5种常用杀虫剂对尖喙库蠓的毒性测定

陈　敏, 王飞鹏, 黄响珠, 黄恩炯

(1.福建国际旅行卫生保健中心，福建 福州 350001；2.福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室，福建 福州 350002;3.三明出入境检验检疫局，福建 三明 365000)



5种常用杀虫剂对尖喙库蠓的毒性测定

陈敏1, 王飞鹏2, 黄响珠3, 黄恩炯1

(1.福建国际旅行卫生保健中心，福建 福州 350001；2.福建农林大学教育部生物农药与化学生物学重点实验室，福建 福州 350002;3.三明出入境检验检疫局，福建 三明 365000)

以野外采集的尖喙库蠓成虫为试验对象，通过滤纸接触法，测定了毒死蜱、敌敌畏、溴氰菊酯、高效氯氰菊酯和高氯·甲维盐等5种常用杀虫剂对尖喙库蠓的毒杀效果.结果表明：5种杀虫剂对蠓的毒性差异显著，毒力大小依次为溴氰菊酯>毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲维盐>敌敌畏，试虫接触药剂1 h的LC50分别为0.060、0.588、1.741、99.670和600.496 mg·L-1；试虫经药剂处理1 h后在恢复筒观察24 h，其在各种药剂不同处理浓度下增加的死亡数不同；以溴氰菊酯为标准药剂，其相对毒力指数最大.

尖喙库蠓; 杀虫剂; 毒力

尖喙库蠓(Culicoidesoxystoma)是一种常见的吸血蠓，在我国各地广泛分布，可传播多种人兽共患疾病，其与原野库蠓(C.homotomus)、日本库蠓(C.nipponensis)在我国蓝舌病疫区中的作用应引起重视，予以重点防治[1].但目前有关吸血蠓对杀虫剂的敏感性测定方法仅有少数报道[2-4]，尚无标准可依.本试验采用滤纸接触法，测定不同杀虫剂对尖喙库蠓的毒杀效果，探讨不同杀虫剂在其田间防治中的适用性，以期为蠓媒疾病的预防控制奠定理论基础.

1　材料与方法

1.1供试昆虫

供试尖喙库蠓于2014年6～8月采自福建省三明市宁化县(N25°58′- 26°40′，E116°22′-117°02′)，宿主为耕牛和家猪.早晨(6:00-9:00)和黄昏(16:30-18:30)采用60目绢纱制成的口径20 cm、深60 cm、末端钝圆的圆锥形捕虫网捕获蠓虫，将蠓虫集中于网底后带回室内，供测定用.待生物测定结束后，将供试昆虫保存于95%乙醇溶液中，进行形态及分子鉴定.试验条件：温度(26±1) ℃，相对湿度(RH)(60±5)%.

1.2试验材料

器材：204.7 cm2(11.5 cm×17.8 cm)无菌滤纸若干张，无菌脱脂棉，量筒(100 mL)，刻度烧杯(100 mL)，移液枪及无菌枪头(10、100、200、1 000 μL)，吸虫管，定时器，计数器，药剂接触筒(图1)，药剂恢复筒(图2).

试剂：选用近年来市面上应用较为广泛的毒死蜱(45%，华北制药集团爱诺有限公司)、敌敌畏(80%，陕西皇牌作物科技有限公司)、溴氰菊酯[25 g·L-1，拜耳作物科学(中国)有限公司]、高效氯氰菊酯(4.5%，华北制药集团爱诺有限公司)和高氯·甲维盐(2%，广西安泰化工有限责任公司)等5种杀虫剂作为供试药剂.其中，2%高氯·甲维盐是由1.8%高效氯氰菊酯+0.2%甲氨基阿维菌素苯甲酸盐混配而成.

1.3毒力测定

因目前尚无蠓类对杀虫剂敏感性程度的生物学测定相关规范，本试验参照WHO[5]推荐的成蚊滤纸接触法[6]进行测定.

1.3.1试验药纸的制备将杀虫剂用蒸馏水稀释成5～6个不同质量浓度的工作液(表1).分别吸取2.04 mL供试药剂均匀滴于不同的滤纸上，制备成约 0.01 mL·cm-2的药剂接触滤纸，并标明杀虫剂种名及其质量浓度.用无菌水制备对照滤纸.制成的接触滤纸在室温下自然晾干后即可使用，并在6 h内使用完毕.

