端粒结合蛋白PinX1在大肠癌中的表达及其临床意义

迟涛　钱东　王锐　郭亚飞　袁中旭

端粒结合蛋白PinX1在大肠癌中的表达及其临床意义

迟涛1钱东2王锐1郭亚飞1袁中旭1

目的：研究端粒结合蛋白PinX1在大肠癌组织中的表达及临床意义。方法：收集共86例接受根治性手术的大肠癌病人术后标本，运用免疫组化的方法（IHC）检测标本中PinX1的表达并分析PinX1的表达与病人临床病理因素及预后的关系。结果：与正常结肠上皮相比，PinX1在大肠癌组织中呈低表达。生存分析发现PinX1的低表达预示着病人的不良预后，多因素分析揭示PinX1的表达是预测病人预后的独立因素。结论：研究揭示PinX1是大肠癌病人预后的独立预测因子，其可作为临床大肠癌患者预后分析判断依据之一。

大肠癌PinX1临床预后

大肠癌的发病率占据欧美国家癌症发病率的第2位，全世界每年大约有100万新增病例，同时至少50万人死亡［1～2］。在中国，大肠癌的发病率逐年上升，排在恶性肿瘤第4～6位。大肠癌从遗传学上实质是基因相关病，癌基因的激活和（或）抑癌基因的失活与其发生发展密切相关。寻找更多更有效的可以预测病人预后及治疗的基因靶标对于优化病人的治疗方案及改善临床治疗效果十分必要。

1　资料与方法

1.1一般资料从天津市肿瘤医院收集2005～2010年86例大肠癌病人及25例正常大肠组织石蜡标本（标本来源于结直肠良性肿瘤患者）。所有组织均为术后标本并经过病理学确诊。所有纳入研究的病人均具有完整的随访资料。病人的临床病理特征见表1。

1.2方法

1.2.1免疫组化染色常规石蜡包埋组织，4μm厚连续切片后脱蜡，梯度酒精水化后进行抗原修复，自然冷却至室温。加3%双氧水（H2O2）室温孵育5～10min，PBS冲洗。滴加正常山羊血清封闭非特异性抗原后，加一抗，4℃孵育过夜，PBS冲洗。滴加二抗37℃反应15min，PBS冲洗。DAB显色。苏木素轻度复染，脱水、透明、封片。免疫组织化学阳性结果判断标准：免疫组化结果以阳性染色肿瘤细胞占所有肿瘤细胞总数的百分比进行打分，将PinX1阳性染色细胞比率＞50%定为高表达组，而＜50%定为低表达组。病理结果由两位病理医生在不知病例资料的情况下，独立进行阅片并评分，当出现分歧时，由两位专家将不同的判断结果进行重新评估，直到两位专家得到一致的意见。

1.2.2统计学分析使用SPSS17.0统计学软件进行数据分析。采用Kaplan-Meier法计算不同分组病人的生存率，Log-rank法进行显著性检验，Cox回归模型进行单变量及多变量预后分析，相关计数资料采用x2检验。组间均数比较采用单因素方差分析，数据以±s表示，P＜0.05为差异有统计学意义。

表1　PinX1的表达和病人临床病理参数之间的关系

2　结果

2.1PinX1蛋白在大肠癌组织中呈低表达通过免疫组化检测，我们发现，PinX1在细胞核中表达（图1A-D）。根据我们的评分原则（见材料与方法），总共86例病人肿瘤组织中，PinX1低表达的为52例（60%），而在25例正常大肠黏膜组织中，PinX1低表达的仅为6例（24%），两者之间存在统计学差异（P=0.012）。此外，PinX1的表达水平和肿瘤的分化程度呈正相关（P=0.037；图1）。未发现PinX1的表达与病人其它临床病理因素之间的相关性（P＞0.05；图1）。

图1　PinX1在正常结肠腺体及大肠癌组织中的表达（免疫组化染色）

2.2肿瘤组织中PinX1低表达预示病人不良预后根据我们的评分标准将病人分别分为两个亚组：PinX1高表达组和PinX1低表达组。我们发现，无论是比较总生存率（图2A，P=0.016）还是无病生存率（图2B，P=0.042），PinX1高表达组病人的预后均明显好于PinX1低表达组，比较数据具有统计学差异。多因素分析显示，和病人TNM分期及有无淋巴结转移等指标一样，PinX1的表达可以作为预测病人生存的独立指标（P=0.015；见表2）。

