地方养殖场猪大肠杆菌病的发病情况与耐药性检测分析

林振华（山东恒信检测技术开发中心，山东 济南 250000）

地方养殖场猪大肠杆菌病的发病情况与耐药性检测分析

林振华
（山东恒信检测技术开发中心，山东 济南 250000）

目的：分析地方养殖场猪大肠杆菌病的发病情况与耐药性检测。方法：采集我县126多个养殖场患有仔猪直肠拭子、肠内容物、肠系膜淋巴结等疾病的猪样品，对他们进行菌株分离、血清型鉴定和耐药性实验检测，然后对研究资料进行整理归纳。结果：从样品中分离出102株致病性大肠杆菌；通过药敏试验表明，对大肠杆菌致病菌株敏感度最高的有头孢三嗪氟苯尼考、头孢西丁、先锋霉素V和丁胺卡那等9种抗生素，而对青霉素、利福平、阿莫西林、强力霉素等药物的耐药性菌株比例均大于60.7%。结论：为了降低细菌对抗生素产生耐药性，在猪大肠杆菌病临床上交替使用高敏抗生素，增强抗生素疗效。

猪大肠杆菌病；发病情况；耐药性检测分析

在养殖场中，大肠杆菌病是危害严重的常见病和多发病，其发病率和死亡率位于仔猪疫病之首。如果大肠杆菌病情况出现，含有细菌的粪便排泄物被其它同窝猪只食入经消化道感染，就会直接让同圈的猪暴发大肠杆菌病，具有传染性。而目前的治疗方式主要通过抗生素进行治疗，但是近年来，但是大肠杆菌极易产生耐药性，加上抗生素大量的滥用，从而导致细菌产生严重的耐药性，需要加大剂量才能使得抗生素对病菌产生作用，使得治疗成本增多，加重养殖负担。为了能更加有效的进行治疗和预防，节约养殖场成本，合理利用抗生素，通过耐药性检测实验分析，探讨猪大肠杆菌病治疗与预防的几点措施，现报告如下。

1　资料与方法

1.1 一般资料

采集我县126多个养殖场患有仔猪直肠拭子、肠内容物、肠系膜淋巴结等疾病的猪样品作为实验研究对象，通过对大肠杆菌病死仔猪心、肝、脾、肛门等部位还有可疑病猪的直肠内容物等病料进行大肠杆菌分离实验，并对实验做出分析和总结［1］。

1.2 方法

1.2.1 菌株分离和鉴定法

首先，使用灭菌棉从126例有猪大肠杆菌病中取白痢仔猪病例直肠内粪便或者是死亡仔猪肠内容物。其次，接种于麦康凯培养基上，在37摄氏度的温度下培养18至24个小时后，取粉红色可疑菌落接种于伊红美兰培养基，再次放于37摄氏度的温度下培养18至24个小时，挑取紫黑色带金属光泽可疑菌落进行革兰氏染色进行镜检。最后，将其培养特性、形态和革兰氏染色反应均符合大肠杆菌特征的菌株，采用普通营养琼脂纯化作，再进一步生化鉴定。

1.2.2 生化试验法

首先，将已经分离纯化的菌株采用微量生化反应管进行生化反应试验。其次，取待检菌纯培养物分别接种在乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇、鸟氨酸、赖氨酸、尿素酶、枸橼酸盐、半固体琼脂培养基上，37摄氏度恒温培养18至24个小时，然后观结果。最后，再将待检菌纯培养物少量接种于葡萄糖蛋白胨水生化管中，37摄氏度恒温培养24至48小时后进行甲基红试验、VP试验和吲哚试验［2］。

1.2.3 药敏试验法

首先，挑取以鉴定好的猪源致病性大肠杆菌，将其均匀密集划线于营养琼脂平板上。然后，用灭菌的镊子取各种药敏纸片按每两个纸片中心距离不少于25 mm分别贴于培养基表面，纸片一旦贴在某一位置上，在37摄氏度恒温下培养24个小时。

2　结果

2.1 菌株分离和鉴定法结果分析

经过观察试验，发现病料接种于营养琼脂平板经培养后可见有菌落长出，具体的调整为：圆形、凸起、光滑、湿润、直径为1～3 mm边缘和不规则半透明；将菌落再接种于麦康凯琼脂平板培养后，长出圆形、光滑、湿润、直径2至3 mm的砖红色菌落；最后，挑取紫黑色带金属光泽可疑菌落接种于营养琼脂平板，通过镜检可发现镜检紫红色、着色均匀、单个或成对的无荚膜、无芽孢、两端钝圆的短杆菌，有101株疑似菌株符合猪大肠杆菌形态特征。

表1 关于86株生化实验结果表

2.2 生化试验法结果分析

对101株分离菌进行了16项生化试验，发现有86株病原菌符合大肠杆菌生化特性，详见表1。注（+为阳性，-为阴性）

2.3 耐药性结果分析

经过试验分析，发现有99株猪源致病性大肠杆菌对20种受试药物表现不同程度的耐药性，其中对磺胺类四环素类大环内酯类及青霉素类的药物耐药性强，耐药率高达73.2%以上。

3　讨论

能及时快速的对猪大肠杆菌病的判断非常重要，事关到养殖场安全问题，危急到猪等健康和生命安全都应该给予重视的。通过本研究通过病原菌分离观察、纯化培养和镜检以及生化试验，结果表明了解病原特点对及时有效地制定防治方案对养殖场而言是非常有帮助的。本次研究中，疑似猪大肠杆菌病病料126份中有86份符合大肠杆菌特性，并通过生化实验检测大肠杆菌的抗原类型主要由O、K、H抗原组成的，大部分是大肠杆菌的O抗原类群。

综上所述，为了能做到预防大肠杆菌传染给仔猪或者是其他的猪圈，要加强消毒措施，重视猪舍外部环境，保持猪舍通风、清洁、干燥，定期对猪圈进行消毒，提升他们的生存环境，控制它们的的发病情况。

［1］高敏，贾瑞志，仇天雷，等.集约化养鸡场空气环境中生物气溶胶特点研究［J］.农业环境科学学报，2015，（04）.

［2］段俊秀.鸡大肠杆菌的分离鉴定及耐药性试验［J］.中国畜牧业，2015，（05）.

（编辑：晏兵兵）

S858.28

A

1006-799X（2016）13-0085-02