表1　供试杀虫剂质量浓度

1.3.2试虫与药纸的接触试验打开接触筒螺纹盖，将药膜滤纸衬贴于筒中并将筒直立，纱网一端朝上为宜，用吸虫管吸取试验所需吸血蠓并从膜处小心移入接触筒中.因虫体微小，操作困难，每个接触筒设(30±5)只试虫，每个处理和空白对照重复3次.分别记录各组首只蠓虫被击倒时间和20、40、60 min的死亡虫数，分别测定同一质量浓度不同时间和同一时间不同质量浓度下蠓的死亡情况.

1.3.3恢复观察试虫接触药纸1 h后，将接触筒内的蠓虫移至恢复筒内，并在纱网一端放置一团浸有5%葡萄糖水的棉球，恢复饲养24 h后观察蠓虫死亡数，记录和计算各处理组及对照组的蠓虫死亡率.虫体侧躺或6足抽搐皱缩成团，用毛笔尖轻触蠓腹部后，不能翻身或爬行者则判定为死亡.

1.4数据统计与分析

1.4.1统计公式根据公式(1)计算各处理组的死亡率.

P1=M/N×100

(1)

式中：P1为试虫死亡率/%，M为死亡虫数，N为供试虫数.

若对照组死亡率<5%，处理组的死亡率无需校正；若对照组死亡率为5%～20%时，处理组的死亡率用Abbott公式[7]校正，求出校正死亡率；对照组死亡率超过20%时，则该组试验作废并重做.校正死亡率按照公式(2)计算.

P2=(P1-P0)/(1-P0)×100

(2)

式中：P2为校正死亡率/%；P1为处理死亡率；P0为对照死亡率.

1.4.2数据分析采用OriginLab 9.0分别绘制每种杀虫剂的“浓度—首只蠓击倒时间”图，绘柱状图和折线图比较试虫接触药剂1 h至恢复24 h后的死亡率变化趋势；通过SPSS 16.0单因素ANOVA分析各个处理的死亡率，对死亡总体情况做Prohit(概率单位回归)模块分析[8]，并计算毒力回归方程、致死中浓度(LC50)、LC90、相关系数(R2)及95%置信区间(CI)，绘制不同药剂浓度对数所对应的概率单位曲线图(LC-p)，通过比较95%置信区间下LC50、LC90的大小和是否重叠分析不同药剂间的毒力差异.

1.4.3相对毒力指数计算以卫生害虫常用的杀虫剂溴氰菊酯对蠓的LC50为标准，设相对毒力指数为100，与其他药剂的LC50比较，用公式(3)计算相对毒力指数.

I=D/K×100%

(3)

式中：I为相对毒力指数；D为溴氰菊酯的LC50；K为其他各药剂的LC50.

2　结果与分析

2.1供试昆虫

经形态及分子鉴定，共捕获2 891只试虫，包含2属5种蠓.其中，尖喙库蠓占97.56%，日本库蠓占1%，琉球库蠓(C.actoni)占0.67%，抚须库蠓(C.palfier)占0.67%，拜氏铗蠓(F.bikanni)占0.1%.

2.25种杀虫剂对蠓的室内毒性

由于各种杀虫剂的击倒活性不同，导致首只试虫的死亡时间不同.试验表明：5种试剂在最高质量浓度的击倒时间顺序为溴氰菊酯<敌敌畏<高效氯氰菊酯<高氯·甲维盐<毒死蜱，提示溴氰菊酯对试虫的击倒活性最强，敌敌畏次之；而对于同一杀虫剂，质量浓度越高则击倒活性越强(表2～6).

表2　不同质量浓度毒死蜱在不同作用时间对蠓的毒力1)

1)同一质量浓度不同作用时间、同一时间不同质量浓度下的死亡率差异有统计学意义(P<0.05).

表3　不同质量浓度敌敌畏在不同作用时间对蠓的毒力1)

1)同一质量浓度不同作用时间、同一时间不同质量浓度下的死亡率差异有统计学意义(P<0.05).

单因子方差分析表明，各个组分中P值均小于0.05(表2～6)，说明组内重复性良好.就同一杀虫剂而言，浓度与死亡率、作用时间呈现一定的梯度，同一浓度下死亡率随作用时间的延长而上升，不同浓度间高浓度效果优于低浓度；就不同杀虫剂而言，各个杀虫剂间防治效果不尽相同，药效的持续时间也有区别，总体来说，溴氰菊酯效果较好，敌敌畏和高氯·甲维盐效果较不理想.

