实验室室间质评染色体检测水平效果分析*

陈　希，陈园园，牟　琴，杨　静，范　玲，张大勇，王治国，豆　虎，邹　琳，包黎明△

(1.重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心/重庆市儿科学重点实验室/儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室，重庆 400014；2.重庆医科大学附属儿童医院检验科，重庆 400014；3.国家卫生计生委临床检验中心，北京 100730)



实验室室间质评染色体检测水平效果分析*

陈希1，陈园园1，牟琴1，杨静1，范玲1，张大勇1，王治国3，豆虎2，邹琳1，包黎明1△

(1.重庆医科大学附属儿童医院临床分子医学中心/重庆市儿科学重点实验室/儿童发育疾病研究省部共建教育部重点实验室，重庆 400014；2.重庆医科大学附属儿童医院检验科，重庆 400014；3.国家卫生计生委临床检验中心，北京 100730)

目的分析参加美国病理学会(CAP)室间质评的能力比对检验(PT)后，染色体检测水平的变化。方法分析2011～2014参加CAP PT的结果，并根据CAP评审结果，得出该实验室细胞遗传学染色体质控测试的准确率，并通过分析该实验室参加CAP前后的染色体条带水平、异常检出率及染色体检测失败率，评估CAP室间质评项目对提高该实验室染色体检测水平的作用。结果2011～2014年该实验室参加CAP PT测试10次，共分析病例59例，判断染色体核型正确率为100%，核型描述正确率为95.1%。该实验室临床病例染色体检测结果显示：外周血染色体的异常检出率为18.9%，骨髓染色体的异常检出率为25.9%，初诊白血病异常率为66.8%；外周血染色体及骨髓染色体检测的失败率分别为0.5%、5.0%；参加CAP后，外周血及骨髓染色体检测失败率均下降，染色体条带平均水平均提高，与参加CAP前比较差异均有统计学意义(P<0.01)。结论参加高水平的室间质评项目可以提高细胞遗传学染色体检测的临床分析水平。

细胞遗传学；室间质评；能力比对检验

采用临床细胞遗传学方法检测与疾病有关的染色体数目及结构改变，对遗传性疾病和肿瘤的诊治起着重要作用[1]。染色体检查所涉及的标本种类多，包括外周血、骨髓、淋巴结、实体肿瘤、产前标本等，检测过程中手工操作较多、时间长、易受多种因素影响[2]。目前尚无全国性的细胞遗传学检测指导标准[3-4]，各实验室水平参差不齐，在染色体显色条带水平、细胞分析个数、审核流程及报告模式等方面不统一[5]。部分实验室进行了区域性的室间结果比对，但是范围小，且缺乏统一标准及权威性[6]。为了更好地监测染色体检查水平，提高质量，本实验室于2011年起参加了美国病理学家学会(College of American Pathologists，CAP)主办的细胞遗传学的室间质控能力比对检验(proficiency test，PT)项目。

1　材料与方法

1.1标本来源(1)CAP室间质控病例：通过CAP网站(www.cap.org)申请参加PT项目，每年收到3次测试材料，每次测试有5～8例病例，病例标本种类包括肿瘤、外周血、产前组织等表本，每例病例一般含有5张细胞中期分裂图像和简要的病史资料。(2)临床病例：本实验室至今已完成的临床染色体检测15 579例，其中外周血染色体检测13 003例，病例主要来自于重庆医科大学附属儿童医院儿童保健门诊、遗传门诊、内分泌门诊、泌尿外科门诊和住院部就诊的疑似智力低下、发育障碍、出生缺陷及智力低下合并出生缺陷的儿童；骨髓染色体检测2 576例，病例来自于重庆医科大学附属儿童医院血液科的血液系统疾病患儿，包括白血病、血小板减少性紫癜(idiopathic trombocytopenic purpura，ITP)、贫血及白血病复查病例。

1.2方法

1.2.1CAP室间质控按照CAP的要求分析染色体核型，采用人类细胞遗传学国际命名体系(International System for Chromosome Nomenclature，ISCN)描述核型，分析条带要求在400以上，最后结果以实际观察到的最高分别率为准，在规定的时间内(1个月)在CAP网站上报结果。CAP PT结果从两个方面进行判断：(1)染色体核型判断，主要考核实验室发现异常染色体的能力；(2)核型描述，主要考核实验室正确描述核型的能力。CAP有时还会有一些不计入评分的内容和调查问卷，主要是了解行业中开展新项目、新技术的状况。评分项目需要80%实验室回答正确才能成立，每次结果都附有对每个检测病例的分析说明。

