血清亲环素A与颈动脉不稳定斑块及脑梗死的相关性研究

聂善静，李丹，王宏

（石河子大学医学院第一附属医院 神经内科，新疆 石河子 832000）

血清亲环素A与颈动脉不稳定斑块及脑梗死的相关性研究

聂善静，李丹，王宏

（石河子大学医学院第一附属医院 神经内科，新疆 石河子 832000）

目的通过检测颈动脉硬化不稳定斑块伴动脉粥样硬化脑梗死（A C I）患者（A C I组）、颈动脉硬化不稳定斑块患者（单纯斑块组）及健康体检者（对照组）血清亲环素A（C y P A）、脂蛋白相关磷脂酶A2（Lp-P L A2）水平，探讨观察者血清C y P A、Lp-P L A2水平与斑块不稳定性及A C I的关系。方法颈动脉粥样硬化斑块经颈部血管彩色超声检查确定；采用双抗体夹心酶联免疫吸附法（EL ISA）测定观察者血清C y P A、Lp-P L A2水平。结果

患者的血清C y P A水平A C I组（2.031±0.679）ng/m l＞斑块组（3.790±0.943）ng/m l＞对照组（5.113±1.568）ng/m l，差异有统计学意义（P＜0.05）；血清Lp-p l A2水平A C I组（1.949±0.666）ng/m l＞斑块组（1.703±0.541）ng/m l＞对照组（1.426±0.406）ng/m l，差异有统计学意义（P＜0.05）。L o gis t i c回归分析显示，C y P A是不稳定斑块患者发生脑梗死的独立危险因素（ ＾O R=2.71，95%C I：1.52，4.83，P=0.01）。以C y P A、Lp-P L A2为双变量行相关分析显示两者呈正相关（r=0.343）。结论血清C y P A、Lp-P L A2水平可作为颈动脉不稳定斑块的临床标志物；联合检测血清C y P A、Lp-P L A2水平可能会预测A C I的发生。

颈动脉不稳定斑块；动脉粥样硬化脑梗死；血清亲环素A；脂蛋白相关磷脂酶A2

脑梗死的发生严重威胁着人们的健康，加重人们的生活负担，其中动脉粥样硬化性脑梗死（atherosclerosis cerebral in f arction，A CI）是最常见的类型［1］。动脉粥样硬化（A therosclerosis，A S）是慢性炎症过程，炎症反应、氧化应激贯穿A S起始、不稳定斑块形成和斑块破裂整个过程［2］。近年来血清亲环素A（C yp A）、脂蛋白相关磷脂酶A2（L p-P L A2）作为一种新型炎症标志物，被证实与斑块的不稳定性相关［3-4］。C yp A与内皮功能、A S的发生、发展及斑块的稳定性有密切关系，但尚未有研究报道其在单纯不稳定斑块及A CI患者血浆中的水平变化，故本研究主要通过测定L p-P L A2的水平来评估不稳定斑块的严重程度及炎症水平，比较单纯颈不稳定斑块及A CI患者血清C yp A、L p-P L A2水平的变化，以探讨C yp A、L p-P L A2与颈动脉不稳定斑块及A CI之间的关系。

1　资料与方法

1.1临床资料

选取2014年11月～2015年8月于石河子大学医学院第一附属医院神经内科的脑梗死患者，行颈动脉彩色B超确定合并有不稳定斑块者50例，作为斑块合并脑梗死组（A CI）；同期选体检中心健康人群，经颈动脉彩色B超确定有不稳定斑块者50例作为单纯斑块组，经颈动脉彩色B超确定无斑块者50例作为正常对照组。

病例组纳入排除标准：所有脑梗死患者均符合2012年缺血性脑卒中诊断和诊疗质量控制行业标准，且符合T O A S J分型等L AA型；均经神经系统查体、头颅C T和（或）M R I、颈动脉彩色多普勒超声、心电图等检查确诊。排除标准：①非大动脉粥样硬化性脑梗死；②急性冠状动脉综合征、心力衰竭及其他周围血管病；③自身免疫性疾病及其他炎症疾病；④肿瘤、严重肝肾功能损害等疾病；⑤3个月内手术及外伤史。

对照组纳入标准：年龄、性别与病例组相匹配，既往无脑血管病病史，头颅磁共振证实无卒中。

颈动脉斑块分组：稳定斑块组（包括硬斑和扁平斑）；不稳定斑块组（软斑和溃疡斑）。同时存在稳定及不稳定斑块的均归为不稳定斑块。

1.2方法

1.2.1标本采集对照组、单纯斑块组、A CI组分别采取空腹静脉血2m l，采血后均立即加入EDT A抗凝管中，以3 000 r/min离心15min后，收集上清液，将标本置入-80℃冰箱冷冻保存待测。为减少批间误差和测量误差，全部标本采集完成后一次性检测。

