冠心病患者血清血小板活化因子的表达及其与冠状动脉斑块性质的关系

付光学



冠心病研究

冠心病患者血清血小板活化因子的表达及其与冠状动脉斑块性质的关系

付光学

目的：探讨不同类型的冠心病患者血清血小板活化因子（PAF）的表达及其与冠状动脉（冠脉）斑块性质的关系。

方法：选取2013-01至2013-12期间于胜利油田中心医院住院并行冠脉造影检查的患者138例，依据冠脉造影结果和临床表现分为：冠脉造影正常者为对照组（n=33），急性冠脉综合征（ACS）组（n=65）， 稳定性心绞痛（SAP）组（n=40）。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清PAF浓度，比较三组患者血清PAF浓度的差异。采用血管内超声（IVUS）对ACS组和SAP组患者冠脉病变处进行检查，比较不同性质斑块中血清PAF浓度的差异。

结果：SAP组、ACS组患者血清PAF浓度明显高于对照组（P＜0.05）；ACS组血清PAF浓度显著高于SAP组（P＜0.05）。SAP组和ACS组IVUS检查结果显示，SAP组患者冠脉病变以硬斑块为主［30例（75.0%）］，ACS组患者冠脉病变斑块以软斑块为主［44例（67.7%）］，与SAP组相比，ACS组患者冠脉病变斑块以偏心斑块为主，斑块破裂（24.6% vs 7.5%）和血栓形成发生率（21.5% vs 0）、斑块正性重构发生率（46.1% vs 25.0%）、偏心指数［（0.70±0.22） vs （0.30±0.24）］均较高（均P＜0.01）；而外弹力膜面积两组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。纤维斑块、钙化斑块、混合斑块中血清PAF浓度均低于软斑块（P＜0.05）；纤维斑块与钙化斑块、混合斑块三者之间比较，血清PAF浓度差异均无统计学意义（P＞0.05）。

结论：（1） 血清PAF浓度参与粥样硬化斑块的形成，在ACS的发病中起着重要作用，斑块越不稳定，血清中PAF的浓度越高。（2）血清PAF浓度作为ACS相关因子，为诊断ACS提供依据，为临床检测、预防和治疗ACS提供新的思路。

冠状动脉疾病；急性冠状动脉综合征； 超声心动描记术，介入性；血小板活化因子

Abstract

Objective： To explore the expression of serum levels of platelet activating factor （PAF） and its correlation to the property of coronary plaque in patients with different types of coronary artery disease （CAD）.

Methods： A total of 138 patients received coronary angiography （CAG） in our hospital from 2013-01 to 2013-12 were studied. According to CAG and clinical presentation， the patients were divided into 3 groups： Control group， the subjects with normal coronary artery， n=33， ACS （acute coronary syndrome） group， n=65 and SAP （stable angina pectoris） group， n=40. Serum levels of PAF were detected by ELISA， coronary lesions were examined by intravascular ultrasound （IVUS）， and the correlation between PAF levels and plaque properties were studied.

Results： ①Compared with Control group， ACS group and SAP group had increased serum levels of PAF； PAF level in ACS group was even higher than SAP group， both P＜0.05. ②IVUS examination indicated that there were 30/40 （75.0%）patients with hard plaque in SAP group and 44/67 （67.7%） patients with soft plaque in ACS group. Compared with SAP group，ACS group were mainly having eccentric plaques and increased rates of plaque rupture （24.6% vs 7.50%）， thrombus formation （21.5% vs 0%）， plaque positive remodeling （46.1% vs 25.0%） and eccentric index （0.70 ± 0.22） vs （0.30 ± 0.24）， all P＜0.01；the external elastic membrane area was similar between SAP group and ACS group， P＞0.05. ③PAF levels were similar in fibrous， calcified and mixed plaques， P＞0.05； while they lower than that in soft plaque， P＜0.05.

Conclusion：①Serum PAF was involved in coronary plaque formation， unstable plaque usually had the higher PAF level. ②PAF level may provide a new reference for ACS diagnosis， treatment and prognosis.

