鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析

陈巨清/石家庄市牧工商 杨振燕/河北蔚县农牧局

鸡群细菌分离鉴定及药敏试验案例分析

陈巨清/石家庄市牧工商 杨振燕/河北蔚县农牧局

大肠杆菌病和沙门氏菌病，是目前危害养鸡业最常见的细菌性疫病。大肠杆菌和沙门氏菌混合感染是目前禽病流行中的主要趋势，一旦感染死亡率较高，从而引起更为严重的经济损失。两种细菌血清型种类较多，不同地区差别较大，不同菌株之间不产生交叉保护作用，极易产生耐药性。本文针对山东省某一养殖户发病鸡群，根据临床症状和剖检病变初步诊断为大肠杆菌和沙门氏菌感染，为了进一步确诊送检病料至实验室检测。

一、材料与方法

（一）材料

1.病料来源。山东某养殖户鸡群23日龄，出现死淘增加，日死淘1‰～2‰，鸡群有部分鸡出现羽毛蓬松，精神不振，拉白色稀粪。剖检死鸡80%以上出现心包炎、肝周炎，肠黏膜脱落，其它无明显病变。初步诊断为大肠杆菌、沙门氏菌感染，取四只死鸡送至实验室进行检测。

2.材料。麦康凯培养基，自制药敏片，解剖刀，解剖剪，镊子，显微镜，细菌生化反应管，37℃温箱。

（二）方法

1.细菌分离培养。将送检的4只死鸡进行剖检，取肝脏无菌接种到麦康凯培养基上，经过37℃培养24 h。

2.细菌形态学观察。取在麦康凯培养基上培养24 h可疑菌落，抹片，进行革兰氏染色镜检。

3.生化试验。挑取疑似大肠杆菌和沙门氏菌菌落经过纯化培养后，用细菌生化反应管进行生化鉴定。

4.药敏试验。将10%氨苄西林钠、5%恩诺沙星、5%阿莫西林、10%强力霉素、10%氟苯尼考、10%粘杆菌素、硫酸头孢噻呋钠、10%林可霉素8种抗生素制成药敏片，将被检细菌涂布接种于普通琼脂平板上，间隔一定距离贴上各种药敏片，于37℃温箱培养24 h，结果判断依据《纸片法抗菌药物敏感试验操作标准（第四版）》进行。

二、结果

（一）细菌分离培养

麦康凯培养基上1#、2#、3#、4#均长出米粒大小，桃红色菌落及淡橘黄色菌落（见图1）。

（二）细菌形态学观察

挑取可疑菌落革兰氏染色，400倍镜检，可见G-中等杆菌，疑似大肠杆菌（见图2），G-短杆菌，疑似沙门氏菌（见图3）。

图1 麦康凯培养菌落

图2 G-中等杆菌

图3 G-短杆菌

（三）生化试验

1.挑取疑似大肠杆菌的细菌分别做枸橼酸盐试验、靛基质试验、MR试验、VP试等生化试验，均符合大肠杆菌的生化特性（见表1）。

表1鉴定疑似大肠杆菌生化试验结果

2.挑取疑似沙门氏杆菌的细菌分别做色氨酸肉汤、赖氨酸、氨基酸对照、尿素、氰化钾、氰化钾对照、山梨醇、甘露醇、水杨苷、丙二酸盐、ONPG等生化试验，均符合沙门氏杆菌的生化特性（见表2）。

（四）药敏试验

药敏试验表明：分离出的大肠杆菌、沙门氏菌对恩诺沙星、头孢噻呋敏感，对氨苄西林钠、粘杆菌素中敏，其它低敏或耐药。

见表3，表4。

表2疑似沙门氏杆菌的生化试验结果

三、方案制定及效果

方案：10%氨苄西林钠1 g兑水1.5 L水，配合10%粘杆菌素1 g兑水1.5 L水，连用四天。

效果：连用四天后，粪便明显好转（见图4，图5），死淘也有所下降（表5），治疗结果明显。

图4 用药前拉稀粪料粪

图5 用药后粪便正常

表3 药敏试验结果

表4 判定标准

表5 用药前后死淘情况

四、讨论

1.随着养殖设备的更新换代，饲养技术的提高，饲养密度也越来越大，这对鸡舍环境和生物安全要求越来越高，否则鸡群极容易发生细菌感染，造成损失。

2.近年来，为了防治某些细菌感染，在饲料和治疗中常盲目使用一些抗菌药物，以致产生许多耐药菌株。大肠杆菌和沙门氏菌易产生对抗生素的耐受性，而且多重耐药现象严重。因此，有条件的应做药敏试验，根据药敏试验结果选择敏感药物。

3.从药敏试验结果可以看出该鸡群对很多药物产生耐药性，恩诺沙星敏感，但目前屠宰企业已将氟喹诺酮类列为禁用药，所以该病例不能使用恩诺沙星。头孢噻呋钠也是敏感药物，但是鸡群23日龄，使用成本较高，因此选择10%氨苄西林钠与10%粘杆菌素配伍使用。

4.10%氨苄西林钠与10%粘杆菌素配伍使用，从鸡只死淘情况以及粪便改善情况来看取得较好效果，10%氨苄西林钠与10%粘杆菌素在鸡上的休药期是7 d，不会造成药物残留，且成本不高。