滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血液流变学的影响

张本荣，李亚东，吴小二，俞浩

(1.庐江县中医院药剂科，安徽 庐江　231500;2.安徽科技学院食品药品学院，安徽 凤阳　233100)



滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血液流变学的影响

张本荣1，李亚东1，吴小二1，俞浩2

(1.庐江县中医院药剂科，安徽 庐江231500;2.安徽科技学院食品药品学院，安徽 凤阳233100)

目的观察滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血液流变学的影响。方法采用皮下注射肾上腺素加冰水浸泡复制寒凝血瘀证家兔模型，观察滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔全血黏度、血浆黏度，红细胞沉降速率和红细胞压积，红细胞聚集指数和刚性指数，以及二磷酸腺苷(ADP)诱导血小板聚集率的影响。结果与模型对照组比较，滁菊总黄酮能够改善寒凝血瘀证家兔全血黏度和血浆黏度(P<0.05或P<0.01)，降低红细胞沉降速率和红细胞压积(P<0.05或P<0.01)，降低红细胞聚集指数和刚性指数(P<0.05或P<0.01)，抑制ADP诱导的血小板聚集(P<0.05或P<0.01)。结论滁菊总黄酮能够改善寒凝血瘀证家兔血液流变学异常。

菊花/药物作用;黄酮类;血瘀;血液流变学;兔

滁菊为菊科植物菊(ChrysanthemummorifoliumRamat.)的干燥头状花序，原产于滁州、定远，现主产于滁州谯城区、全椒马场一带，因品质优良，被誉为“四大名菊”之首，为药食两用之品。滁菊味甘、苦，微寒，具有散风清热、平肝明目、清热解毒之功效，临床用于头痛眩晕、目赤肿痛、眼目昏花等症[1]。当前，以滁菊为原料的市场产品主要有饮品、保健枕等，具有防治肝阳上亢型高血压、风火目痛、风热感冒头痛等作用。现代研究表明，滁菊富含挥发油、黄酮、多糖、微量元素等多种生物活性成分，其中黄酮为其重要活性成分之一，具有抗心肌缺血[2]和心肌缺血再灌注损伤[3]、抗炎[4]、镇痛[5]、抗氧化[6]和改善糖尿病大鼠血液流变学异常[7]等多种作用。本研究采用皮下注射肾上腺素合并冰水浸泡的方法复制寒凝血瘀证家兔模型，观察滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血液流变学相关指标的影响，以期为滁菊的开发利用作一探索。

1　材料与方法

1.1药品与试剂滁菊总黄酮，安徽科技学院食品药品学院药物制剂室制备(黄酮含量76.38%)；阿司匹林肠溶片，陕西健民制药有限公司；二磷酸腺苷(ADP)二钠盐，Alexis公司产品，临用时以0.1 mol·L-1的磷酸盐缓冲液(pH 7.4)配制成1 mmol·L-1的溶液，4 ℃冰箱保存备用。

1.2主要仪器DL-5低速离心机，郑州长城科工贸易有限公司；FA21048电子天平，上海市精密科学仪器总厂；FASCO-3010A全自动血液流变仪，重庆大学维多生物工程研究所；LBY-NJ4血小板凝聚仪，北京普利生公司。

1.3实验动物雄性新西兰大白兔，购于安徽长临河医药科技有限公司，体质量2～2.5 kg，动物使用许可证号：SCXK(苏)2010-0002。

1.4方法

1.4.1动物分组及给药取家兔48只，随机分为滁菊总黄酮高、中、低剂量组(剂量分别为30、15、7.5 mg·kg-1体质量)，复方阿司匹林组(8.0 mg·kg-1)，模型对照组和正常对照组，每组8只。连续灌胃给药8 d，每日给药1次。正常对照组和模型对照组灌服等容量的生理盐水。第7 天给药后30 min，参照文献方法复制寒凝血瘀证家兔模型[8]，除正常对照组皮下注射等容量的生理盐水外，其余各组家兔均皮下注射1%肾上腺素0.4 mL，然后将兔四肢自膝关节上部固定于自制的带有四孔的木板上，并将四肢放入冰水中15 min，冰水浸没至膝关节处，4 h后再次皮下注射1%肾上腺素0.4 mL。于第8天给药后30 min自家兔心脏采血进行各项指标检测。

1.4.2全血黏度、血浆黏度测定自家兔心脏采血4 mL，分别置2支抗凝管中，制备全血和血浆。测定全血黏度和血浆黏度。

1.4.3血沉和红细胞压积测定自兔心脏采血4 mL置抗凝管中，制备全血，取全血置洁净、干燥的血沉管中(长200 mm，内径为2.5 mm)，调至“0”刻度，垂直放置于血沉管架上，1 h后读取红细胞沉降高度(mm)。另取1 mL全血注入比积管内，3 500 r·min-1离心30 min，再离心10 min，记录红细胞层的高度，计算红细胞压积。

