郁金散对大肠湿热证大鼠血流变和血常规的影响

王福男（甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070）

郁金散对大肠湿热证大鼠血流变和血常规的影响

王福男
（甘肃农业大学动物医学院，甘肃 兰州 730070）

目的：探讨不同剂量的郁金散对大肠湿热证大鼠血流变和血常规的影响，为临床应用提供依据。方法：将60只Wistar大鼠随机分为6组：正常对照组（A组）、模型组（B组）、自愈组（C组）、高剂量治疗组（D组）、中剂量治疗组（E组）、低剂量治疗组（F组），每组10只，实验采用“高糖高脂饮食+高温高湿环境+生物因子”综合因素造模，造模后给予不同剂量的郁金散进行治疗，观察治疗前后大鼠的一般行为学并测定血液流变学和血常规的相关指标。结果：（1）造模后大鼠表现大便溏或有粘液，被毛泛黄，体温升高，食欲减退等，符合大肠湿热证所表现的症状；（2）与A组比较，B组的全血高、低切黏度极显著高于A组（P＜0.01）；与B组相比，C、E、F组的的全血高、低切黏度显著低于B组（P＜0.05），D组的全血高、低切黏度极显著低于B组（P＜0.01）；（3）与A组比较，B组的红细胞数目、白细胞数目、中性粒细胞数目、红细胞压积以及血红蛋白浓度和A组的差异极显著（P＜0.01）；与B组比较，C、E、F组的这些指标均显著低于B组（P＜0.05），但D组的这些指标极显著低于B组（P＜0.01）。结论：各剂量的郁金散对大鼠大肠湿热证均有治疗效果，其中高剂量效果最好。

郁金散；大肠湿热证；血流变；血常规

郁金散出自《元亨疗马集》，是治疗马的湿热泄泻的著名方剂，其主要功能为清热解毒，涩肠止泻。方中郁金清热凉血，行气散瘀，为主药；黄连、黄芩、黄柏、栀子清三焦郁火兼化湿热，为辅药；白芍、诃子敛阴涩肠而止泻，更以大黄清血热、下积滞，共为佐药［1］。现代药理学研究发现，郁金散方剂中的郁金能降低红细胞的聚集性，提高红细胞的变形能力以及减少自由基对红细胞膜的损伤，延长其寿命，维持正常的血液黏度［2］。本文就郁金散对大肠湿热证大鼠的作用进行研究，为临床应用提供科学依据。

中医湿热证以脾胃湿热证为主，因为脾胃位于中焦，脾为湿脏，胃为燥腑，容易滋生湿热之邪。薛生白云：“中气实则病在阳明，中气虚则病在太阴，太阴内伤，湿饮停聚，客邪再至，内外相引，故病湿热，此皆先有内伤，再感客邪［3］”。脾胃湿热下注大肠则成为大肠湿热证。《内经》云：“暴注下迫，皆属于热”。湿热蕴结，困扰脾土，脾失健运，运化失常，则清浊不分，水谷混杂而下，并走大肠则成大肠湿热证泄泻。大肠湿热证的病机有外感暑湿邪气，或因饮食不节［4］。大肠湿热证以发热、大便溏而不爽或有粘液等为必备主要临床症状。

王新华［5］在模拟长夏气候因素，饮食不节、过食肥甘基础上再施以大肠杆菌内毒素，复制成温病湿热模型。本次试验以“高糖高脂饮食加高温高湿环境加大肠杆菌刺激”建立大肠湿热证大鼠模型，用高糖高脂饮食使得大鼠饮食不节，过食肥甘，损伤脾胃，脾伤则运化水湿功能失常和脾失健运；再人工创造湿热环境，模拟外感湿热病邪而形成湿热证［6］。造模完成后给予郁金散水煎剂进行干预，通过检测大鼠血常规以及血液流变学各项指标来为探讨郁金散对大肠湿热证的作用机理作铺垫。

1　材料与方法

1.1 实验动物

Wistar大鼠60只，雌雄各半，体重180～220 g，由兰州大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（甘）2013-0002。适应环境3 d后进行实验。实验室温度为22～25 ℃，相对湿度45 %～65 %，昼夜12/12 h明暗交替。