1.2.2临床质控评估方法为了满足CAP要求，本实验室完善了标本在检验前中后的室内质控：(1)引进了计算机数字核型分析系统，使分析更简便直观；(2)建立高分辨染色体制备方法，在恒温恒湿干燥箱内制片，染色体条带水平有较大提升；(3)骨髓染色体采用多种方法培养，降低培养失败率；(4)病例采取两人共同分析，双审核，降低分析失误率。本实验室以条带水平评估染色体技术质量，每月随机抽取骨髓及外周血染色体病例各10例，根据英国室间质控计划(条带评估指南)评估染色体条带水平[7-8]；定期统计骨髓及外周血染色体的异常检出率及失败率。

2　结　　果

2.1CAP能力测试2011～2014年共参加10次CAP能力测试，分析59例病例，标本类型以外周血、骨髓及产前组织标本为主，见表1。共54例返回评审结果，本实验室上交的54例染色体核型分析结果全部正确，正确率为100%，核型描述正确率为92.6%(50/54)。3例核型描述与标准答案不一致，其中1例上报核型为 46,X,i(X)(q10)[2]/45,X[3]，CAP判定为45,X[3]/46,X,i(X)(q10)[2]，ISCN规定异常细胞株按数目由多至少排列；另2例由于描述位点未达到所提供染色体的最高分辨率而不被接受，上报核型分别为46,XX,t(11;22)(q23;q11.2)、 45,XX,t(3;3)(q21;q26),-7[5]，CAP判定为46,XX,t(11;22)(q23.3;q11.2)、45,XX,t(3;3)(q21;q26.2),-7[5]。还有1例被认为可以接受，CAP判定为46,X,+der(4)t(4;11)(q12;q13.5)mat，本实验室上报核型为46,X,+der(4)t(4;11)(q13.2;q21),根据所提供的病史资料，该病例的4号异常染色体为母亲遗传所致。

2.2临床标本检测本实验室已完成15 252例临床病例的染色体检测，其中外周血染色体13 016例，异常检出率达18.9%(2 460/13 016)，以数目异常为主，占82.0%(2 017/2 460)，其次为结构异常，占18.0%(443/2 460)；骨髓染色体2 236例，异常检出率为25.9%(580/2 354)，数目异常占47.2%(274/580)，结构异常占52.8%(306/580)，初诊白血病病例异常率高达66.8%。

表1　　2011～2013年CAP室间质评标本及核型类型

2.3染色体检测水平提高本实验室2007～2013年染色体条带平均水平不断提升，见图1。2011～2013年骨髓及外周血条带水平较2007～2010年均提高，差异均有统计学意义(P<0.01)；骨髓染色体条带平均水平从每单倍体371条带提高到471条带，外周血条带平均水平从每单倍体403条带提高到515条带。外周血染色体及骨髓染色体检测失败率分别为0.5%(65/13 082)和5.0%(118/2 354)，保持在较低水平，在2011年参加CAP后染色体检测成功率明显上升，见图2。骨髓染色体检测失败率从2007～2010年的7.8%(70/899)降低至2011～2013年的3.8%(55/1 455)，外周血染色体检测失败率从2007～2010年的1.0%(64/6 324)下降至2011～2013年的0.03%(2/6 758)，差异均有统计学意义(P<0.01)。

图1　　2007～2013年染色体条带水平

图2　　2007～2013年染色体检测失败率

3　讨　　论

本实验调查结果显示，外周血染色体的异常检出率达18.9%，骨髓染色体的异常检出率为25.9%，均与国际报道水平相当[6]。2011～2013年骨髓及外周血条带水平较2007～2010年均提高，骨髓及外周血染色体检测失败率均下降，表明参加CAP后，加强实验室质量控制，使检测失败率有所降低。从以上本实验室的调查结果与经验来看，参加室间质评(如CAP PT)项目可以提高细胞遗传学染色体检测分析水平[8]，通过增加染色体条带分辨率，可发现染色体微小缺失及易位。本实验室染色体检查的质量指标(失败率及检出率)达到国际同类实验室的水平，这可能与本实验室不断改进方法，如建立高分辨染色体的检测技术，引进数字化核型分析系统，以及分析人员技术培训等密不可分。参加国际性PT项目存在标本递送、费用较贵等问题，有必要在中国开展国内细胞遗传学染色体室间质评项目，本实验室于2013年协助国家卫生和计划生育委员会临床检验中心开展全国医院临床实验室染色体核型分析质量调查评估活动，此次调查包括5例病例，每例含5张中期分裂象的图片，采用选择题的方式，有139家实验室参与，准确率均达95%以上。此次室间质评调查为今后开展全国细胞遗传学室间质评奠定了基础。