1.2.2检测方法采用 E L I S A法测定标本中C y P A、L p-P L A2水平，流程严格按照试剂盒说明书进行操作，人C yp A及人L p-P L A2酶联免疫试剂盒均购于上海西唐生物科技有限公司。其余常规生化实验室检查由本院检验科完成。

1.2.3颈动脉彩色多普勒超声检查采用飞利浦I E33型彩色多普勒超声诊断仪，探头频率7～11M H z，患者取平卧位，头偏向一侧，沿颈动脉走向，将探头自上而下进行连续纵横切面扫描双侧颈总、颈内、颈外动脉，观察斑块形态及回声特点。将颈动脉粥样硬化斑块［5］定义为内膜中层不连续性、不均匀性增厚并凸入管腔，边界光滑，病变厚度是邻近部位内-中层厚度的1.5倍或彩色多普勒显示血管腔某处彩色血流缺损，缺损处面积≥10mm2。斑块分型方法：①内膜不光滑，回声增强、增厚，局部轻微隆起为扁平斑；②斑块凸出管腔，回声强弱不均，表面光滑连续为软斑；③斑块较大，基底较宽，表面出现凹凸，边缘回声较低为溃疡斑；④斑块高低不平，强回声，后伴声影为硬斑。将扁平斑、硬斑归为稳定斑块组，软斑、溃疡斑归为不稳定斑块组。

1.3统计学方法

采用S P SS 17.0统计软件进行数据分析，计量资料以均数±标准差（x±s）表示，正态分布计量资料用方差分析，非正态分布的计量资料用非参数检验，计数资料用χ2检验；血浆C y P A、L p-P L A2水平比较用方差分析两两比较法；脑梗死的相关危险因素用L og istic回归分析，以比值比（odds ratio，O R＾）及95%可信区间（con f idence inter v al，CI）表示；相关分析用双变量线性相关分析；P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.13组一般资料比较

经分析3组观察者性别、年龄、吸烟史、体重指数（B MI）比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

2.23组之间血清C y P A、Lp-PL A2水平比较

A CI组血清C y P A、L p-P L A2水平与对照组和斑块组的比较，经方差分析，差异有统计学意义（P＜0.05），A CI组血清C y P A、L p-P L A2水平高于对照组与斑块组。C y P A3组间两两比较，对照组与斑块组，对照组与A CI，斑块组与A CI比较，差异有统计学意义（均P=0.000）；L p-P L A23组间两两比较，对照组与斑块组比较，差异有统计学意义（P=0.013），对照组与A CI比较，差异有统计学意义（P=0.000），斑块组与A CI比较，差异有统计学意义（P=0.001）。见表2。

表1　3组一般资料比较 （n=50）

表2　3组间血清C y P A、Lp-PL A2水平的比较（n g/ml，x±s）

2.3A C I相关危险因素分析

以不稳斑块组是否发生脑梗死为因变量，以性别、年龄、吸烟史、B MI、三酰甘油（T G）、血清总胆固醇（T C）、低密度脂蛋白（L D L-C）、高密度脂蛋白（H D LC）、同型半胱氨酸（H C Y）、糖化血红蛋白（H b A1c）、C反应蛋白（C R P）、C y P A、L p-P L A2为协变量，分别进行单因素L o g istic回归分析，结果T G、T C、L D L-C、H C Y、H b A1c、C R P、C y P A、L p-P L A2差异有统计学意义（P＜0.05）。将有统计学差异的指标为协变量进行多因素L o g istic回归分析，提示C y P A是颈动脉不稳定斑块发生脑梗死的独立危险因素（=2.71，95%CI： 1.52，4.83，P=0.01）。

2.4观察者血清C y P A、Lp-PL A2的相关性分析绘制散点图后，发现C y P A与L p-P L A2有相关趋势，经S pearman相关分析，观察者血浆C y P A与L p-P L A2浓度呈正相关（r=0.343，P=0.000）。

3　讨论

动脉粥样硬化是脑血管事件发生的主要病理基础［6］。1986年美国华盛顿大学医学院R O SS教授首次明确提出A S是一种炎症性疾病。斑块的不稳定性是评价血管事件发生、复发的危险因素，陈莉等认为斑块的危险性在于其不稳定性［7］，而炎症反应影响斑块的稳定性［8］，斑块内炎症是引起斑块不稳定的关键因素，斑块破裂及斑块糜烂与炎症共存，不稳定状态时斑块内炎症总是上调［9］。近期与斑块不稳定性相关的炎性标志物受到学者的关注，目前得到普遍认可的炎性标志物［10］如C R P、金属机制蛋白酶（MMP9）等是A S的敏感检测指标，但炎症反应是一个复杂的过程，在A S不同阶段，炎症因子的水平各有差异，然而单项指标特异性较差，需要寻找不同阶段的炎性指标结合超声等影像学检查，更早、更全面地揭示A S的发展及严重程度。