1.2 实验药物

郁金散水煎剂：郁金36 g，诃子18 g，黄芩36 g，大黄72 g，黄连36 g，栀子36 g，白芍18 g（比例按照文献［1］）。中药经三次水煎煮后合并三次滤液，低温浓缩至1.04 g/mL，即浓缩成277 mL，郁金散高、中、低灌胃分别以200 %、100 %、50 %郁金散药液。高剂量组给药1.04 g/100 g，中剂量组给药0.52 g/100 g，低剂量组给药0.26 g/100 g。

1.3 大肠杆菌

大肠杆菌菌号为O101。

1.4 试剂

水合氯醛（上海展云化工有限公司，批号1402207）、氯化钠（国药集团化学试剂有限公司，批号20150410）、牛肉膏（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号20131018）、营养琼脂（青岛高科园海博生物技术有限公司，批号20140807）、蛋白胨（北京奥博星生物技术有限责任公司，批号20140318）

1.5 仪器

TDZ4-WS低速离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）；旋转蒸发器RE-6000（上海亚荣生化仪器厂）；LBY-N6A型RHEOMETER全自动血液流变仪（北京普利生公司）；

全自动血液细胞分析仪BC-5300Vet（深圳迈瑞生物医疗电子股份有限公司）。

1.6 实验动物分组及处理

将60只Wistar大鼠随机分为正常对照组（A组）、大肠湿热证模型组（B组）、自愈组（C组）、郁金散高剂量治疗组（D组）、郁金散中剂量治疗组（E组）和低剂量治疗组（F组）6组，每组10只。造模需18 d，实验共用23 d。造模过程如下：（1）A组自然环境下饲养。（2）B组：高糖高脂饲养10 d（隔天禁食，隔天给予充足饲料并灌胃猪油4 mL/200 g，30 %蜂蜜水自由饮水）。然后将大鼠置于高温高湿环境中（温度32～35 ℃，相对湿度85～95 %），持续9 h，灌酒1 mL/100 g（56度红星二锅头），连续5 d。最后腹腔注射大肠杆菌（0.2 mL/100 g），24 h后再注射一次，自然环境下饲养1 d后处死，腹腔注射10%水合氯醛麻醉大鼠，腹主动脉采血，分别用EDTA-K2采血管和肝素钠抗凝管采集血液。（3）高中低剂量的郁金散治疗组造模结束后灌胃相应剂量的郁金散，自愈组灌胃相应体积的生理盐水，5 d后处死，处死及采血方法同模型组。

1.7 观测指标及方法

1.7.1 一般行为学观察

观察大鼠的一般行为学，包括肛温，精神活动，饮水量，采食量，尿量以及粪便等。

1.7.2 血黏度检测

取腹主动脉血2 mL，肝素抗凝，用全自动血液流变仪进行血液流变学测定，主要包括全血低切黏度和高切黏度。

1.7.3 血常规检查

用全自动血液细胞分析仪进行血常规检测，主要包括红细胞数目、白细胞数目、中性粒细胞数目、红细胞压积、血红蛋白浓度。

1.8 统计分析

2　结果与分析

2.1 大鼠行为学观察

A组：大鼠活跃，毛发有光泽，食欲良好，饮水量，尿量以及肛温正常。

B组：高糖高脂时期大鼠活跃，体重增长较快，饮食饮水量正常，粪便成形，较A组稍软，高温高湿时期大鼠精神不振，食欲减退，被毛泛黄，攻毒期间大鼠眼睛半闭并有分泌物，身体蜷缩，肛周红肿肛门松弛，肛门周围及尾部粘有黄色粘液稀便，大便味臭，肛温较A组升高。

C组：造模前症状同B组，造模后肛温继续上升，高于A组，体重开始下降后逐渐上升。尿量，饮水量减少，采食量开始减少后逐渐增加，仍有大鼠拉稀。

D、E、F组：用药前症状同B组，用药后大鼠体重有所增加，但未达到高糖高脂时期体重，采食量，饮水量和尿量增加。D组大鼠肛温开始下降接近A组，粪便较A组稍软，大鼠精神有所好转。E组大鼠肛温先继续上升，用药两天后开始下降接近A组，F组大鼠肛温开始上升，但用药两天后开始下降，但高于A组。仍有大鼠拉稀软粪便。

