SCID Beige小鼠繁殖性能、脏器重量、血液生理生化指标和免疫细胞的测定

许文静, 郭建光, 杨东伟, 唐慧青, 符　杰, 袁水娟, 施美莲（. 上海灵畅生物科技有限公司, 上海 04；　. 上海斯莱克实验动物有限责任公司, 上海 065）

SCID Beige小鼠繁殖性能、脏器重量、血液生理生化指标和免疫细胞的测定

许文静1, 郭建光2, 杨东伟1, 唐慧青1, 符杰2, 袁水娟1, 施美莲2
（1. 上海灵畅生物科技有限公司, 上海 201412；2. 上海斯莱克实验动物有限责任公司, 上海 201615）

目的测定SCID Beige小鼠的繁殖性能、主要脏器重量、血液生理生化指标和免疫细胞比例。方法（1）选取10周龄SCID Beige小鼠15雌15雄进行配种, 测定其繁殖性能； （2）选取4周龄、8周龄和16周龄SCID Beige小鼠各30只（雌雄各半）, 称体质量, 依次剖取各脏器并称重；（3）使用毛细管眼眶采血，测定血液生理生化指标； （4）利用流式细胞仪检测其T细胞及其亚群、B细胞、NK细胞。结果（1）SCID Beige小鼠妊娠率、窝产仔数和离乳率随胎次逐渐下降； （2）三个日龄段SCID Beige小鼠的脾脏重量随日龄的增加而减小，其余脏器重量随日龄的增加而增加，同日龄不同性别间肝脏和心脏重量呈显著性差异，脑重量无显著性差异； （3）SCID Beige小鼠112日龄雄鼠的白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、血细胞压积（HCT）、淋巴细胞（LYM）及LYM%与同日龄雌鼠和其他日龄小鼠差异明显； （4）SCID Beige小鼠的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19 B细胞，B220 B细胞和NK细胞含量极低，雌鼠T细胞含量低于雄鼠，不同性别间淋巴细胞含量无显著性差异。结论SCID Beige小鼠表现为T、B、NK细胞联合免疫功能缺陷，且不存在渗漏现象，该小鼠在肿瘤移植的应用方面具有一定优势。

SCID Beige小鼠； 繁殖性能； 脏器重量测定； 血液生理生化指标； 免疫细胞测定

随着生物医药技术的发展，人们对实验动物质量的要求越来越高，无菌小鼠、免疫缺陷小鼠在免疫和肿瘤研究中的作用越来越重要, SCID Beige小鼠就是其中之一。1979年，Roder等［1］研究表明, Beige小鼠的自然杀伤（NK）细胞活性缺乏； 1993年Mosier等［2］利用BALB/c-beige/beige同类近交系（congenic strain）小鼠将beige基因导入CB-17SCID小鼠成为scid/scid, beige/beige小鼠（或记为SCID Beige小鼠）。该小鼠毛色白化，具备SCID小鼠的B、T淋巴细胞功能缺失，同时具备Beige小鼠典型的NK细胞功能缺陷。本文对SCID Beige小鼠的繁殖性能和脏器重量、血液生理生化指标和部分免疫细胞指标进行了观测，为利用该品系小鼠进行相关研究提供基础生物学资料。

1　材料与方法

1.1实验动物

SCID Beige小鼠由上海灵畅生物科技有限公司提供［SCXK（沪）2013-0018］。10周龄小鼠30只（雌雄各半）用于繁殖； 随机抽取生产大群中28、56和112日龄30只（雌雄各半）用于脏器重量等测定。

1.2饲养管理及环境

实验小鼠均饲养在硬塑薄膜隔离包内，隔离包内的空气为100级全新风，包内温度控制在22± 2 ℃，相对湿度55%±10%，换气频率20次/h；照明12 h/d； 动物自由采食和饮水。

小鼠用饲料、垫料为上海普路腾生物科技有限公司提供［沪饲证（2014）04001］, 经60Co辐照，剂量为35 kGY，基本营养成分为： 粗蛋白24.5%～25.5%, 粗脂肪5.5%～6.5%, 粗灰分6.0%～6.5%，粗纤维4.0%～4.5%, 水份≤10%, 钙1.2%～1.5%，磷0.75%～1.0%, 赖氨酸≥1.32%, 蛋氨酸+胱氨酸≥0.78%。饮水为纯水酸化水（pH 3.5～4.0）。饮用水、笼具、水瓶、毛巾、镊子等物品经121 ℃, 30 min高压蒸汽灭菌后传入使用。

