类孟买型Ahm分泌型的血型鉴定及输血

应盼

(浙江大学医学院附属第二医院输血科，浙江　杭州310009)



·输血与检验·

类孟买型Ahm分泌型的血型鉴定及输血

应盼

(浙江大学医学院附属第二医院输血科，浙江杭州310009)

摘要：目的血清学和分子生物学鉴定类孟买型Ahm分泌型，为患者准备手术用血。方法应用常规血清学方法检测患者红细胞抗原及血清中的抗体，吸收放散试验鉴定红细胞上弱表达的ABO抗原，测定唾液中的血型物质，进行分子生物学测序分析。结果患者血型为罕见的类孟买型Ahm分泌型，血清中有抗-H抗体。结论鉴定出罕见类孟买型，血清中含有抗-H，其FUT1基因为第547~552位AG两碱基缺失的纯合态，为最常见单体型。

关键词：类孟买型Ahm分泌型；抗-H；FUT1基因

1952年Bhende发现孟买型(Bombay phenotype)，1961年Levine发现类孟买型(para-Bombay phenotype)，这两种罕见表型的红细胞上完全或部分缺失H抗原[1]。目前研究证实α-1，2岩藻糖基转移酶基因（FUT1）的突变是导致类孟买的主要原因[2]。笔者在本院入院病人中发现1例，并在血清学实验的基础上做基因测序分析，鉴定为类孟买型Ahm分泌型。

1　材料与方法

1.1样本来源患者鲍某，女，70岁，无既往输血史，临床诊断为鼻腔肿瘤，拟手术治疗，申请手术备血。入院后常规血型鉴定及备血，血型检测时发现正反定型不符，正定型为A型，反定型与标准A、B、O型红细胞均发生不同程度凝集，与自身红细胞不凝集，抗体筛查阳性。重新收集其全血及唾液标本进一步检测。

1.2试剂和仪器单克隆抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H、抗筛细胞、标准A、B、O型红细胞(上海市血液生物医药有限公司)，抗-Lea、抗-Leb(加拿大TITUS公司产品)，微柱凝胶抗球蛋白卡（西班牙戴安娜公司生产），9700型PCR自动扩增仪(PE公司)、纯化试剂盒（QIAGEN公司）、ABI PRISM 377测序仪。

1.3血型鉴定⑴正定型：取4支试管，各加入洗涤后的5%患者红细胞悬液50μl；再分别各加入抗-A、抗-B、抗-AB、抗-H试剂50μl，离心观察结果。⑵反定型：取4支试管各加入患者血清50μl，再分别各加入A、B、O细胞和自身细胞50μl，离心观察结果。⑶Lewis血型：取2支试管，各加入洗涤后5%患者红细胞悬液50μl，再分别加入单克隆抗-Lea、抗-Leb试剂50μl，离心观察结果。

1.4抗体筛选在微柱凝胶抗球蛋白卡中三孔分别加入患者血清50μl，和抗体筛选细胞（OⅠ~OⅢ）各50μl，37℃温育15min，专用离心机离心10min取出观察结果。

1.5吸收放散试验取一定量患者压积红细胞洗涤4次后平均分成2份（每份1ml），分别加入等量抗-A、抗-B血清混合，经冰箱4℃吸收1h，取出用冷盐水洗涤4次，经56℃10min热放散，并保温离心，吸取上层暗红色放散液分别与A、B型标准红细胞反应。

1.6唾液中血型物质测定把单克隆抗-A、抗-B、抗-H血清以4+的最高稀释倍数分别稀释备用，取患者煮沸处理后的唾液与稀释过的抗血清作中和抑制试验，检测唾液中A、B、H血型物质。

1.7测序分析FUT1基因扩增方法同文献[3]的方法。PCR扩增产物在2%琼脂糖凝胶上电泳30 min，紫外透射仪下显示扩增成功后，从凝胶上切取目的DNA片段，用QIA-quick gelextraction kit(德国Qiagen公司)试剂盒纯化后直接用ABI PRISM 377测序仪进行测序分析。

2　结果

2.1血型鉴定结果见表1。

2.2抗体筛选患者血清与上海血液生物医药有限公司生产的抗体筛选细胞(OⅠ~OⅢ)均呈阳性（2+）反应。经抗-A血清吸收后的红细胞释放液与标准A细胞呈凝集反应，经抗-B血清吸收后的红细胞释放液与标准B细胞无凝集，结果证实患者红细胞上含有A抗原。唾液中检出A、H物质，未检出B物质，结果证实患者为A分泌型。

