贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响

王云鹏，方 昆

1. 开封市中心医院 眼科，河南 开封 475000； 2. 开封市儿童医院，河南 开封 475000



贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响

王云鹏1，方 昆2

1. 开封市中心医院 眼科，河南 开封 475000； 2. 开封市儿童医院，河南 开封 475000

〔目的〕 研究贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响作用。〔方法〕 建立正常氧含量和缺氧两种条件，进行人脐静脉内皮细胞的培养，根据不同的处理时间进行试验分组，并进行RT-PCR检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的mRNA表达和酶联免疫吸附试验(ELISA)，检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的蛋白表达的检测。〔结果〕 正常氧含量条件下，相较于对照组，各实验组纤维化相关炎症因子的蛋白表达增加，12 h组、24 h组、48 h组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加，而6 h组的mRNA表达无统计学差异；缺氧条件下，各实验组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加，P<0.05，差异均显著。〔结论〕 无论在正常氧含量还是缺氧条件下，贝伐单抗在正常氧含量和缺氧条件均可刺激纤维化相关炎症因子白细胞介素IL-1β的表达增加，说明此部分炎症因子可能参与了抗新生血管内皮生长因子治疗后的新生血管纤维化过程。

贝伐单抗；纤维化；炎症因子白细胞介素IL-1β；表达

目前，临床采用的抗血管内皮生长因子单克隆体在疾病的治疗，尤其是作为眼底新生血管性疾病的一线治疗方法时，常常发生抗血管内皮生长因子治疗后新生血管出现严重纤维化的症状，威胁着患者的生命健康[1]。针对此现象，临床研究指出炎症因子白细胞介素IL-1β直接影响着血管的纤维化。为此，我们通过研究贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响作用，分析说明其抗治疗后新生血管的纤维化机制，并详细报告如下。

1　研究方法

1.1具体操作

进行不同条件下贝伐单抗对人脐静脉内皮细胞纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响作用的测试。首先，准备好需要的实验材料，主要包括我院保存的人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC)、DMEM/F-12培养基、胎牛血清、胰蛋白酶、注射用青霉素钠、注射用硫酸链霉素、贝伐单抗、六水合氯化钴、总RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、SYBR Green试剂盒、ELISA 试剂盒。其次，建立正常氧含量和缺氧两种条件进行人脐静脉内皮细胞的培养并接种于6孔板，等细胞融合达到80%时才能进行实验，此时需加入0.25 g/L浓度的贝伐单抗于体积分数2%胎牛血清DMEM/F-12培养基。其中，人脐静脉内皮细胞的培养要求、保障温度维持在37 ℃、孵育箱二氧化碳体积维持在体积分数5%，DMEM/F-12培养基为体积分数10%胎牛血清，并加入适量的青霉素和链霉素。然后，根据不同的处理时间进行试验分组，具体为0 h组、6 h组、12 h组24 h组、48 h组。其中，0 h为对照组，其他为实验组。

表1　贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响测试结果±s，ρ/(ng·L-1)]

1.2贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响测试

贝伐单抗对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β表达的影响测试包括采用RT-PCR检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的mRNA表达和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的蛋白表达。

1.3统计学方法

2　结果

采用RT-PCR检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的mRNA表达测试结果详见表1。正常氧含量条件下，相较于对照组，12 h 组、24 h 组、48 h 组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA 表达明显增加，P<0.05，差异有统计学意义，而6 h 组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA表达无统计学差异。缺氧条件下，相较于对照组，各实验组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA表达明显增加，P<0.05，差异有统计学意义。

酶联免疫吸附试验(ELISA)检测纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的蛋白表达检测结果显示：正常氧含量条件下，相较于对照组，各实验组纤维化相关炎症因子的蛋白表达增加，纤维化相关炎症因子IL-1β在12 h 组、24 h 组、48 h 组差异明显，P<0.05，差异有统计学意义；缺氧条件下，相较于对照组，各实验组纤维化相关炎症因子IL-1β的蛋白表达明显增加，P<0.05，差异均有统计学意义，与mRNA表达结果相一致。