全国医院临床实验室染色体室间质量评价才刚起步，室间质评的组织形式还需进一步完善，评价的质控物要有一定的代表性和稳定性，评定的方法和标准可以参照CAP细胞遗传学PT的评定方法，通过室间质评活动可以提高细胞遗传学的检查质量，为遗传疾病及肿瘤诊治提供依据。笔者对今后室间质评工作提出了以下建议：(1)建立全国统一的细胞遗传学和分子荧光原位杂交的行业技术质量标准；(2)定期开展室间质控活动，监测实验室染色体检查水平；(3)开展培训班，提高从业人员业务水平；(4)把室间质评结果作为临床实验室认证的主要指标之一；(5)鼓励有条件的实验室参加国际室间质评。

[1]Hoeltge GA，Dewald G，Miles J，et al．Proficiency testing in clinical cytogenetics.The 1986 experience of the College of American Pathologists[J]．Arch Pathol Lab Med，1988，112(11)：1085-1090．

[2]Hoeltge GA，Dewald G，Palmer CG，et al．Proficiency testing in clinical cytogenetics.A 6-year experience with photographs,fixed cells,and fresh blood[J]．Arch Pathol Lab Med，1993，117(8)：776-779．

[3]翁炳焕，任宇珂，吕时铭，等．产前诊断中染色体核型分析的质量控制[J]．中华医院管理杂志，2008，24(3)：202-203．

[4]吕时铭．我国产前诊断技术发展与质量控制[J]．中华检验医学杂志，2010，33(2)：101-105．

[5]王薇，陈园园，陈希，等．我国产前染色体核型分析的室间质评调查结果分析[J]．中华医学遗传学杂志，2014，31(4)：483-486．

[6]Weng B,Li X．An external quality assessment scheme for prenatal detection of rare chromosomal abnormalities[J]．Clin Chim Acta，2012，413(21/22)：1721-1724．

[7]Held K，Eiben B，Miny P．The long-term effect of external qualityassessment on performance in service cytogenetics[J]．Cytogenet Cell Genet，2000，91(1/4)：124-127．

[8] Cooley LD，Mascarello JT，Hirsch B，et a1．Section E6.5 of the ACMG technical standards and guidelines: chromosome studies for solid tumor abnormalities[J]．Genet Med，2009，11(12)：890-897．

Assessment of effect of laboratory external quality assessment program on cytogenetic testing*

ChenXi1，ChenYuanyuan1，MuQin1，YangJing1，FanLing1，ZhangDayong1，WangZhiguo3，DouHu1，ZouLin1，BaoLiming1△

(1.CenterforClinicalMolecularMedicine,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity/KeyLaboratoryofPediatricsinChongqing/MinistryofEducationKeyLaboratoryofChildDevelopmentandDisorders,Chongqing400014,China；2.DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedChildren′sHospitalofChongqingMedicalUniversity,Chongqing400014；3.CenterforClinicalLaboratoriesofNationalHealthandFamilyPlanningCommission,Beijing100730,China)

ObjectiveTo analyze the change of chromosome test level after participating in the inter-laboratory proficiency test(PT) program of the College of American Pathologists(CAP).MethodsThe results for participating in CAP PT during 2011-2014 were analyzed,the accuracy of the cytogenetic chromosome quality control test in this laboratory was obtained according to the CAP evaluation results,and the effect of CAP external quality assessment item on increasing the chromosome detection level in this laboratory was evaluated by analyzing the chromosome band levels before and after participating in CAP.ResultsThis laboratory participated in CAP PT test for 10 times during 2011-2014,a total of 59 cases were analyzed,the accuracy rate for judging chromosome karyotype was 100%,the karyotype description accuracy rate was 95.1%.The chromosome test results of clinical cases in this laboratory displayed that peripheral blood chromosome abnormal detection rate was 18.9% and bone marrow chromosome abnormal detection rate was 25.9%,the abnormal rate of newly diagnosed leukemia was 66.8%; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome were 0.5% and 5.0% respectively; the detection failure rates of peripheral blood chromosome and bone marrow chromosome after participating in CAP were decreased,the chromosome band average level was improved,showing statistical difference compared with those before participating in CAP(P<0.01).ConclusionParticipating in high quality external laboratory assessment item can increase the clinical analytic level of cytogenetic chromosome test.

cytogenetics；external quality assessment；proficiency test

重庆市卫生局课题资助项目(2012-2-100)。作者简介：陈希(1983-)，主管技师，硕士，主要从事血液病及遗传病研究。△

，E-mail:lbaogene@yahoo.com。

R394.2

A

1671-8348(2016)21-2917-03

2016-01-16

2016-04-03)

论著·临床研究doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2016.21.011