表4　不同质量浓度溴氰菊酯在不同作用时间对蠓的毒力1)

1)同一质量浓度不同作用时间、同一时间不同质量浓度下的死亡率差异有统计学意义(P<0.05).

表5　不同质量浓度高效氯氰菊酯在不同作用时间对蠓的毒力1)

1)同一质量浓度不同作用时间、同一时间不同质量浓度下的死亡率差异有统计学意义(P<0.05).

表6　不同质量浓度高氯·甲维盐在不同作用时间对蠓的毒力1)

1)同一质量浓度不同作用时间、同一时间不同质量浓度下的死亡率差异有统计学意义(P<0.05).

2.3试虫接触药剂1 h至恢复24 h内死亡率的变化

试验结果表明：随着质量浓度的增大，毒死蜱和高氯·甲维盐处理组中试虫的死亡数量增多，且高浓度的死亡虫数多于低浓度(表2、表6)；溴氰菊酯和高效氯氰菊酯击倒性较强，试虫在接触最高浓度(分别为250和450 mg·L-1)药剂1 h后已基本死亡，因此，恢复24 h内试虫死亡数增加不多(表4～5)；而敌敌畏质量浓度为100 mg·L-1时试虫死亡率的增量(4.49%)略高于200 mg·L-1时的死亡率增量(3.43%)，移至恢复筒后仍有蠓相继死亡(表3)，这可能是由于试虫对该药剂的短期分解和代谢能力有限，杀虫剂在体内滞留积累.

2.4毒力测定回归分析

从表7可以看出，回归方程线性良好.LC50大小顺序为溴氰菊酯<毒死蜱<高效氯氰菊酯<高氯·甲维盐<敌敌畏；LC90大小顺序与LC50一致；LC50下的相对毒力指数(I)大小顺序为溴氰菊酯>毒死蜱>高效氯氰菊酯>高氯·甲维盐>敌敌畏.可见，采用接触滤纸法测定时，试虫对溴氰菊酯最敏感.

表7　5种杀虫剂对蠓成虫的毒力回归方程

3　讨论

本试验采用自制吸虫管将蠓转移至一定体积的接触筒内进行生测，减小了试验操作对试虫的伤害，有效减少了人为误差，降低了试验成本.饱血的雌蠓在生测中容易掉落，死亡率偏高，因此不宜用于生测[4]；而用吸虫管从捕虫网中吸取供试蠓虫时便于肉眼观察试虫是否饱血，从而大大减少了饱血对生测结果的影响.但由于蠓体型微小，每次试验的试虫数量难以统一，只能控制在一个范围内，因此本试验每个重复的试虫数量为(30±5)只.

实验室继代饲养吸血蠓存在较大难度，卵和幼虫也较难获得，因此实验室开展蠓对药剂的敏感性测定时主要选用成虫.而在田间试验中，可采用施撒粉剂或颗粒剂的方式对蠓的孳生地进行处理以毒杀其蛹和幼虫[9].目前，室内测定的杀虫剂中毒死蜱[10]和溴氰菊酯[2]可有效用于蠓的田间防治，而其他杀虫剂在野外的适用性有待进一步验证.

本研究尝试从有机磷杀虫剂(2种)、拟除虫菊酯类杀虫剂(2种)和混配杀虫剂(1种)中筛选出有效的杀蠓药剂.结果表明，常用卫生杀虫剂溴氰菊酯对蠓的防治效果最佳(LC50=0.060 mg·L-1)，毒死蜱次之(LC50=0.588 mg·L-1)，而敌敌畏的LC50高达600.496 mg·L-1，提示田间不宜选用敌敌畏对蠓进行防治；混配杀虫剂高氯·甲维盐的效果(LC50=99.670 mg·L-1)不及单配剂高效氯氰菊酯(LC50=1.741 mg·L-1)，这可能是由于高效氯氰菊酯是主要杀虫成分，其在混配杀虫剂中含量较低.杀虫活性随着质量浓度的增大而增强，但当死亡率达到一定程度后随着作用时间的延长，杀虫活性有所降低.拟除虫菊酯类杀虫剂对蠓的毒杀活性优于有机磷杀虫剂，且更为环保、安全；但不同品种的拟除虫菊酯类杀虫剂活性存在差异，在控制使用剂量的情况下，溴氰菊酯可作为蠓类防治的首选药剂.