3　讨论

贝伐单抗(Bevacizumab)是通过中国仓鼠卵巢细胞表达系统产生的，相对分子质量大约为149×103的人源化单克隆IgG1血管内皮生长因子(VEGF)抗体，可与VEGF-A的5种亚型VEGF121、VEGF115、VEGF165、VEGF189、VEGF206组合，阻断表皮、内皮细胞与基质间VEGF-A与fms样酪氨酸激酶受体、含激酶插入区受体的信号转导，抑制内皮细胞有丝分裂，减少血管通透性，从而阻断新生血管的形成，进而主要应用于抑制新生血管的生成[1]。近年来，随着对其研究的深入，临床医学[2]发现其能抑制体外培养Tenon囊成纤维细胞增殖，减少胶原沉淀，并起到抗纤维化之效，还能减少早期渗入的巨噬细胞、中性粒细胞和单核细胞等炎症细胞。

我们的研究结果显示，正常氧含量条件下，相较于对照组，各实验组纤维化相关炎症因子的蛋白表达增加，1 h组、24 h组、48 h组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加，而6 h组的mRNA表达无统计学差异；缺氧条件下，各实验组纤维化相关炎症因子IL-1β的mRNA和蛋白表达明显增加；P<0.05，差异均显著。综上所述，无论在正常氧含量还是缺氧条件下临床剂量的贝伐单抗在正常含氧量和缺氧条件下均可上调纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的表达，但在不同试验条件下，上调时间有所差别，其对纤维化炎症因子白细胞介素IL-1β的影响不一致。根据实验可以推测，治疗中，注射抗血管内皮生长因子制剂后的新生血管纤维化过程中有贝伐单抗引起IL-1β的参与，且同时能影响缺氧细胞和非缺氧细胞，并在促纤维化形成方面有一定的促进作用。

[1] 储三军，王敏，徐海峰. 贝伐单抗对人脐静脉内皮细胞纤维化相关炎症因子表达的影响[J]. 眼科新进展，2015,20(11):1025-1028.

[2] 李婧. 贝伐单抗对去上皮瓣Epi-LASIK术后兔眼角膜Haze形成以及对TGF-β1、α-SMA表达的影响[D]. 湖北中医药大学：2012.

[责任编辑李武营]

Influence Bevacizumab fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β expression

WANG Yunpeng1, FANG Kun2

1. Ophthalmology, Kaifeng Central Hospital, Henan Kaifeng 475000, China; 2. Kaifeng Children's Hospital, Henan Kaifeng 475000, China

〔Objective〕To study Bevacizumab fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β expression of action. mRNA expression and the establishment of normal oxygen content and hypoxic conditions of the two cultured human umbilical vein endothelial cells, depending on the test packet processing time, and RT-PCR to detect fibrosis inflammatory cytokines interleukin IL-1β.〔Methods〕Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) detection of fibrosis detected expression of inflammatory cytokines interleukin IL-1β in.〔Results〕Under normal conditions of oxygen content, compared to the control group, and increased expression in each experimental group fibrosis inflammatory factors, 12 group, 24h group, mRNA and protein expression 48h group fibrosis inflammatory factors IL-1β significantly increased and the mRNA expression of 6h was no statistical difference; under hypoxic conditions, mRNA and protein expression in each experimental group fibrosis inflammatory cytokines IL-1β significantly increased, P<0.05, the differences were significant. 〔Conclusion〕The matter under normal oxygen content or hypoxia, bevacizumab in normal oxygen content and increase the expression of hypoxia can stimulate fibrosis inflammatory factors interleukin IL-1β, indicating that this part of the inflammatory cytokines may be involved neovascularization fibrosis anti vascular endothelial growth factor treatment.

bevacizumab; fibrosis; inflammatory cytokines interleukin IL-1β; expression

1672-7606(2016)02-0107-03

2016-02-23

王云鹏(1977-)，男，河南开封人，主治医师，从事眼科疾病的诊治工作。

R771.1

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