1.3主要器材与仪器

日立7020全自动生化仪和配套试剂（日本）；Sysmex KX-21N全自动血球分析仪和配套试剂（日本）； eppendorf 5427R离心机（德国eppendorf公司）；流式细胞仪和配套试剂； Mettler toledo AL104电子称［梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司, 可读性0.1 mg］；动物固定台； 手术剪、眼科镊等常规手术器械。

1.4实验方法

1.4.1繁殖性能测定选取10周龄动物15雌15雄进行配种，记录动物各胎次窝产仔数、哺乳数、离乳数、离乳率和胎间隔。

1.4.2脏器重量测定电子天平称体质量后眼眶采血，不少于1.5 mL，再脱颈椎处死，立即剖取脾、肾、心、肝、肺、脑、胸腺，并用滤纸吸干组织表面水分，称取重量。

1.4.3血常规指标测定取20 μL全血加500 μL稀释液混匀，用Sysmex KX-21N全自动血球分析仪检测，12项指标为白细胞计数（WBC）、红细胞计数（RBC）、血红蛋白（HGB）、血细胞压积（HCT）、红细胞平均体积（MCV）、红细胞平均血红蛋白MCH）、红细胞平均血红蛋白浓度（MCHC）、血小板（PLT）、红细胞体积分布宽度（RDW）、血小板平均容积（MPV）、血小板体积分布宽度（PDW）、淋巴细胞（LYM）等。

1.4.4血液生化指标测定取0.8 mL全血置离心管内，4 ℃冰箱内放置1 h后2 800×g离心10 min，分离出血清，进行血液生化测定。13项指标为总胆固醇（TCHO）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、总蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、谷氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（AST）、碱性磷酸酶（ALP）、血糖（GLU）、尿素氮（BUN）、钙（Ca）、磷（P）。

1.4.5免疫功能指标测定采用小鼠摘眼球取血法取外周血，加入EDTA抗凝剂。取流式管加入CD3、CD4、CD8、B220、NK的抗体, 按照编号分别加入采集的外周血50 μL, 避光染色15 min。加入红细胞裂解液500 μL, 裂解5～10 min。500×g离心5 min，弃上清。加入1 mL PBS重选细胞，500×g离心5 min，弃上清。加入200 μL PBS重选细胞, 流式细胞仪检测细胞亚群，结果分析。

1.5统计学方法

实验数据用软件SPSS19.0进行单因素方差分析, 数值以± s表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1繁殖性能

由表1可知，SCID Beige小鼠妊娠率、窝产仔数和离乳率随胎次逐渐下降。该小鼠很难生产第四胎。哺乳数比窝产仔数有一定下降，而哺乳数和离乳数相差不多。

表1　SCID Beige小鼠繁殖性能

2.2脏器重量

由表2可知，三个日龄SCID Beige小鼠的脾脏重量随日龄的增加而减小，56日龄和112日龄与28日龄相比呈显著性差异，但112日龄与56日龄相比无显著性差异，其余脏器重量随日龄的增加而增大。三个日龄SCID Beige小鼠同周龄不同性别间相比，肝脏和心脏重量呈显著性差异，脑重量无显著性差异。

2.3血液生理指标

由表3可知，SCID Beige小鼠同周龄不同性别间相比，呈差异显著的指标数随日龄的增大而增加。112日龄雄鼠的WBC、RBC、HGB、HCT、LYM%和LYM#指标明显差异于同周龄雌鼠和其他日龄小鼠。

表2　SCID Beige小鼠脏器重量　　　　　　　　　　　　　　　　　　mg

表3　SCID Beige小鼠血液生理指标

2.4血液生化指标

由表4可知, SCID Beige小鼠同日龄不同性别间相比，ALP指标呈显著性差异，AST、GLU、BUN、Ca和P指标无显著性差异。SCID Beige小鼠同性别28和56日龄的GLU、BUN和Ca指标无显著性差异。ALP和P随着动物日龄的增加明显下降，BUN随动物日龄的增加呈上升趋势。

