花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠抗炎作用及其机制研究

张华义黄纯聪杨德兵胡国忠肖 剑徐 露（.重庆西南铝医院，重庆 40326；2.重庆医科大学，重庆 40006）

花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠抗炎作用及其机制研究

张华义1黄纯聪1杨德兵1胡国忠1肖 剑1徐 露2△
（1.重庆西南铝医院，重庆 401326；2.重庆医科大学，重庆 400016）

目的 研究花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠抗炎作用及其机制。方法 建立神经根型颈椎病大鼠模型，随机分为假手术组、模型组、花椒酰胺高、中、低剂量组。花椒酰胺组于造模后7 d灌胃给药，共给药28 d。给药后29 d，进行疼痛行为和步态评分；统计痛阈和游泳时间；ELISA法检测大鼠血清中肿瘤坏死因子-α （TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、环氧合酶-2（COX-2）水平。结果 与模型组相比，花椒酰胺高、中、低剂量组能显著降低大鼠疼痛行为和步态评分（P＜0.01或P＜0.05）；提高痛阈和游泳时间；降低TNF-α、IL-1β、COX-2水平（P＜0.01或P＜0.05）。结论 花椒酰胺能对神经根型颈椎病的症状有一定的控制作用，其机制降低炎症因子TNF-α、IL-1β、COX-2水平有关。

花椒酰胺 神经根型颈椎病 TNF-α IL-1β COX-2

花椒酰胺又名花椒皮麻味素，来源于芸香科植物大叶花椒的根皮，是花椒麻味的主要有效成分，具有强烈的刺激性［1］。动物实验表明，花椒酰胺具有良好的兴奋、麻醉、抗炎、镇痛、祛风除湿等作用。因此，本实验主要从其抗炎症痛的作用出发，研究其对神经根型颈椎病的作用，探讨其机制。现报告如下。

1 材料与方法

1.1 实验动物 50只健康雄性SPF级SD大鼠，体质量（250±50）g，批号SYXK（渝）2012-0001，购自重庆医科大学实验动物中心。

1.2 试药与仪器 花椒酰胺，购自西安森冉生物工程有限公司，纯度≥18%。肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、环氧合酶-2（COX-2）ELISA试剂盒购自武汉博士德。电子压痛仪 （型号：ZH-YLS-3E），酶标仪（美国伯乐，型号：680）。

1.3 造模方法 按照文献［2］的方法建立动物模型，用10%的水合氯醛以3.5 mL/kg的剂量腹腔注射麻醉大鼠，俯卧固定，剪毛，消毒。以第2胸椎棘突为标志，C7为中心，延棘突纵形切开3cm长皮肤及皮下组织，暴露出棘突和椎板。钳去C7左侧椎板后，暴露出硬脊膜，再将脊髓推至右侧，眼科镊夹取1.5 cm长鱼线沿脊髓放于C5至T1神经根腋下。假手术组大鼠仅切开皮肤、分离棘突旁肌肉，钳去C7左侧椎板后缝合。

1.4 分组与给药 50只成年SD大鼠随机分为6组：假手术组、模型组、花椒酰胺高、中、低剂量组，每组10只。花椒酰胺溶于0.9%氯化钠注射液中，花椒酰胺高、中、低剂量组每日分别口服10 mg/kg、5 mg/kg、2.5 mg/kg花椒酰胺。假手术组及模型组，每日给予相应体积的0.9%氯化钠注射液。