在害虫防治中，药剂使用剂量越高，安全系数就越低.随着害虫对药剂抗性的增强，盲目加大用药量不仅增加防治成本，而且可能污染环境和伤害天敌.因此，在蠓类的防治中，只有正确选择杀虫剂，并采用合理的施药方式(如轮用和混用)，才能取得最佳防治效果.

[1] 王飞鹏,黄恩炯,蔡亨忠,等.吸血蠓及其传播的疾病[J].昆虫知识,2010,47(6):1 270-1 273.

[2] DEL RIO R, BARCELO C, PAREDES-ESQUIVEL C, et al. Susceptibility ofCulicoidesspecies biting midges to deltamethrin-treated nets as determined under laboratory and field conditions in the Balearic Islands, Spain[J]. Medical and Veterinary Entomology, 2014,28(4):414-420.

[3] DEL RIO R, VENAIL R, CALVETE C, et al. Sensitivity ofCulicoidesobsoletus(Meigen) (Diptera: Ceratopogonidae) to deltamethrin determined by an adapted WHO standard susceptibility test[J]. Parasitology, 2014,141(4):542-546.

[4] VENAIL R, MATHIEU B, SETIER-RIO M L, et al. Laboratory and field-based tests of deltamethrin insecticides against adult culicoides biting midges[J]. Journal of Medical Entomology, 2011,48(2):351-357.

[5] WHO. Instructions for Determining the Susceptibility or Resistance of Adult Blackflies, Sandflies and Biting Midges to Insecticides: Mimeographed Document (WHO/VBC/81.810)[M]. Geneva, Switzerland: WHO, 1981.

[6] 中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.蚊类对杀虫剂抗药性的生物学测定方法：GB/T 29566-2013[S].北京:中国标准出版社,2013.

[7] 田素芬，顾晓军，刘文静，等.应用叶片保护率评价阿维菌素对小菜蛾的毒力[J].中国农学通报，2008,24(12):396-400.

[8] 贾春生.利用SPSS软件计算杀虫剂的LC50[J].昆虫知识，2006,43(3)：414-417.

[9] 孟祥瑞,薛健,于晓敏.明斑库蠓孳生习性的调查和防治效果[J].中国寄生虫病防治杂志,1989,2(S1):88-89.

[10] WALL W J, MARGANIAN W M. Control ofCulicoidesmelleus(Coq.) (Diptera: Ceratopogonidae) with granular organophosphorus pesticides, and the direct effect on other fauna[J]. Mosquito News, 1971,31:209-214.

(责任编辑:杨郁霞)

Toxicity of 5 insecticides toCulicoidesoxystomaKieffer (Diptera: Ceratopogonidae)

CHEN Min1, WANG Feipeng2, HUANG Xiangzhu3, HUANG Enjiong1

(1.Fujian International Travel Healthcare Center, Fuzhou, Fujian 350001, China; 2.Key Laboratory of Biopesticide and Chemical Biology, Ministry of Education, Fujian Agriculture and Forestry University, Fuzhou, Fujian 350002,China; 3.Sanming Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau, Sanming, Fujian 365000, China)

Field-collectedCulicoidesoxystomawere exposed to different concentrations of commercial insecticides, including chlorpyrifos, DDVP, deltamethyrin, beta-cypermethrin and beta-cypermethrin·emamectin benzoate via filter paper method, so that the toxicity effects of different insecticides onC.oxystomawere determined. Results showed that toxicities varied significantly among insecticides. Biting midges were the most susceptible to deltamethyrin (0.060 mg·L-1), and followed by chlorpyrifos (0.588 mg·L-1), beta-cypermethrin (1.741 mg·L-1), beta-cypermethrin·emamectin benzoate (99.670 mg·L-1), DDVP (600.496 mg·L-1) in a descending order. After exposed to insecticides for 1 h, tested midges were transferred to recovery chamber and observed for another 24 hours, increased mortality within this period was different under the different concentrations of each insecticide. Relative toxicity index was maximal when using deltamethrin as standard reagent.

Culicoidesoxystoma; insecticide; toxicity

2015-10-14

2016-04-06

福建省科技重点项目(2014I0001)；国家质检总局科技计划项目(2015IK036).

陈敏(1977-)，女，副主任医师，硕士.研究方向：流行病学.Email：345868027@qq.com.通讯作者黄恩炯(1981-)，男，副主任技师.研究方向：媒介生物学及控制.Email：enjiong@163.com.

Q96

A

1671-5470(2016)03-0247-05

10.13323/j.cnki.j.fafu(nat.sci.).2016.03.002