2.2 血液流变学指标检测结果

由表1可见，与A组相比，B组的全血低切和高切黏度都极显著高于A组（P＜0.01），表明大肠湿热证模型组的血液粘稠度高于正常对照组，说明模型复制成功。与B组相比，D组的全血低切和高切黏度极显著低于B组（P＜0.01），C、E、F组的全血高、低切黏度显著低于B组（P＜0.05），表明该模型有一定的自愈能力，且高剂量的郁金散治疗效果最好。

表1 造模后各组大鼠血黏度的比较（±s，n=10）

表1 造模后各组大鼠血黏度的比较（±s，n=10）

注：与A组相比，bP ＜0.01；与B组相比，cP＜0.05，aP＜0.01

项目（m P a · s）　A组　B组　C组　D组　E组　F组全血低切黏度　1 0 . 7 2 ± 0 . 7 2a　1 5 . 3 4 ± 0 . 3 5b　1 3 . 4 7 ± 0 . 3 5c　1 0 . 9 2 ± 0 . 2 5a　1 2 . 2 1 ± 0 . 3 5c　1 3 . 4 7 ± 0 . 2 6c全血高切黏度 　3 . 5 9 ± 0 . 2 0a　4 . 6 5 ± 0 . 1 8b　4 . 1 6 ± 0 . 2 6c　3 . 3 5 ± 0 . 0 3a　4 . 0 7 ± 0 . 2 6c　4 . 1 0 ± 0 . 3 1c

2.3 血常规测定结果

由表2可知，与A组相比，B组的红细胞数、白细胞数、红细胞压积、中性粒细胞数和血红蛋白浓度极显著高于A组（P＜0.01），与B组相比，C、E、F组的红细胞数、白细胞数、红细胞压积、中性粒细胞数和血红蛋白浓度显著低于B组（P＜0.05），D组的红细胞数、白细胞数、红细胞压积、中性粒细胞数和血红蛋白浓度极显著低于B组。结果表明了该模型具有一定的自愈能力，三种不同剂量的郁金散对该模型均有治疗效果，其中经高剂量治疗后大鼠的恢复程度较好。

表2 造模后各组大鼠血常规的比较（±s，n=10）

表2 造模后各组大鼠血常规的比较（±s，n=10）

注：与A组相比，bP＜0.01；与B组相比，cP＜0.05，aP＜0.01

项目　A组　B组　C组　D组　E组　F组红细胞数/ × 1 012· L-1　6 . 6 2 ± 0 . 2 8a　1 3 . 9 2 ± 0 . 3 9b　1 1 . 4 8 ± 0 . 3 5c　6 . 6 7 ± 0 . 6 3a　8 . 4 4 ± 0 . 3 4d　9 . 4 9 ± 0 . 3 5e白细胞数/ × 1 09· L-1　1 3 . 9 9 ± 0 . 5 5a　3 7 . 2 1 ± 3 . 7 7b　2 4 . 1 6 ± 2 . 1 5c　1 4 . 7 4 ± 0 . 8 8a　1 7 . 8 5 ± 1 . 1 4d　2 2 . 1 4 ± 2 . 2 6c红细胞压积/% 　3 8 . 5 5 ± 4 . 4 2a　7 1 . 3 1 ± 5 . 0 1b　5 5 . 1 4 ± 2 . 6 1c　4 0 . 5 1 ± 2 . 1 3a　4 4 . 0 0 ± 3 . 2 9d　5 1 . 0 6 ± 2 . 9 6e中性粒细胞数/ × 1 09· L-1　5 . 0 8 ± 0 . 4 4a　1 7 . 3 0 ± 1 . 9 1b　1 1 . 0 1 ± 0 . 5 6c　6 . 1 2 ± 0 . 4 6a　8 . 2 8 ± 0 . 4 9d　1 0 . 2 6 ± 1 . 4 7c血红蛋白浓度/ g · L-1　1 3 8 . 6 3 ± 1 2 . 6 5a　2 5 9 . 8 8 ± 1 6 . 4 7b　1 7 8 . 7 5 ± 3 1 . 5 4c　1 4 9 . 1 3 ± 4 . 0 5a　1 6 4 . 5 0 ± 1 1 . 1 0cd　1 7 2 . 0 0 ± 1 4 . 9 7c

