不同稀释液及稀释倍数对β- HCG测定结果准确性的影响

杨昌伟，郑家深，李雪，吴雁，王攀

(遵义医学院附属医院核医学科，贵州　遵义563003)



不同稀释液及稀释倍数对β- HCG测定结果准确性的影响

杨昌伟，郑家深，李雪，吴雁，王攀

(遵义医学院附属医院核医学科，贵州遵义563003)

摘要：目的探讨临床实际工作中不同稀释液及稀释倍数对β-HCG测定结果的影响。方法选用Roche E601电化学发光法：⑴不同稀释液比较：选取厂家原装稀释液、自制阴性血清、生理盐水、去离子水与已知高浓度的标本血清，分别进行倍比稀释检测，其结果与理论值进行偏倚分析，确定最佳的稀释液。⑵最佳稀释倍数选择：收集本院β-HCG>10000mIU/ml血清标本150例，采用厂家原装稀释液、自制阴性血清分别进行1:2、1:4、1:8、1:16、1:32、1:64、1:128倍稀释后检测，将检测结果进行分析比较，确定最佳稀释倍数。结果⑴用自制阴性血清稀释后的检测结果与原装稀释液稀释后所得结果比较，差异无统计学意义（t=1.952，P=0.927）；生理盐水、去离子水稀释后所得结果与原装稀释液稀释后所得结果比较，差异有统计学意义（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。⑵对收集的高浓度150例血清标本，选择自制阴性血清稀释，确立1:32倍为最佳稀释倍数。其一次性检出率为95%，并与原装稀释液稀释检测结果基本一致。结论对于β-HCG浓度过高的标本，可以直接选用自制阴性血清作为替代稀释液，稀释倍数应首选32倍。其结果的检出率和准确性均较高，同时节省了成本，值得临床大力推广。但其血清未经灭活，存在潜在感染危险，操作时多加强预防措施。

关键词：电化学发光；β-HCG；稀释液；稀释倍数

在临床实际工作中，β-HCG值常常浓度较高，超出检测范围得不到具体的浓度值，为临床工作带来极大不便，为了得到具体的结果，需要对标本进行多次稀释，重复检测[1，2]，这样既耽误就诊时间还浪费大量成本。同时，如果稀释液和稀释倍数选择不当，也会对结果的准确性产生严重的影响，为了得到最佳的准确结果和节省成本，本文采用厂家原装稀释液、阴性血清、生理盐水、去离子水作为稀释液，对已知高浓度β-HCG血清进行稀释测定，其结果报告如下。

1　材料与方法

1.1样本来源本院就诊患者2015年1月至2015 年10月β-HCG>10000mIU/ml血清标本共150例，女，平均年龄24.5岁，均来自正常受孕妇女，排除其他甲状腺、感染、妇科疾病。

1.2仪器与试剂β-HCG试剂校准品及复合质控物，厂家原装β-HCG稀释液，仪器和试剂均由罗氏公司提供。选取本实验室男性体检标本血清作为阴性血清（要求无溶血、黄疸、无脂血）；生理盐水、去离子水自备。

1.3检测方法将已知浓度为9350mIU/ml的β-HCG血清样本分别用原装稀释液、阴性血清、生理盐水、去离子水按（1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：

64、1：128)稀释，做双份检测求平均值。将收集的150例β-HCG>10000mIU/ml血清标本同上方法稀释后检测，确定最佳稀释倍数。

1.4统计学分析采用统计软件SPSS 18.0，对正态计量资料采用以均数±标准差（x±s）表示，运用单因素方差分析（One-way ANOVA），数据进一步的两两比较采用LSD法，检验水准为0.05；结果比较采用测定数据与其理论值之间比较其偏差程度(%)。

2　结果

2.1偏差计算分析已知浓度为9350mIU/ml的β-HCG血清样本经原装稀释液、阴性血清、生理盐水、去离子水稀释后检测结果与理论值比较。对同一高值β-HCG用原装稀释液和阴性血清分别按不同比例稀释检测，测定值与理论值比较，偏差分别为0.38%～4.87%，0.78%～5.93%，检测结果分别两两比较，差异无统计学意义（t=1.952，P=0.927）；生理盐水、去离子水稀释后与理论值结果比较，其偏差分别为4.45%~29.75%，8.71%~26.55%。生理盐水、去离子水稀释后所得结果与原装稀释液稀释后所得结果比较，差异有统计学意义（t=22.131、19.415，P=0.000、0.000）。见表1。