1.4.4红细胞聚集指数、刚性指数测定自家兔心脏采血置抗凝管中，取抗凝血于全自动血液流变分析仪测定红细胞聚集指数和刚性指数。

1.4.5血小板聚集率测定家兔心脏采血至抗凝管中(3.8%枸橼酸钠抗凝，抗凝剂∶血=1∶9)，120×g离心10 min，取上清(富血小板血浆)，余血1 200×g离心10 min，取上清(贫血小板血浆)。调富血小板血浆中血小板浓度约为600×109·L-1。按照Born氏比浊法，取比浊管加入富血小板血浆300 μL及小磁棒1个，置血小板聚集仪中37 ℃ 预热5 min，贫血小板血浆调零后，加入终浓度为10 μmol·L-1ADP诱导聚集，测定血小板聚集率。

1.5统计学方法数据处理采用SPSS17.0软件，多组定量数据的比较采用One-Way ANOVA方差分析的方法,多组之间两两比较采用SNK-q检验的方法，P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔全血黏度及血浆黏度的影响模型对照组家兔全血黏度、血浆黏度均显著高于正常对照组(P<0.01)，说明采用肾上腺素加冰水复制的寒凝血瘀证家兔模型能够满足实验研究需要。灌服滁菊总黄酮后，与模型对照组比较，滁菊总黄酮高、中剂量组家兔全血高切、中切、低切均显著下降(P<0.05或P<0.01)，滁菊总黄酮低剂量组家兔全血低切亦显著下降(P<0.01)，滁菊总黄酮高、中、低剂量组血浆黏度均显著低于模型对照组(P<0.01)。结果表明，滁菊总黄酮能够改善寒凝血瘀证家兔全血黏度和血浆黏度，具体见表1。

2.2滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血沉及红细胞压积的影响滁菊总黄酮高、中剂量组家兔血沉显著低于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.01)。滁菊总黄酮高、中、低剂量组家兔红细胞压积亦显著低于模型对照组(P<0.05或P<0.01)。结果表明，滁菊总黄酮能够降低寒凝血瘀证家兔血沉和红细胞压积,具体见表2。

表1　滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔全血黏度及血浆黏度的影响±s

注：与模型对照组比较aP<0.05,bP<0.01;与正常对照组比较cP<0.05，dP<0.01。

表2　滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血沉及红细胞压积的影响±s

注：与模型对照组比较aP<0.05,bP<0.01;与正常对照组比较cP<0.05，dP<0.01。

2.3滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔红细胞聚集指数和刚性指数的影响滁菊总黄酮高、中剂量组红细胞聚集指数显著低于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。滁菊总黄酮高剂量组家兔红细胞刚性指数亦显著低于模型对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。结果表明，滁菊总黄酮能够降低寒凝血瘀证家兔红细胞聚集指数和刚性指数。具体见表3。

表3　滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔红细胞聚集指数、刚性指数的影响±s

注：与模型对照组比较aP<0.05,bP<0.01;与正常对照组比较cP<0.05，dP<0.01。

2.4滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血小板聚集率的影响由表4可知，滁菊总黄酮高、中剂量能够显著抑制ADP诱导的模型家兔血小板聚集，与模型对照组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结果表明，滁菊总黄酮能够抑制ADP诱导的寒凝血瘀证家兔血小板聚集。

3　讨论

血瘀证是中医临床常见证型之一，气虚、气滞、寒凝、热结、津亏、外伤、痰浊等多种原因均可导致血液运行不畅，形成血瘀。寒邪侵袭机体，使机体阳气受损，温煦、推动作用不足，致血液运行不畅而致血瘀[9-10]。同时，机体受寒后，外周血管收缩，促进或加重瘀血的形成。肾上腺素为α、β受体激动剂，α受体兴奋会引起皮肤黏膜血管的强烈收缩[8]。研究表明，血瘀证患者存在血液流变学、血流动力学和微循环异常，其中血液流变学异常主要表现为血液黏度增加、红细胞比容增加、沉降速度加快、血小板聚集性增强。本研究采用皮下注射肾上腺素加冰水复制寒凝血瘀证家兔模型，实验结果显示，模型家兔全血黏度与血浆黏度、红细胞沉降及红细胞压积、红细胞聚集指数与刚性指数及血小板聚集率等均显著高于正常家兔，说明寒凝血瘀证模型复制成功，能够很好满足实验研究需要。

