辅酶Q10和维生素E配伍的稳定性和食用安全性研究

孙红梅，罗　蓉，李冬梅

(1 安利(中国)日用品有限公司，广州　510613； 2北京联合大学应用文理学院，北京　100191)



辅酶Q10和维生素E配伍的稳定性和食用安全性研究

孙红梅1，罗蓉1，李冬梅2

(1安利(中国)日用品有限公司，广州510613；2北京联合大学应用文理学院，北京100191)

摘要：目的：研究辅酶Q10和维生素E配伍的稳定性和食用安全性。方法：采用高效液相色谱法，对经过加速破坏的辅酶Q10和维生素E配伍的样品进行含量分析和安全性毒理学评价。结果：辅酶Q10和维生素E在24个月内未发生明显化学反应，辅料也未对其稳定性产生影响，毒理学试验未发现安全性问题。结论：辅酶Q10和维生素E配伍稳定，并且食用安全。

关键词：辅酶Q10；维生素E；稳定性；安全性

辅酶Q10(CoQ10)是一种脂溶性的类维生素物质，广泛存在于生物体细胞内，具有重要的生理功能活性。有研究表明，辅酶Q10具有增强免疫力、缓解体力疲劳和清除自由基等作用[1-3]，辅酶Q10和维生素E具有显著的提高机体免疫力和缓解体力疲劳等功能[4-6]。本文主要研究了辅酶Q10维生素E配伍的稳定性和食用安全性。

1材料

1.1样品

受试样品由安利(中国)日用品有限公司提供，内容物为粘稠状红色液体的软胶囊，塑料瓶装，样品核准净含量0.414g/粒，60粒/瓶，以辅酶Q10和维生素E为原料，加入抗氧化剂迷迭香提取物、米糠油等经混和、包胶、干燥和包装等主要工艺加工制成软胶囊。人体推荐日服量为每天1粒。

1.2主要仪器与试剂

Waters2695-2487高效液相色谱仪、Agilent6890气相色谱仪、电子天平、恒温恒湿试剂箱、MEK-6318K全自动血球计数仪、SELECTRA-E全自动生化分析仪、离心机、切片机、全自动脱水机、包埋机、手术器械。

CoQ10对照品，中国药品生物制品检定所；维生素E(d-α-生育酚)对照品，SAGMA公司；乙腈、甲醇、无水乙醇、三氯化铁、四氢呋喃均为色谱纯。各种生化试剂盒：总蛋白试剂盒(120441)、白蛋白试剂盒(120501)、谷草转氨酶试剂盒(120991)、谷丙转氨酶试剂盒(122021)、胆固醇试剂盒(131501)、甘油三酯试剂盒(135941)、尿素试剂盒(120991)、葡萄糖试剂盒(133031)、肌酐试剂盒(132591)。稀释液DH-640(121114)、溶血剂DH-680(121102)。

2方法

2.1稳定性试验方法

2.1.1样品处理3批受试样品贮存于30℃以下的阴凉干燥处，保存期24个月，供常规稳定性试验用。另取上述3批受试样品每批次30瓶，置于温度为37±2℃、湿度75%±5%的恒温恒湿箱中保存，每个月每个批次取出10瓶，共分成1、2、3个月进行加速稳定性试验。

2.1.2色谱条件

(1)CoQ10：采用高效液相色谱，Nova-Pak C18色谱柱，柱温25℃，流动相体积比：乙腈：四氢呋喃：水(55∶40∶5)，进样量5μL，流速1.0mL/min。

(2)维生素E：采用气相色谱，DB-1色谱柱，载氮气，载气流速4.5mL/min，进样口温度300℃，柱温箱的初始温度是200℃、终止温度300℃，升温速率10℃/min，到达终止温度后保持20min，检测器温度是300℃，进样量1μL，分流比10∶1。

2.1.3样品测定样品分别在0、1、2、3个月加速稳定性试验后进行CoQ10和维生素E的含量测定。CoQ10的含量测定采取正己烷与乙醇混合液提取试样中CoQ10，加1mL 0.1%三氯化铁的无水乙醇稀释过滤后，采用高效液相色谱分离，紫外检测器检测，根据保留时间和峰面积进行定量[7]。维生素E的含量测定采用天然维生素E的国家标准方法(GB 19191-2003)[8]。