（Chinese Circulation Journal， 2016，31：628.）

急性冠状动脉（冠脉）综合征（ACS）是严重类型的冠心病，可能导致不良心血管事件甚至死亡。冠脉粥样硬化斑块破裂和血栓形成是ACS的主要发病机制，而斑块不稳定是这些环节的始动因素［1、2］，血小板活化因子（PAF）是1972年Benveniste等［3］首先发现且作用最强的脂质介质，由磷脂酶A2和乙酰基转移酶共同作用于细胞膜甘油磷酸胆碱而生成的一种生物活性磷碱，目前发现PAF可促进血小板聚集，诱导血栓形成。血管内超声（IVUS）可以根据回声强弱来识别易损斑块和破裂斑块，并可以对其进行定性分析和定量测定［4］，因此成为“高危病变”冠脉的主要检测手段。本研究通过酶联免疫吸附法（ELISA）检测不同冠心病类型患者中的PAF的浓度，并应用IVUS检测冠脉内粥样斑块的特征，观察血清PAF浓度与粥样斑块超声显像特征的关系，寻找与ACS斑块稳定性的相关因子，探讨血清PAF浓度在ACS中的作用及可能机制。

1 资料与方法

病例选择与分组：入选2013-01至2013-12间在胜利油田中心医院心内科住院的并行冠脉造影术者138例，其中男70 例（ 50.7%），年龄42～75 岁，平均年龄（57 ± 10） 岁。依据冠心病的诊断标准［5］，将138例患者分为三组：对照组（n=33）：入选标准：有类似心绞痛症状，但发作时心电图正常，血清肌酸激酶同工酶及肌钙蛋白T 水平正常，且都行冠脉造影示血管正常或者血管病变狭窄＜50%排除冠心病诊断。急性冠脉综合征组（n=65）：入选标准： 典型心绞痛症状； 发作时心电图ST 段暂时性压低＞ 1 mm或抬高＞ 3 mm，缓解后迅速恢复正常或接近正常；心肌酶正常； 距末次发作24 h 以内； 排除心肌梗死后心绞痛、瓣膜病、肥厚性心肌病、贫血等；或持续胸痛30 min 以上； 至少相邻两个导联ST 段抬高超过0.2 mV； 血清肌酸激酶同工酶及肌钙蛋白T 水平升高超过正常值水平上限2 倍以上。稳定性心绞痛（SAP）组（ n=40）：入选标准： 劳累性心绞痛，发作性质在2 个月内无改变或运动试验阳性。所有患者均接受心电图、胸部X 线、超声心动图、肝肾功能等检查。排除瓣膜性心脏病、心肌病、恶性肿瘤、急慢性感染性疾病、严重肝肾功能不全等疾病。完善吸烟史、饮酒史、高血压病史等相关信息。所有受试者未曾服用影响血清PAF 浓度的药物。

冠脉造影和血管内超声检查：对138例患者采用飞利浦FD-10心血管数字减影机（荷兰飞利浦公司），进行冠脉造影检查以明确患者病变血管支数、血管病变部位的狭窄程度。 对ACS组和SAP组患者病变冠脉血管直径减少≥50 %的（由2名以上有经验的副主任医师分析完成），采用血管内超声仪（美国Boston Scientific 公司，CLEARV IEW 型超声仪）对上述血管病变部位最严重处进行的检查，以血管外膜回声为参照，根据斑块回声的强弱，对病变血管斑块性质判定［6］：⑴软斑块：高回声区或正常回声的斑块内有较弱的回声区或无回声区。⑵纤维性斑块：粥样硬化斑块的回声与血管外膜回声一致。（3）钙化性斑块：比血管外膜回声强并且后方有清楚的声影。（4）混合性斑块：具有以上几种斑块的回声特征。纤维性斑块、钙化性斑块和混合性斑块统称硬斑块。横截面积：总截面积［外弹力膜面积（EEL）］=管腔面积+斑块面积。面积狭窄率（%）为斑块面积/总截面积×100%。偏心指数为（EI）=斑块最小直径/斑块最大直径，其中＜0.5时为偏心性斑块。重构指数等于病变处血管横截面积/平均参考血管面积，正性重构时重构指数＞1，中性/负性重构时重构指数≤1。分析并记录斑块性质的判断、血栓形成的机率、正性重构、负性重构、无重构、病变处外弹力膜面积、病变处管腔面积、病变处斑块面积、偏心指数等。

ELISA 检测：138例患者于次日清晨空腹选择肘正中静脉采集静脉血5ml，采用ELISA 检测血清PAF浓度。（试剂盒为武汉伊莱瑞特生物科技有限公司产品）

结果计算 ： 应用Microsoft office、EXCEL2003，以OD值为纵坐标，以标准物的水平为横坐标，绘制出标准曲线，然后依据样品的OD值查出相应的血清PAF 浓度，即待测样品的实际浓度。

统计学分析：采用SPSS19.0统计学软件包进行数据分析，以±s表示计量资料，采用t检验。计数资料用χ2检验。各组间差异用单因素方差分析，两个率之间比较用卡方检验，多个率之间采用方差分析。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