L p-P L A2又被称为血小板活化因子乙酰水解酶，人血清L p-P L A2主要由炎症细胞合成分泌，它是与A S密切相关的磷脂酶家族分子，可预测斑块不稳定性及炎症水平［11］，在国外研究中也是较公认的反应内斑块不稳定性的新标志物之一。本研究表明，观察者血清L p-P L A2水平为A CI组＞单纯斑块组＞对照组，说明L p-P L A2反应斑块的不稳定性，A CI组L p-P L A2水平稍高，可能为A CI组的炎症程度较高。L p-P L A2水解氧化型低密度脂蛋白胆固醇（O X L D L-C）生成游离的氧化脂肪酸和溶血卵磷脂［12］，这两种物质是强烈的致炎因子，最终影响斑块不稳定性。KO L O D GI E等也发现在斑块坏死中心、易损及破裂斑块周围L p-P L A2高度表达，但在正常对照及稳定斑块中难以检测到。另外，白小涓等研究［9］表明，与传统炎症因子C-反应蛋白比较，L p-P L A2有较高的血管内特异性，是独立于全身炎症之外的血管内炎性标志物。

C y P A是一种在生物界广泛存在、高度保守的蛋白质，它可以存在于细胞内，也可因细胞凋亡和炎症反应向细胞外分泌，发挥类似于细胞因子的作用［13］。在A S形成中C y P A主要通过以下方面发挥作用：①唐振旺等认为［14］，其通过调控细胞因子和炎症分子而参与内皮细胞的损害及整个过程；②趋化单核细胞移行，促进巨噬细胞分泌MMP-9和巨噬细胞集落刺激因子，增加斑块的不稳定性［15］；③激活E R K1/2、J N K （J u n N-terminal k inase）、核转录因子（N F-κB）和p38M A P K等信号通路，加重对内皮细胞的损害，增加A S斑块不稳定性［16］。本研究在剔除感染性疾病、恶性肿瘤、自身免疫性疾病等因素的影响后发现观察者血清C yp A水平为单纯斑块组＞对照组，提示C yp A水平与斑块的不稳定性有一定关系，对于A CI组＞单纯斑块组，不仅能说明炎症反应参与不稳定斑块的发展及脑梗死的发病过程，还能反映不稳定斑块发展的严重程度，提示高水平的C yp A更容易合并脑梗死，可能与A CI患者斑块炎症程度较高有关。N IG R O研究也表明，在A S斑块中C yp A大量表达，是检测炎症和斑块活动的有效指标［3］。C yp A可能会成为预测不稳定斑块发展的生物学指标。

本研究以不稳定斑块患者是否发生脑梗死为因变量进行多因素L o g istic回归分析，结果显示C y P A、L D L-C、H b A1c有统计学意义，提示除L D L-C、H b A1c传统影响因素外，C y P A是颈动脉不稳定斑块发生脑梗死的独立危险因素（=2.71）。双变量相关分析结果显示，观察者血清C yp A和L p-P L A2浓度在A S进展中呈正相关，提示C yp A和L p-P L A2具有协同正向作用，两者之间可能存在通路，其协同作用的机制尚不明确，需要更多研究来证实。

综上所述，C yp A和L p-P L A2为不稳定斑块的特异性炎症标志物，联合检测它们的含量可能对A S的早期发现、判断斑块局部炎症发展的严重程度、预防血管事件发生及临床干预有重要意义。

［1］A Z A R P A Z HOOH M R，M OB A RR A N，P A R I Z A DE H S M，et al. S er u m hi g h-sensiti v ity C-reacti v eprotein and heat shoc k protein27antibody titers inpatients w ithstro k e and6-month pro g nosis［J］.A n g iolo g y，2010，61（6）:607-612.

［2］L I X，DE R O I DE N，M A LL A T Z.The role o f the in f lammasome in cardio v asc u lar diseases［J］.J M ol M ed（B erl），2014，92（4）:307-309.

［3］N IG R O P，S A T OH K，DE LL M R，et al.C yclophilin A is an in f ammatory mediator that promotes atherosclerosis in apolipoprotein E-de f cient mice［J］.J E x p M ed，2011，208（1）:53-66.

［4］G A R G P K，MCC L E LL A ND R L，J ENN Y N S，et al.A ssociation o f lipoprotein-associatedphospholipase A（2）andendothelial fu nction in the M u lti-Ethnic S t u dy o f A therosclerosis（M E S A）［J］. V asc u lar M edicine，2011，16（4）:247-252.