2.2安全性试验方法

2.2.1受试样品取0时受试样品，冷藏或贮存于30℃以下的阴凉干燥处，供试验用。人体口服推荐量为1粒/d，即每日0.414g/60 kg BW。

2.2.2受试动物及条件急性毒性试验和30d喂养试验用鼠选用中国食品药品检定研究院[许可证号：SCXK(京)2009-0017]繁殖的SPF级昆明种小鼠和SD大鼠。遗传毒性试验用斯贝福(北京)实验动物科技有限公司[许可证号：SCXK(京)2011-0004]繁殖的SPF级昆明种小鼠。基础饲料由北京华阜康生物科技股份有限公司生产[许可证号：SCXK-(京)2009-0008]。各剂量组均给予基础饲料。采用SPF级动物房[实验动物使用许可证号：SYXK(京)2012-0031]。

2.2.3急性毒性试验(最大耐受量MTD法)选用18～22g昆明种小鼠20只及180～220g SD大鼠20只，雌雄各半，进行试验。取受试样品的内容物125.0g，加玉米油至200.0mL，使用浓度0.625g/mL。灌胃容量20mL/kg BW，分成2次灌胃，间隔6h，灌胃剂量相当于25.0g/kg BW(相当于人体推荐日摄入量的3 623倍)，连续观察14d，记录大鼠的一般状态、体重变化、中毒症状及死亡情况，确定最大耐受剂量(MTD)。

2.2.4小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验选用体重25～30g昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。以环磷酰胺(40mg/kg BW)为阳性对照，玉米油为溶剂对照，低、中、高等3个剂量组分别为2.50、5.00、10.00g/kg BW，相当于人体推荐剂量的362、725、1 449倍。均采用经口灌胃给予，灌胃容量约为20mL/kg BW。2次灌胃给予受试样品，2次给药间隔24h，末次灌胃6h后，处死动物。取小鼠胸骨骨髓，用小牛血清稀释制作涂片。采用双盲法阅片。显微镜下观察每只小鼠计数1 000个嗜多染红细胞(PCE)，计算含微核的PCE的千分率。同时，每只小鼠计数200个PCE和成熟红细胞(NCE)数，计算PCE与NCE比值。

2.2.5精子畸形试验选用体重25～30g昆明种小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组，每组10只。以环磷酰胺(40mg/kg BW)为阳性对照，玉米油为溶剂对照，低、中、高等3个剂量组分别为2.50、5.00、10.00g/kg BW，相当于人体推荐剂量的362、725、1 449倍。均采用经口灌胃给予，灌胃容量约20mL/kg BW。每日灌胃1次，连续5d，末次灌胃30d后，处死动物。取附睾制片，双盲法阅片。高倍镜下观察小鼠的精子状态，每组取5只小鼠计数，每只计数1 000个精子，计算精子畸变发生的百分率。

2.2.6大鼠30d喂养试验选用离乳大鼠80只，雌雄各半，随机分成4组，每组20只。以玉米油为溶剂对照，低、中、高等3个剂量组，分别为0.17、0.34、0.69g/kg BW，相当于推荐人体日摄入量25、50、100倍。采用灌胃给予受试样品，每日1次，连续30d灌胃容量为10mL/kg BW。每日观察并记录动物的一般表现，中毒和死亡情况。每周称2次体重，撤食量和剩余量，计算每周摄食量和食物利用率。在第30d禁食16h后称空腹体重，测定相关血液指标和血清生化指标。进行大体解剖，称量肝脏、肾脏、脾和睾丸等脏器的绝对重量并计算脏/体重量比。当各剂量组大鼠大体检查没有发现明显病变，且血液指标和血清生化指标没有发生显著性变化时，取高剂量组与溶剂对照组的肝脏、肾脏、胃、肠、脾、睾丸和卵巢进行病理组织学检查。若发现病变后对较低剂量组进行相应检查。由每只大鼠中切取肝组织、肾组织、脾组织、胃组织、十二指肠组织、卵巢或睾丸组织各一块，经甲醛固定，酒精、二甲苯脱水透明，石蜡包埋，制成5μm厚度切片，苏木精伊红染色，光学显微镜观察。

3结果与分析

3.1稳定性检测结果

从表1可见，在温度37±2℃、湿度75%±5%的条件下分别存放0、1、2、3个月，受试样品CoQ10和维生素E指标无发生明显变化，这表明，受试样品质量稳定，CoQ10和维生素E在迷迭香提取物和米糠油基质中可以稳定存在。