1.5 观察项目 1）疼痛行为及步态评分。每日上午10：00到11：30固定时间内，将大鼠放置于观察箱中，适应30 min后进行疼痛评分，记录5 min内大鼠左前肢离地时间总和，记录3次，取其平均值作为疼痛分数。参考Kawakami法［3］对大鼠的步态障碍进行评估，足无畸形，正常步态为1分；受损足不能承重、跛行或足内蜷为2分；受损足蜷缩或走动时不着地为3分。2）痛阈值的检测。用电子压痛仪压迫大鼠左前掌，大鼠嘶吼和挣扎时所得到的压力为痛阈值。3）游泳时间的检测。将大鼠放置于深40 cm的水槽中，水温40℃，记录大鼠入水到自然下沉的时间，该时间间隔为大鼠的游泳时间。4）TNF-α、IL-1β、COX-2水平的检测。将上述步骤剩余的2 mL血浆于4℃下静置2 h，待上层血清析出后进行检测。将大鼠断头处死。检测步骤分别严格按照TNF-α、IL-1β、COX-2 Elisa试剂盒的方法进行。1.6 统计学处理 应用SPSS20.0统计软件分析。计量资料均以（±s）表示，组间用t检验进行比较。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠疼痛行为及步态评分的影响 见表1。与假手术组比较，模型组显著增加了大鼠左前肢的离地时间，提高了疼痛评分，并且加重了步态障碍，提高了步态评分（P＜0.01）；与模型组比较，花椒酰胺高、中、低剂量组能显著降低大鼠的疼痛评分和步态评分（P＜0.01）。

表1 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠疼痛行为及步态评分的影响（±s）

表1 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠疼痛行为及步态评分的影响（±s）

与假手术组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01。下同。

组 别 时间 疼痛评分（次）步态评分（分）假手术组 治疗前 133.59±10.28△1.22±0.49△（n=10） 治疗后 129.84±9.76△1.24±0.36差值 3.75±1.12△-0.02±0.11△模型组 治疗前 131.25±9.32*2.66±0.42*（n=10） 治疗后 115.26±10.03*2.74±0.24差值 15.99±2.25*-0.08±0.09*花椒酰胺高剂量组 治疗前 132.22±9.55△2.55±0.36△（n=10） 治疗后 72.04±7.78△1.26±0.33差值 60.18±6.04△1.29±0.18△花椒酰胺中剂量组 治疗前 134.50±10.11△2.59±0.40△（n=10） 治疗后 76.68±7.97△1.40±0.28差值 57.82±5.56△1.19±0.15△花椒酰胺低剂量组 治疗前 131.07±9.45△△2.61±0.41△△（n=10） 治疗后 80.33±8.52△△1.25±0.26差值 50.74±5.33△△1.36±0.14△△

2.2 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后痛阈值的影响 见表2。与右前肢比较，模型组大鼠显著降低了左前肢的痛阈值（P＜0.01）；与模型组比较，花椒酰胺高、中、低剂量组能显著提高大鼠左前肢的痛阈值（P＜0.01）。

表2 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后痛阈值的影响（g，±s）

表2 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后痛阈值的影响（g，±s）

组别 时间 左前肢 右前肢假手术组 治疗前 724.55±60.23△732.83±61.30 （n=10） 治疗后 736.41±61.47△740.85±62.88模型组 治疗前 442.97±55.14*729.65±64.56 （n=10） 治疗后 437.69±54.05*722.93±60.06花椒酰胺高剂量组 治疗前 460.20±51.27*738.54±65.47 （n=10） 治疗后 672.99±58.69*△731.25±61.20花椒酰胺中剂量组 治疗前 454.31±50.53*733.48±64.29 （n=10） 治疗后 640.06±55.82*△735.68±63.33花椒酰胺低剂量组 治疗前 449.91±52.05*730.26±62.20 （n=10） 治疗后 635.53±52.84*△740.09±64.41

2.3 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后游泳时间的影响 见表3。与假手术组比较，模型组显著降低大鼠的游泳时间（P＜0.01）；与模型组比较，花椒酰胺高、中、低剂量组能显著提升大鼠的游泳时间（P＜0.01）。

表3 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后游泳时间的影响（s，±s）

表3 花椒酰胺对神经根型颈椎病大鼠治疗前后游泳时间的影响（s，±s）

组别 n 治疗前后差值假手术组 10 3.71±3.34模型组 10 7.76±3.48花椒酰胺高剂量组10 54.71±41.05治疗前 治疗后385.63±50.36△389.34±49.82△332.50±47.83*340.26±46.44*328.49±45.55*383.20±48.80*△花椒酰胺中剂量组10 40.69±32.30 334.81±44.31*375.50±50.18△花椒酰胺低剂量组 10 329.62±45.20*370.27±49.56△40.65±33.66