2.3测序结果患者ABO基因第6外显子第261位为G/del杂合，第7外显子第297位A/A纯合、第467位C/T杂合、第526位C/C纯合、第657位C/C纯合、第703位G/G纯合、第796位C/C纯合、第803位G/G纯合、第930位G/G纯合，表明ABO基因型为A102/O01。患者测序发现FUT1基因第547~552位两碱基(AG)缺失纯合态，见图1。

表1　ABO、H、Lewis血型鉴定结果

图1　正常对照和类孟买型Ahm分泌型的FUT1基因序列图

3　讨论

类孟买血型是一种罕见的红细胞血型表型，其主要特征是红细胞表面H抗原部分或完全缺失，而分泌液中存在H物质。患者因正反定型不一致作进一步检测时发现其红细胞与抗-H血清反应阴性，但红细胞吸收释放试验中能释放A抗原，唾液中分泌A、H物质，证实患者的ABO血型为Ahm分泌型，但红细胞上缺乏H抗原。

分子生物学实验中患者ABO基因第6、7外显子的测序结果也证实含有A基因。文献报导类孟买型的Lewis血型通常为Le (a-b+)，该患者的Lewis血型也为Le(a-b+)。根据Race分类患者血型可命名为Ahm[4]。患者FUT1编码序列测序结果显示：α-1，2岩藻糖基转移酶基因第547～552处的两个核苷酸AG缺失（CAGAGAG→CAGAG），导致阅读框架发生移码，提前形成终止密码。本例患者的突变为类孟买型的常见突变[5]，也与中国香港和台湾等地的报道完全一致[6，7]。

从输血安全出发，为避免误检、漏检，笔者认为凡是手工血型鉴定时一定要严格执行临床输血技术规范，ABO正、反定型。卡式定血型时，因血型卡中没有O细胞孔，应同时进行抗体筛选。在交叉配血时，应警惕除冷抗体外是否存在ABO以外IgM性质的血型抗体。通过此次血型鉴定，临床输血科实验室配备抗-H血清试剂以备疑难血型鉴定之需，笔者认为是非常有必要的，不仅有利于ABO亚型鉴定[8，9]，也有利于发现罕见的类孟买血型。

该患者经血清学和分子生物学鉴定为类孟买血型后，只有ABO同型的类孟买血液才能交叉配合并输注，特向省血液中心成功预约到冰冻库内的A类孟买型血液，确保了手术的成功。但由于类孟买血型十分罕见，很难找到相同类孟买血型供者，笔者认为对于择期手术类孟买血型患者如果无法找到相同H抗原缺乏血型血液时，应根据患者的临床状况尽量采用贮存式及稀释式自体输血。此类患者在无法找到相同H抗原缺乏血型之血液时又需紧急输血，应根据患者抗-A、抗-B、抗-H的实际情况，选择37℃与患者血清反应最弱的ABO血型同型血液进行输血治疗[10]。

参考文献

[1]Daniels G. Human Blood Groups [M]. 2nd ed. Oxford：Blackwell Science，2002：42-57.

[2]Yan L，Zhu F，Xu X，et al. Molecular basis for para-Bombay phenotypes in Chinese persons，including a novel nonfunctional FUT1 allele[J]. Transfusion，2005，45：725-730.

[3]洪小珍，许先国，朱发明，等.罕见类孟买型ABhm的鉴定[J].中国输血杂志，2005，18(1)：8-10.

[4]陈忠，张莉尼.孟买型与类孟买型—附国内文献复习[J].中国输血杂志，1991，4(3)：154.

[5]Chang JG，Yang TY，Liu TP，et al. Molecular analysis of secretor typeα(1，2)-fuscoyltransferase gene mutations in the Chinese and Thai populations[J]. Transfusion，1999，39(9)：1013.

[6]Yip SP，Chee KY，Chan PY，et al. Molecular genetic analysis of para-Bombay phenotypes in Chinese：a novel non-functional FUT1 allele is identified[J]. Vox Sang，2002，83：258-262.

[7]Kaneko M，Nishihara S，Shinya N，et al. Wide variety of point mutations in the H Gene of Bombay and para-Bombay individuals that inactivate H enzyme[J]. Blood，1997，90：839-849.

[8]葛云萍.患者血型初检错误原因分析及对策[J].实验与检验医学，2013，31(3)：274.

[9]周炳能. 29例ABO血型正反定型不一致原因探讨[J].实验与检验医学，2010，28(2)：189-190.

[10]孙云，闫芳，范道旺，等. 1例类孟买血型的鉴定和家系调查及输血[J].中国输血杂志，2006，19(6)：491-493.

中图分类号：R457.1+1，R446.62

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0391-02

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.044

(收稿日期2016-03-09；修回日期2016-04-17)