［5］C O PP O L A G，C O RR A D O E，PI R A I N O D，et al.C arotid intima-media thic k ness and endothelial fu nction in yo u n g patients w ith history o f myocardial in f arction［J］.I nternational J o u rnal o f A n g iolo g y，2009，28（2）:120-126.

［6］李召晨，杜瑞艳，王洪娟，等.颈动脉粥样硬化与急性脑梗死关系的研究［J］.中国现代医学杂志，2013（6）:89-93.

［7］陈莉，吴婷，李慎义，等.超声检测颈动脉斑块与冠心病的相关性研究［J］.中国现代医学杂志，2013（3）:48-51.

［8］胡蓉，方先松，江丽霞，等.冠心病患者血清L p-P L A2及hs-C R P水平与冠状动脉粥样硬化易损斑块的相关性［J］.中国老年学杂志，2015（1）:74-75.

［9］白小涓.内皮祖细胞在动脉粥样硬化易损斑块中的作用［J］.中国动脉硬化杂志，2011（7）:543-546.

［10］M O RR OW D A，DE L E M O S J A，S A B A T I NE M S，et al.C linical rele v ance o f C-reacti v e protein d u rin g f ollo w u p o f patients w ith ac u te coronary syndromes inthe Agg rastat-to-Z ocor Trail［J］. C irc u lation，2006，114（4）:281-288.

［11］刘军妮，徐冬玲，杜贻萌，等.脂蛋白相关磷脂酶A2与兔易损斑块的相关性研究［J］.中国病理生理杂志，2010（4）:669-675.

［12］T A K A H A S H I M，Y A G YU H，T A Z O E F，et al.M acropha g e lipoprotein lipase mod u lates the de v elopment o f atherosclerosis b u t not adiposity［J］.L ipid R es，2013，54（4）:1124-1134.

［13］张田田，张俊峰.亲环素A及其受体C D147对动脉粥样硬化的影响［J］.上海交通大学学报（医学版），2011（12）:1778-1781.

［14］唐振旺.C yclophilin A基因多态性及其介导的炎症反应在冠心病中的作用［D］.南华大学，2012（6）:11-77.

［15］王茂林，汪恩焕，周钟阳，等.血清亲环素A与急性动脉粥样硬化性脑梗死关系研究［J］.淮海医药，2014（3）:221-222.

［16］袁伟，严金川，梁仪，等.亲环素A启动单核细胞炎症性募集的机制［J］.中国动脉硬化杂志，2013（9）:791-796.

（申海菊 编辑）

Correlation of cyclophilin A w ith unstable carotid p laques and atherosclerotic cerebral infarction

Shan-jing Nie，Dan Li，Hong Wang
（Department of Neurology，the First Affiliated Hospital，School of Medicine，Shihezi University，Shihezi，Xinjiang 832000，China）

Objective To investigate the relationships of plasma levels of cyclophilin A（CyPA）and lipoprotein-association phospholipase A2（Lp-PLA2）with the unstability of carotid plaques and atherosclerotic cerebral infarction（ACI）.M ethods Carotid atherosclerotic plaques were defined by cervical vascular color ultrasonic inspection.The plasma levels of CyPA and Lp-PLA2 were detected by enzyme linked immunosorbent assay（ELISA）in patients with unstable carotid atherosclerosis plaques and ACI（ACI group），patients with unstable carotid atherosclerosis plaques（simple plaque group）and in healthy people（control group）.Results The plasma level of CyPA in the ACI group［（2.031±0.679）ng/ml］was significantly higher than that in the simple plaque group［（3.790±0.943）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（5.113±1.568）ng/ml］（P＜0.05）.The plasma level of Lp-PLA2 in the ACI group［（1.949±0.666）ng/m l］was significantly higher than that in the simple plaque group［（1.703±0.541）ng/m l］，which was in turn higher than that in the control group［（1.426±0.406）ng/m l］（P＜0.05）.Logistic regression analysis showed that CyPA was the independent risk factor for cerebral infarction in the patients of unstable plaques（＾O R=2.71；95%CI:1.52，4.83；P= 0.01）.Correlation analysis showed CyPA and Lp-PLA2 were in a positive correlation（r=0.343）.Conclusions Plasma CyPA and Lp-PLA2 levels can be used as clinical markers of unstable carotid plaques.Joint detectionof CyPA and Lp-PLA2 could predict the occurrence of ACI.

atherosclerotic cerebral infarction；carotid artery unstable plaque；cyclophilin A；lipoproteinassociated phospholipase A2

R 543.5；R 743.33

B

10.3969/j.issn.1005-8982.2016.15.021

1005-8982（2016）15-0110-04

2015-10-29

王宏，E-mail：w an g832000@sina.com