三组患者一般资料的比较（表1）：ACS组、SAP组与对照组的吸烟、高血压、糖尿病、高脂血症差异有统计学意义（P＜ 0.05）。

表1 三组患者一般资料的比较［例（%）］

三组患者血清PAF浓度比较：与对照组患者血清PAF浓度［（ 6.77 ±0.48）μg/L］比较， SAP 组［（11.12±0.51） μg /L］和ACS组［（ 14.10 ±2.48） μg/L］均较高，差异有统计学意义（P＜0.05 ）； SAP组与ACS组间差异有统计学意义（P＜ 0.05）。

SAP组与ACS组患者冠脉病变处IVUS检查结果比较（表2）： SAP组患者冠脉病变以硬斑块［30例（75.0%）］为主，ACS组患者斑块以软斑块［44例（67.7%）］为主；ACS组患者斑块破裂、血栓形成发生率、正性重构的发生率和斑块偏心指数高均构高于SAP组，差异有统计学意义P＜0.05）； ACS组与SAP组相比，外弹力膜面积差异无统计学意义（P＞0.05）。

不同性质斑块中血清PAF 浓度比较（表3）：105例患者（仅是ACS组和SAP组）共有斑块 105 个 ，纤维性斑块（26个）、钙化性斑块（7个）、混合性斑块（18个 ）血清PAF浓度均低于软斑块（54个），差异有统计学意义（P＜0.05）；纤维性斑块与钙化性斑块、混合性斑块三者间血清PAF浓度差异无统计学（P＞0.05）；钙化性斑块与混合性斑块相比血清PAF浓度亦差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 两组患者冠脉病变处IVUS检查结果比较［例（%）］

表3 不同斑块性质血清PAF 浓度比较（±s）

表3 不同斑块性质血清PAF 浓度比较（±s）

注：PAF：血小板活化因子。与软斑块比较*P＜0.05

斑块性质　　斑块数目 （个）　　血清PAF （μ g/L）软斑块　54　14.26±0.47纤维性斑块　26　 11.28±0.36*钙化性斑块　7　 10.76±0.71*混合性斑块 　18　 10.52±0.51*

3 讨论

ACS指由于冠脉急性变化，血流突然减少，引起不稳定性心绞痛、急性心肌梗死或猝死。通过临床表现及辅助检查，确诊冠心病较易。但是冠心病的发病是多因素的复杂过程，目前冠心病的确切发病机制还未明确，当前有关动脉粥样硬化病变的发病理论与以往早期由Dargel等［7］、Rokitansky等［8］提出的建议有关。Dargel等［7］认为轻度的血管壁损伤可导致炎性浸润，继而增加动脉内膜的血浆成分转移和积聚。Rokitansky等［8］的观点则认为，在动脉发生损伤的部位存在附壁血栓或凝结物，它们借由平滑肌细胞进入而发生机化。1973年损伤反应学说逐步得到修改，日趋完善。“内皮细胞损伤反应学说”认为在危险因素的作用下，动脉内膜发生损伤，继而导致ACS的发生。损伤反应假说同样认为动脉粥样斑块的形成是动脉对内皮损伤的反应［9］。内皮损伤可使内膜的渗透屏障作用和内皮表面抗血栓形成的特性发生破坏，增加内膜的促凝血特性，产生释放血管活性因子、脂解酶和生长因子等的效应。从而引起严重的细胞间相互作用，并逐渐形成ACS病变。

PAF 是一种具有生物活性的内源性磷脂，具有多种潜在生物学作用，其化学本质为1-0-烷基-2-乙酰基- Sn-甘油-3-磷脂胆碱。PAF由中性粒细胞、血小板、肥大细胞、内皮细胞和巨噬细胞等分泌产生，当上述细胞受到炎性因子、免疫复合物、自由基等刺激时合成分泌。PAF 由乙酰水解酶（ PAFAH）降解，代谢产物为无生物活性的血清PAF 前体。研究发现，PAF 主要通过两方面参与粥样硬化过程。一方面，PAF 可以诱导血小板的活化，PAF 是迄今发现的体内最强的血小板活化刺激因子，可与分布在血小板质膜外侧表面的特异性受体PAF受体（PAF receptor）结合，从而通过G 蛋白介导的信号传导通路激活三磷酸鸟苷（GTP） 酶和磷酸肌醇特异性的磷脂酶C （ PLC），诱导血小板活化，使其在冠脉内黏附、聚集、释放炎性递质，通过炎性途径和免疫途径促进冠脉粥样硬化的发生、发展［10-12］。

本研究结果显示， ACS组患者血清PAF的浓度显著高于对照组和SAP组，提示血清PAF浓度与ACS的发生和发展密切相关，并在预测ACS的发生和发展中具有重要意义。急性心肌梗死在急性期和超急性期最危险，当随着时间的推移其危险性和死亡率下降，与其同时PAF的浓度逐渐降低，这与本研究ACS组的血清PAF浓度高于SAP组相符合。