表1　受试样品稳定性测试结果

3.2安全性检测结果

3.2.1急性毒性(最大耐受MTD量)试验结果由表2可见，给雌、雄的昆明小鼠和SD大鼠灌胃2次受试样品，灌胃剂量为25.0g/kg BW，在观察14d期间，动物状态正常，无中毒体征和死亡等异常情况。第15d将受试动物处死进行大体解剖检查，主要器官未见明显异常。受试样品对雌、雄昆明小鼠和SD大鼠的经口MTD均大于15g/kg BW，受试样品属无毒级别。

表2　急性毒性试验(MTD)结果

3.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞(PCE)微核试验结果 由表3、表4可见，各剂量受试样品对雌、雄昆明小鼠的骨髓细胞增殖没有明显抑制作用。雌、雄昆明小鼠各剂量组骨髓PCE微核率与溶剂对照组比较均无显著性差异(P>0.05)。阳性对照组小鼠骨髓PCE微核率显著高于溶剂对照组(P<0.01)，说明受试动物敏感，试验可靠。结果表明，在受试剂量范围内，受试样品小鼠骨髓PCE微核试验阴性。

表3　雌性昆明小鼠骨髓PCE微核试验结果

表4　雄性昆明小鼠骨髓PCE微核试验结果

3.2.3小鼠精子畸形试验结果由表5可见，与溶剂对照组比较，受试样品各剂量组的小鼠精子畸形发生率均无显著性差异(P>0.05)。阳性对照组小鼠精子畸形发生率有显著性差异(P<0.01)，说明受试小鼠敏感，试验可靠。结果表明，在受试剂量范围内，受试样品小鼠精子畸形试验阴性。

表5　小鼠精子畸形试验结果

3.2.4大鼠30d喂养试验结果给予大鼠不同剂量的受试样品30d后，大鼠体重、体重增重、摄食量、食物利用率、脏器检查、脏器重量、脏/体比值、血液学和血液生化学检查结果表明，与溶剂对照组间比较，受试样品各剂量组的各检验项目均没有显著性差异(P>0.05)。

病理组织学结果表明，溶剂对照组与受试样品各剂量组的雌、雄大鼠的肝脏、肾脏、胃、十二指肠、脾、睾丸或卵巢均没有发现明显损伤性病理变化，说明30d喂养没有发现本受试样品有明显的毒性作用。

4讨论

CoQ10与其他原料一起使用时是否会发生化学反应一直被食品行业重视，CoQ10与维生素E都含有共轭双键，两者混合成软胶囊时，有可能发生化学反应而导致产品不稳定[9-12]。本实验结果表明，采用CoQ10和维生素E为主要原料，迷迭香提取物和米糠油为基质制成的软胶囊中，未见CoQ10和维生素E的量发生明显变化，可见CoQ10和维生素E在24个月的有效期内是稳定的，且辅料的存在也未对其稳定性产生任何的影响。毒理学评价实验也表明CoQ10和维生素E配伍食用安全。◇

参考文献

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(责任编辑李婷婷)

作者简介：孙红梅(1985—)，女，硕士，研究方向：保健食品研发和注册。

通讯作者：罗蓉(1970—)，女，双学士，工程师，研究方向：食品和保健食品技术法规。

Compatible Stability and Edible Safety of Coenzyme Q10and Vitamin E

SUN Hong-mei1，LUO Rong1，LI Dong-mei2

(1Amway (China) Co.Ltd.，Guangzhou 510613，China；2College of Applied Arts and Science of Beijing Union University，Beijing 100191，China)

Abstract：【Objective】To study the compatible stability and edible safety of coenzyme Q10and vitamin E.【Method】The samples containing coenzyme Q10and vitamin E were analyzed by high-performance liquid chromatography，and their toxicological safety was assessed.【Result】 No significant changes were found in contents of coenzyme Q10and vitamin E.The presence of excipients did not show any impact on its stability.No reaction of coenzyme Q10and vitamin was found within 24 months.Toxicological evaluation showed no safety issues.【Conclusion】It was proved that combination of coenzyme Q10and vitamin E was stable and safe.

Keywords：coenzyme Q10；vitamin E；stability；safety