3　讨论

3.1 大鼠大肠湿热证模型的建立

本实验采用“高糖高脂饮食+高温高湿环境+生物因子”综合因素造模，造模后大鼠都有不同程度的拉稀，精神沉郁，食欲减退，嗜卧，被毛泛黄粗乱，肛周红肿，肛门周围粘有稀便，味臭。大肠湿热证以发热，大便溏而不爽或有粘液，粪便色黄而臭等为必备主要临床症状。因此一般症状符合大肠湿热证的症状，造模基本成功。对实验大鼠给予高糖高脂饮食，一方面可以使大鼠在短期内增加体质量，另一方面长期给予高糖高脂饮食，可造成大鼠脾胃功能损伤，为脾胃湿热提供了前提条件［7］。外部湿热可以造成脾胃功能失调，张六通等［8］模拟自然发病环境，通过控制气候箱的温湿度来研究外湿致病机理，结果湿热组出现纳呆少饮，消瘦，大便不成形或稀便等症状。所以模拟湿热环境是大肠湿热证动物模型的一个关键因素。

3.2 郁金散对大肠湿热证大鼠血流变的影响

郁金散方剂中郁金具有调节免疫功能，抑制中枢神经，改善血液流变性，抗自由基损伤等作用［9］。黄连、黄柏和黄芩这三味药都可以广泛用于多种湿热病，其中黄连主要作用在肠胃，尤其是大肠湿热的湿性痢疾，所以黄连为中兽医治疗湿性痢疾的首选药。栀子用于火毒炽盛，三焦俱热配伍三黄。段文卓等［10］通过红细胞的聚集性实验，发现郁金可以提高红细胞的变形能力及抗氧化、免疫粘附能力减少了自由基对红细胞模的损伤，延长其寿命，维持正常的血液黏度。

本次实验发现模型组的全血高低切粘度均高于正常对照组，血液黏滞性增加明显，提示其红细胞变形能力下降，红细胞聚集性增加及血液粘稠度增大，这符合中医“血淤”征候所体现的血液“浓、黏、聚”的特点。中医理论认为湿为阴邪，易阻碍气机，气机不利血运不畅极易致瘀；热为阳邪，其性炎上，煎熬津液，阻塞经脉也易致血瘀。大量研究表明湿热证与血流变有密切的联系［11］。经治疗后，各剂量的郁金散均有一定的治疗效果，其中高剂量组的全血高低切粘度和正常对照组无显著性差异。说明高剂量的郁金散对大肠湿热证血液流变学指标有明显的调节作用。

3.3 郁金散对大肠湿热证大鼠血常规的影响

实验结果表明模型组大鼠的白细胞数和中性粒细胞数相比正常对照组数量极剧增多，刘光华等发现湿证动物模型可表现为免疫功能的下降，炎症与湿热证本质有关［12］。此外，模型组大鼠的红细胞压积和血红蛋白浓度也明显高于正常对照组，提示了造模后大鼠的红细胞聚集性增加，郁金散方剂中郁金的作用机制是将红细胞压积明显降低，发挥出解聚红细胞聚集的作用［13］。与模型组相比，经郁金散治疗后，不同剂量组大鼠的血常规指标均有所恢复，其中高剂量治疗组的血常规这些指标与正常对照组组差异不显著，因此说明高剂量的郁金散对大肠湿热证血常规指标有明显的调节作用。

4　结语

本实验通过“高糖高脂饮食+高温高湿环境+生物因子”综合因素复制大肠湿热证模型，造模后并给予不同剂量郁金散进行治疗。通过郁金散对血流变学和血常规指标的改善说明了郁金散对大肠湿热证可能具有一定的治疗作用，其中高剂量的郁金散的治疗效果较好。另外，该模型具有一定的恢复能力，但是恢复能力不如郁金散治疗组。

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（编辑：晏兵兵）

S858

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1006-799X（2016）13-0090-04