2.2稀释倍数选择将150例β-HCG>10000mIU/ mL血清标本分别用原装稀释液和阴性血清进行1：2、1：4、1：8、1：16、1：32、1：64、1：128倍稀释后检测。能一次性检测出实际结果的机率分别为（21%、39%、75%、90%、95%、98%、99%），结果的准确性显示稀释倍数越低，检测结果越靠近理论值，稀释倍数越高，结果偏差越大，但1：32的稀释倍数的检出率和准确性均较高。

表1　高值β-HCG经不同稀释液稀释后检测结果（±s，mIU/ml）

表1　高值β-HCG经不同稀释液稀释后检测结果（±s，mIU/ml）

稀释倍数　1:2理论值原稀释液阴性血清生理盐水去离子水F值P值9350 4615±80.28 4601±78.11 4883±99.12 5082±111.19 307.191 0.000 1:4　1:8　1:16　1:32　偏倚（%）4675 2328±41.32 2319±64.52 2604±71.38 2691±75.11 190.709 0.000 2337.50 1173±43.25 1188±48.71 1349±60.33 1433±50.27 200.738 0.000 1168.75 592±33.12 603±35.28 744±55.19 739±60.18 211.387 0.000 584.38 306±21.71 309±18.33 379±30.15 363±43.17 254.333 0.000 292.18 0.38～4.87 0.78～5.93 4.45～29.75 8.71～26.55

3　讨论

目前，人绒毛膜促性腺激素（Human chorionic gonadotropin，HCG）在临床上主要用于早期妊娠、妊娠相关疾病及滋养细胞肿瘤等疾病诊断[3，4]。HCG由α、β两个亚基组成，α亚单位与某些激素如TSH、LH、FSH具有相同的抗原性，在测定时易产生交叉反应从而对HCG的测定造成一定的影响，β亚单位则有其特异性，所以临床常以检测β亚单位来作为HCG检测[5]。化学发光法及电化学发光法是目前临床上主要检测HCG的方法，具有灵敏度高，特异性好，检测线性宽等优点。但在临床常规检测中，也经常会遇到病人样本β-HCG含量超出检测范围的情况，临床得不到实际的准确值。为提供一个真实、准确的检测结果，稀释液及其最佳稀释倍数的选择显得尤为重要。

由于厂家所提供的原装稀释液价格昂贵，检测成本高，在国内实际工作中使用生理盐水、去离子水稀释检测的现象非常普遍，这样严重影响检测结果。本次研究结果显示，原装稀释液和阴性血清分别按不同比例稀释检测，检验结果与理论值比较接近，而生理盐水稀释后与理论值差异较大，与文献报道相符[6]。其中可能的原因是生理盐水的离子强度，pH值（5.9左右）与病人样本及标准品差别较大，存在基质效应而导致结果偏差较大[7，8]，因而不能满足免疫反应的环境要求。去离子水pH6～7，但溶质极低[9]，极大的改变了免疫反应体系中的蛋白质种类和离子强度，同样不能作为稀释液使用。但陈广福等用磁分离酶联免疫法检测高浓度HCG标本时，结论是除专用稀释液外，生理盐水是磁分离酶联免疫法测定血清HCG的首选稀释液[10]，这与本文结果不相符，具体原因有待进一步探讨。所以不同检测项目用同一检测方法或同一检测项目用不同检测方法选用稀释液时，应做类似试验加以确定。

自制阴性血清新鲜、无溶血、黄疸、脂血等，不会对免疫反应的环境造成影响，其pH值、溶质、蛋白质种类、离子强度均满足免疫反应条件，灵敏度和准确性均较高，可代替专用的原装β-HCG稀释液使用[11]。且制备来源、保存条件均方便，在-40℃冷冻保存至少可稳定半年，置2～8℃普通冰箱保存2～3周，常温下避光保存至少可稳定5d[12]。稀释倍数选择，使用1：32稀释倍数，一次性检测出实际结果的几率达95%，检测结果与理论值比较非常接近。其不同稀释倍数检出能力与检测准确性变化的规律为稀释倍数越低，准确性越高，一次性检出率越低；稀释倍数越高，准确性越低，而一次性检出率越高。这可能是随着稀释倍数的增大，产生的误差也越大所导致的结果，因此，在确立稀释倍数的同时，既要考虑检出结果的准确性，还得顾及一次性检出的几率，从而降低检测成本。

总之，使用自制阴性血清进行高值β-HCG稀释，既不影响结果的准确性和灵敏度，同时选择适当稀释倍数还可提高一次性的检出率。且制备来源和保存条件均非常方便，同时节省了成本，值得临床大力推广。但其血清未经灭活，存在潜在感染危险，操作时应加强预防措施。

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·检验与临床·

中图分类号：R446.62

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0347-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.025

通信作者：王攀。

(收稿日期2016-03-07；修回日期2016-04-21)