏度高，同样适用于样品数目较多的定量分析。

[1]陈芷荃,杨若萱.婴儿奶粉中色氨酸测定方法的研究[J].上海食品科技,1986，(1):5—9.

[2]雷绍荣,胡谟彪,罗玲.饲料中色氨酸含量的测定[J].饲料工业,1997,18(12):31—32.

[3]蒲云月,陈少波.氨基酸分析仪法测定奶粉中色氨酸[J].农产品加工,2015,(8).

[4]赵寿春,吕明.紫外分光光度法测定食品中的色氨酸[J].黑龙江商学院学报,1988,(2).

责任编辑：李增华

10.3969/j.issn.1674-6341.2016.05.012

2016-06-24

张松(1981—)，男，贵州德江人，助理实验师。研究方向：仪器分析教学和重金属污染。

O657.3；Q517

A

1674-6341(2016)05-0028-02