2.4 花椒酰胺对血清中TNF-α、IL-1β、COX-2水平的影响 见表4。与假手术组比较，模型组显著升高血清中TNF-α、IL-1β及COX-2水平（P＜0.01）；与模型组比较，花椒酰胺高、中、低剂量组能显著降低血清中TNF-α、IL-1β及COX-2水平（P＜0.01或P＜0.05）。

表4 花椒酰胺对血清中TNF-α、IL-1β、COX-2水平的影响（±s）

表4 花椒酰胺对血清中TNF-α、IL-1β、COX-2水平的影响（±s）

组别 n COX-2（ng/L）假手术组 10 4.77±1.64△模型组 10 8.01±2.32*花椒酰胺高剂量组10 5.12±1.95△TNF-α（pg/mL） IL-1β（ng/L）31.34±5.66△233.48±40.25△68.86±8.10*543.75±92.31*34.01±5.27△280.39±41.15△花椒酰胺中剂量组10 5.03±2.06△38.82±5.85△277.21±44.20△花椒酰胺低剂量组 10 42.31±6.02*△310.55±50.09△5.99±2.38△△

3 讨 论

随着伏案工作的日益增多，神经根型颈椎病的发病率不断上升，且呈现年轻化趋势。神经根型颈椎病是颈椎间盘的退行性病变，在颈椎病中发病率最高，临床表现为颈、肩、手臂、手等部位的麻木和疼痛。目前，中医辨证研认为神经根型颈椎病为寒湿热邪入侵肢体经络，气血不畅所致，此病由虚实兼杂而成病，为本虚标识之证［4］。中药在治疗神经根型颈椎病方面有着重要的经验，补气、补血、活血、发散风寒的中药对神经根型颈椎病的治疗有着明显疗效［5］。在西医观点看来，神经根型颈椎病所产生的疼痛与压迫和炎症因子密切相关，神经根受损后会产生自发痛和放射痛，是神经根型颈椎病的典型症状［6］。背根节细胞受损以后，与髓鞘脱失处的纤维异常放电，多种疼痛递质得以合成，从而引起自发痛和痛觉过敏［7］。在炎症的侵润过程中，许多炎症因子，如TNF-α、IL-1β、COX-2等发挥了重要的作用。活化的单核/巨噬细胞核T淋巴细胞产生TNF-α，其在炎症反应中具有关键的促炎作用及始动作用［8］。IL-1β也是最重要的细胞炎症因子之一，能诱导细胞间黏附分子表达，激活中性粒细胞和单核细胞，介导炎症反应［9］。COX-2是炎症应答的诱导酶，调控炎症情况下PGs的释放［10］。有研究表明，COX-2被大量诱导和表达，可导致炎症反应的放大和增强［11］。

花椒酰胺是花椒活血通脉作用的主要有效成分，有研究报道其具有麻醉、兴奋、抑菌、除风湿及镇痛［12］的药理作用。由于中医辨证观点认为具有活血、发散风寒的中药成分对神经根型颈椎病有疗效，因此将花椒酰胺作为研究药物具有一定的意义。

在本实验中，我们以神经根型颈椎病大鼠为模型，发现花椒酰胺能显著降低大鼠血清中的炎症因子TNF-α、IL-1β、COX-2的表达水平，还能降低能显著降低大鼠疼痛行为和步态评分，提高痛阈和游泳时间，说明了花椒酰胺对神经根型腰椎病大鼠有一定的抗炎作用，其机制与降低炎症因子TNF-α、IL-1β、COX-2有关。

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R285.5 文献标志码：A

1004-745X（2016）08-1552-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2016.08.030

（电子邮箱：106334600@qq.com）

2016-01-22）