表4　滁菊总黄酮对寒凝血瘀证家兔血小板聚集率的影响±s

注：与模型对照组比较aP<0.05,bP<0.01；与正常对照组比较cP<0.05，dP<0.01。

血液黏度是反应血液黏滞性的重要指标之一，血瘀证患者血液黏稠，表现为全血黏度、血浆黏度增加；由于血液黏稠，血浆比容积相对较小，红细胞比容积相对加大，压积增加，沉降速度加快；因血浆比容积减小，血流速度减缓，红细胞聚集指数、刚性指数增加。本研究结果表明，滁菊总黄酮能显著降低寒凝血瘀证家兔全血黏度和血浆黏度，降低红细胞沉降速率、红细胞压积、红细胞聚集指数和刚性指数，说明滁菊总黄酮能改善寒凝血瘀证家兔血液黏度，进而改善寒凝血瘀证家兔的血瘀症状。

血小板在瘀血及血栓形成过程中发挥着非常重要的作用，寒凝血瘀证家兔血小板聚集率显著高于正常对照组家兔。ADP能够抑制血小板表面ATP酶活性，促使血小板暴露磷脂表面，进而诱导血小板聚集。本研究研究结果表明，滁菊总黄酮具有抑制ADP诱导的寒凝血瘀证家兔血小板聚集作用。滁菊总黄酮能够显著改善寒凝血瘀证家兔血液流变学相关指标，但其机制有待进一步深入研究。

[1]国家药典委员会.中国药典(一部)[S].北京：中国医药科技出版社，2015:310.

[2]俞浩,肖新,刘汉珍,等.滁菊总黄酮对大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响[J].食品科学,2012,33(15):283-286.

[3]俞浩,周国梁,刘汉珍,等.滁菊总黄酮对大鼠急性心肌缺血保护作用的实验研究[J].食品工业科技,2012,33(13):352-354,358.

[4]张蓓蓓,陈岩,贲培玲,等.滁菊总黄酮的抗炎作用及部分机制研究[J].齐齐哈尔医学院学报,2015,36(17)：2497-2499.

[5]张蓓蓓,陈志武,罗胜勇,等.滁菊总黄酮的镇痛作用及与一氧化氮和前列腺素E2的关系[J].安徽医科大学学报，2014,49(3):323-326.

[6]缪成贵,陈庆榆,何华奇.滁菊总黄酮抗氧化作用研究[J].生物学杂志,2012,29(3):42-44,87.

[7]俞浩,周金星,马世堂,等.滁菊总黄酮对糖尿病大鼠血液流变学的影响[J].食品工业科技,2013,34(15):351-354.

[8]杨佳敏,沈小雨,张玲,等.寒凝血瘀证动物模型制备方法的评价与选择[J].中医学报,2014,29(1):53-54.

[9]杜正彩,郝二伟,邓家刚.寒凝血瘀证模型大鼠中医表征指标量化研究[J].世界中西医结合杂志,2012,7(7):566-569.

[10] 钟宇富,刘国洪,杜英娟,等.月之汤饮对实验大鼠血液流变性及凝血功能的影响[J].安徽医药，2016,20(2)：236-239.

Effects of total flavonoids from Chuzhou Chrysanthemum morifolium Ramat on hemorheology in cold-coagulation and blood-stasis rabbits

ZHANG Benrong,LI Yadong,WU Xiaoer,et al

(DepartmentofPharmacy,LujiangHospitalofTraditionalChineseMedicine,Lujiang,Anhui231500,China)

ObjectiveTo observe the effects of total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat on hemorheology in cold-coagulation and blood-stasis rabbits(CBR).MethodsThe model of CBR was induced by hypodermic injection of adrenalin combined with ice water soak.The effects of total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat on viscosity of whole blood and plasma,erythrocyte sedimentation rate and hematocrit,erythrocyte aggregation index and erythrocyte rigidity index,and platelet aggregation induced by ADP were determined in cold-coagulation and blood-stasis rabbits.ResultsCompared with model group,total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat could significantly reduce the viscosity of whole blood and plasma(P<0.05 orP<0.01),erythrocyte sedimentation rate and hematocrit(P<0.05 orP<0.01),decrease the erythrocyte aggregation index and erythrocyte rigidity index(P<0.05 orP<0.01),and inhibit platelet aggregation induced by ADP(P<0.05 orP<0.01).ConclusionsThe total flavonoids from ChuzhouChrysanthemummorifoliumRamat could improve hemorheological abnormality of CBR.

Chrysanthemum morifolium/drug effects；Flavones;Blood stasis;Hemorheology;Rabbits

安徽省青年科学基金(10040606Q13);安徽省创新型省份建设专项资金计划(15czz03104)

俞浩，男，教授，硕士生导师，研究方向：中药药效物质基础及作用机制研究，E-mail：yhz_1230@163.com

10.3969/j.issn.1009-6469.2016.08.006

2016-03-22，

2016-05-12)