IVUS即通过超声技术直观观察血管腔内情况，并能实时、直观观察腔内情况等优点。通过IVUS把冠脉血管壁及血管内斑块特点并作进一步的图像分析处理，通过对其图像的预处理，降低图像的复杂度，并使图像清晰，然后采用GVF-Snake算法测算血管腔的面积、血管厚度，并且可以识别早期冠脉粥样硬化斑块。可准确地显示冠脉管腔的大小和形态、管壁的解剖结构以及斑块的特征。使冠脉造影难以评价的图像，如偏心斑块等的诊断成为可能，IVUS的穿透特性提供了斑块的独特图像，而不止是管腔的变化［13］。本研究中通过血管内超声检测ACS组患者病变血管内斑块以软斑块为主，其中软斑块44例（67.7%），硬斑块21例（33.3%），而SAP组患者病变血管内以硬斑块为主，其中软斑块10例（25.0%）、硬斑块30例（75.0%）。与此同时我们检测了不同斑块的血清的PAF浓度，我们发现软斑块时PAF的浓度明显高于硬斑块时血清的PAF浓度。这说明，斑块越不稳定PAF浓度越高。

总之，血清PAF参与冠心病斑块的形成；斑块越不稳定， PAF浓度越高，其在ACS的发病中起重要作用，检测PAF的浓度有助于诊断和预测ACS的发生。血清PAF浓度可作为ACS相关因子为诊断ACS提供依据，为临床检测、预防和治疗ACS提供新的思路。

［1］ 张涛， 李自成. 冠心病易损斑块的研究进展. 临床心血管病杂志，2004， 08： 509-512.

［2］ 丁艳辉， 柳青. 冠状动脉粥样硬化性心脏病易感基因的研究进展.心血管病学进展， 2012， 01： 66-69.

［3］ Benveniste J. Platelet-activating factor （PAF-acether）： Present status. Agents Actions. 1981， 1： 542-544.

［4］ 杨跃进， 赵杰. 血管内超声和光学相干断层成像在冠状动脉介入治疗中的应用价值. 中国循环杂志， 2011， 06： 401-403.

［5］ 胡大一. 全国专科医师培训规划教材—心血管内科学. 北京： 人民卫生出版社， 2009， 28-336.

［6］ 刘传芬， 王伟民. 血管内超声在冠状动脉临界病变诊断和介入治疗中的应用. 中国循环杂志， 2011， 01： 15-18.

［7］ Dargel R. The lipid infiltration theory of atherosclerosis. Z Med Lab Diagn， 1989， 5： 251-255.

［8］ Rokitansky， Marinkovic N， Grskovic B， et al. C-reactive protein gene polymorphisms affect plasma CRP and honiocys-teine concentrations in subjects with and without angiographically confirmed coronary artery disease. Molecular Biology Reports， 2009， 4： 775-780.

［9］ Pasalić D， Marinković N， Grsković B， et al. C-reactive protein gene polymorphisms affect plasma CRP and honiocys-teine concentrations in subjects with and without angiographically confirmed coronary artery disease. Mol Biol Rep， 2009， 4： 775-780.

［10］ Reznichenko A， Korstanje R. The Role of Platelet-Activating Factor in Mesangial Pathophysiology. Am J Pathol ， 2015， 4： 888-896.

［11］ Denizot Y . Platelet-activating factor and acute myelogenous leukemia. Exp Hematol ， 2010， 6： 435.

［12］ Nitoda E， Moschos MM， Mavragani CP， et al. Ocular actions of platelet-activating factor： clinical implications. Expert Opin Ther Targets， 2012， 10： 1027-1039.

［13］ 冯瑞， 马康华. 血管内超声在冠状动脉临界病变诊断及治疗中的应用. 心血管病学进展. 2012， 33： 139-142.

（编辑；曹洪红）

Expression of Platelet Activating Factor and Its Correlation to the Property of Coronary Plaque in Patients With Coronary Artery Disease

FU Guang-xue.
Department of Cardiology， Shengli Oil Field Center Hospital， Dongying （257000）， Shandong， China

Coronary artery disease； Acute coronary syndrome； Echocardiography， interventional； Platelet activating factor

山东省医药卫生科技发展计划项目（2011HW075）

257000 山东省东营市，胜利油田中心医院 心血管内科

付光学 主治医师 硕士 主要从事心血管病介入研究 Email：fulei256400@163.com

R541

A

1000-3614（2016）07-0628-04

10.3969/j.issn.1000-3614.2016. 07.002

（ 2015-10-19）