图2　Kaplan-Meier分析PinX1的表达和入组的大肠癌病人的生存预后关系

表2　多因素Cox回归分析结直肠癌总生存期

3　讨论

从分子水平寻找预测肿瘤病人预后生物标志物的研究越来越广泛，而相关研究成果也越来越多地应用于肿瘤的诊断、治疗及预后判断。PinX1是在进化上高度保守并与端粒/端粒酶相互作用的核蛋白。因为其与端粒酶结合并且其蛋白炭端有较强的抑制端粒酶活性的功能，PinX1被认为是一种端粒酶抑制因子和潜在的抑癌基因［3］。有研究报道PinX1在肝癌中低表达，而钱东等［4～5］研究提示其在食管鳞癌组织中呈高表达并与病人放化疗抵抗相关。这提示PinX1在肿瘤中的表达及作用具有肿瘤特异性。本研究旨在研究PinX1在大肠癌组织中的表达情况及其对病人生存预后的影响。

我们的研究发现：与正常的结肠组织相比，PinX1在大肠癌病人组织中普遍呈现低表达。我们知道，比较正常组织与肿瘤组织遗传学及表观遗传学的差异是现代肿瘤分子生物学的基石，也是发现肿瘤相关基因（包括癌基因和抑癌基因）的有效途径［6～7］。PinX1的这种差异表达提示我们其可能在大肠癌的发生发展中发挥着一定的功能。进一步，我们根据PinX1在大肠癌中的表达强度不同，将病人分为高表达组和低表达组。生存分析的结果清晰的显示，PinX1高表达组病人的预后明显好于PinX1低表达组，PinX1的表达可以作为预测病人预后的独立指标。这些结果和之前在肠癌及肝癌中的相关研究结果一致［4～7］。但是，也有研究提示PinX1在食管鳞癌中呈高表达，PinX1高表达是接受根治性放化疗食管鳞癌病人预后不良因素［5］。这提示PinX1在肿瘤中的表达、状态及功能并非一成不变，而是具有肿瘤特异性。腺癌和鳞癌中PinX1参与肿瘤发生发展的生物学功能可能不同。

综上所述，我们的研究发现，PinX1在大肠癌中呈低表达，而大肠癌中表达PinX1较高的患者总体预后较PinX1较低的患者好，PinX1可以作为预测大肠癌患者预后判断分子生物学标志之一。

1Henry LR，Lee HO，Lee JS，et al.Clinical implications of fibroblast activation protein in patients with colon cancer.Clinical cancer research：an official journal of the American Association for Cancer Research.2007；13：1736～1741.

2Cancer statistics.Jama.2013，310：982.

3Zhou XZ，Lu KP.The Pin2/TRF1-interacting protein PinX1 is a potent telomerase inhibitor.Cell.2001，107：347～359.

4Zhou XZ，Huang P，Shi R.The telomerase inhibitor PinX1 is a major haploinsufficient tumor suppressor essential for chromosome stability in mice.The Journal of clinical investigation.2011，121：1266～1282.

5Qian D，Zhang B，He LR.The telomere/telomerase binding factor PinX1 is a new target to improve the radiotherapyeffectofoesophagealsquamouscellcarcinomas.The Journal of pathology.2013，229：765～774.

6Campbell RM，Tummino PJ.Cancer epigenetics drug discovery and development：the challenge of hitting the mark.The Journal of clinical investigation. 2014，124：64～69.

7Dawson MA，Kouzarides T.Cancer epigenetics：from mechanism to therapy.Cell.2012，150：12～27.

/（编审：刘文斌施仲赋）

Expression and Clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma

1.Anhui No.2 People's Hospital，Hefei 230041，Anhui
2.Tianjin Medical University，Tianjin 300060，China
CHI Tao1，QIAN Dong2，WANG Rui1，et al

Objective:To investigate the expression and clinical significance of PinX1 in Colorectal Carcinoma （CRC）.Methods:The expression dynamics of PinX1 was detected byimmunohistochemistry（IHC）in one cohort of CRC patients；The prognostic significance of PinX1 in CRC patients was analysis by Kaplan-Meier；Results:the expression of PinX1 in CRC tissues was lower than that in normal non-cancerous tissues.Low expression of PinX1 was an independent predictor for short overall survival（OS）and disease-specific survival（DFS）of CRC patients.Conclusion:our data suggested that PinX1 was a novel prognostic biomarker for CRC patients survival，and it can be used as one analysis judgment of the clinical prognosis of patients with colorectal cancer.

Colorectal Carcinoma；PinX1；clinical prognosis

R735.34【文献标识码】A

1671－8054（2016）01-0030-03

1.安徽省第二人民医院普外科合肥230041 2.天津医科大学肿瘤医院放射治疗科天津300060

许榕生，男，主任医师

2015-11-10收稿，2016-01-12修回