2.5免疫细胞

由表5可知, SCID Beige小鼠的CD3+T细胞、CD4+T细胞、CD8+T细胞、CD19 B细胞、B220 B细胞和NK细胞含量极低。雄鼠T细胞含量略高于雌鼠。不同性别间NK细胞和淋巴细胞含量无显著性差异。

3　讨论

本文数据显示，SCID Beige小鼠的平均窝产仔数、离乳率要比正常小鼠如C57BL/6J［3］和KM［4］小鼠低，其第一胎次妊娠率不到70%，胎间隔相对较长且生产胎次少，所以换种频率较高，饲养难度和生产成本偏高。

体质量和脏器重量是最基本的生物学特性，是衡量SCID Beige小鼠生长状况的最直观的数据。实验数据表明，同性别SCID Beige小鼠除脾脏外所有脏器重量均随日龄的增加而增加，脾脏则相反，56日龄和112日龄的脾脏重量小于28日龄，且同周龄不同性别间差异不显著。脾脏是机体中最大的淋巴器官和免疫器官，脾脏内大量的免疫细胞是其执行免疫功能的基础［5］，说明随日龄的变化，SCID Beige小鼠的免疫功能也在发生一定变化。28日龄和56日龄不同性别间呈显著性差异，推测同日龄不同性别间SCID Beige小鼠的免疫功能也存在一定的差异。

表4　SCID Beige小鼠血液生化指标

表5　SCID Beige小鼠外周血免疫细胞百分比

白细胞也称为免疫细胞（包括淋巴细胞），能吞噬异物产生抗体，在机体损伤治愈，抗御病原的入侵和对疾病的免疫方面起着重要的作用，白细胞减少可能反映免疫系统的衰弱。实验数据显示，112日龄雄鼠的WBC、LYM%、LYM#均远高于其他动物，反映了其免疫系统出现了较大变化。结果显示，随着小鼠日龄的上升，同周龄不同性别间呈显著性差异的指标数增加，反映出随日龄的增加，品系性别间差异在扩大。ALT和AST在肝脏疾病的诊断中具有较高的临床应用价值，能够反应肝细胞的损害情况，有利于各类肝脏疾病的诊断和分析［6］，SCID Beige小鼠112日龄的ALT指标偏高，但AST指标不高，因此不能判定该小鼠在该日龄时存在肝脏损伤。与Charles River公司小鼠数据相比，AST数值接近，ALT和BUN数值偏低［7］。

SCID Beige小鼠是T、B、NK细胞缺陷的联合免疫缺陷模型动物, 得到了越来越多研究者的使用。本研究采用8周龄SCID Beige小鼠外周血进行测定, 证实了该小鼠T、B、NK细胞缺陷, 但雌性SCID Beige小鼠的CD3+、CD4+、CD8+T细胞和CD19 B细胞的含量都低于雄性, NK 细胞含量和淋巴细胞总含量基本相同, 只有B220 B细胞含量高于雄性。根据不同的实验需求, 研究人员可做不同的选择。

与SCID小鼠相比，SCID Beige小鼠在某些肿瘤的移植成功率更高［8］，Beige基因突变引起的NK细胞活性降低虽不能作为影响细胞移植成功率的决定性因素，但有能够提高受体保留移植细胞活力和功能的潜力［9］。很多研究者已经在T细胞研究［10］、卵巢肿瘤［11］和甲状腺素［12］研究等领域中对SCID Beige小鼠有了一定的应用并取得不错的成果。本文实验结果证实SCID Beige小鼠T、B、NK细胞缺陷，且不存在渗漏现象，推测该小鼠在肿瘤移植的应用方面具有一定的优势。

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Q95-33

B

1674-5817（2016）03-0129-05

10.3969/j.issn.1674-5817.2016.02.010

2015-11-24

上海市科委实验动物研究专项（13140900500）

许文静（1987-）, 女, 畜牧师, 从事免疫缺陷动物模型的繁育及生物学特性研究。E-mail： 427865428@qq.com

施美莲（1965-）, 女, 高级畜牧师, 从事实验动物保种、育种、免疫缺陷动物的研究以及实验动物营养学研究。E-mail： mlshi@slaccas.com