福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及主要活化相关指标正常参考范围的建立

林珊，高虹，李晶，林洁，张忠龙，林世光，陈新弟

(1、福建省福州儿童医院，福建福州350005；2、福州市妇幼保健院，福建　福州350005)



福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及主要活化相关指标正常参考范围的建立

林珊1，高虹2，李晶1，林洁1，张忠龙1，林世光1，陈新弟1

(1、福建省福州儿童医院，福建福州350005；2、福州市妇幼保健院，福建福州350005)

摘要：目的建立福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围。方法选取福州地区0～18岁健康儿童593例为研究对象，按年龄分为新生儿组（0～28d）、婴儿组（～12个月）、幼儿组（～3岁）、学龄前组（～7岁）、学龄组（～12岁）和少青组（～18岁），采集外周血以美国BD公司生产的四色荧光抗体进行标记，以FACSCalibur流式细胞仪测定T淋巴细胞亚群CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、B淋巴细胞亚群CD3-CD19+、NK细胞CD3-CD16+CD56+及淋巴细胞活化指标CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+、CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数，以MultiSET软件获取数据并分析结果，SPSS 10.0软件进行统计分析。以百分位数法，采用95%可信区间确定正常参考值范围。结果除CD3-CD16+56+绝对计数在各年龄组间无差异外，淋巴细胞亚群及淋巴细胞活化指标在不同年龄组之间的差异均有统计学意义，表现为CD3+绝对计数、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和绝对计数、CD4+/CD8+比值随着年龄的增长呈降低趋势。CD4+Anti-HLA-DR+的百分率随着年龄的增长呈增高趋势。新生儿组CD3+、CD3+CD4+、CD4＋CD38＋、CD8＋CD38＋的百分率和绝对计数及CD4＋/CD8＋比值明显高于其它年龄组，CD3-CD19＋、CD8＋Anti-HLA-DR＋的百分率和绝对计数明显低于其它年龄组。在不同性别之间CD3+CD4+和CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4＋Anti-HLA-DR＋和CD8＋CD38＋的百分率和绝对计数的差异有统计学意义，表现为女童明显低于男童。儿童淋巴细胞亚群绝对计数的参考值高于成人。结论健康儿童淋巴细胞免疫表型的分布存在性别和年龄差别，由于这种差别细微，可以在同一种族同一区域建立统一的正常参考值范围。本研究成功建立福州地区健康儿童淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围。

关键词：淋巴细胞亚群；淋巴细胞活化；流式细胞术；儿童；正常参考值

目前国内尚没有统一的健康儿童外周血淋巴细胞亚群的正常参考值，临床工作中主要参考由仪器试剂供应商提供的国外数据[1]，可能会对中国儿童疾病状态下免疫功能的判断造成一定的偏差。随着感染性疾病、免疫性疾病及各种肿瘤的发病率的上升，人们对发病机制、病程发展、治疗效果进行深入研究，发现疾病的发生与机体免疫功能状态密切相关[2，3]，淋巴细胞是构成免疫系统和执行免疫功能的主要细胞群体。进行淋巴细胞亚群分析，对于了解机体免疫功能状态有重要的临床意义，为此，本研究对593例健康儿童外周血淋巴细胞亚群进行分析，以建立福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围，现报告如下。

1　对象与方法

1.1研究对象选取在福建省福州地区进行健康体检或术前查体（均为对免疫功能影响不大的疾病如腹股沟斜疝、包茎、鞘膜积液等）的0～18岁健康儿童为研究对象，所有研究对象均符合以下标准：外周血细胞计数、肝肾功能、X线检查均正常，无明显的心、脑血管疾病，无先天性免疫缺陷性疾病和自身免疫性疾病，近期无感染性疾病，无急性时相反应，无HBV、HCB、HIV和梅毒等慢性感染性疾病，近期未使用过影响免疫系统的药物。根据《诸福棠实用儿科学》[4]，按年龄分为新生儿组（0～28d）83例、婴儿组（～12个月）97例、幼儿组（～3岁）98例、学龄前组（～7岁）106例、学龄组（～12岁）103例和少青组（～18岁）106例，共593例，其中男308例，女285例。采集外周静脉血2ml，乙二胺四乙酸二钾（EDTA-K2）抗凝。

1.2检测方法⑴仪器：美国BD公司的FACSCalibur型流式细胞仪。⑵试剂：采用美国BD公司的淋巴细胞亚群分析试剂，荧光标记4色单克隆抗体，CD3 -FITC/CD8 -PE/CD45 -PerCP/CD4 -APC、CD3-FITC/CD16+56-PE/CD45-PerCP/CD19-APC，CD8-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLA-DRAPC、CD4-FITC/CD38-PE/CD3-PerCP/Anti-HLADR-APC，使用配套的溶血剂(FACS Lysing Solution)，荧光校正微球（CaliBRITEBeads）分别为：Unlabeled Beads、APC Beads、FITC Beads、PE Beads、PerCP Beads。⑶标本制备：按照试剂使用说明书的要求，每份样本用流式细胞仪专用试管，分别加入20μl MultiTEST单抗试剂于TruCONT管中，加入50μl EDTA抗凝全血，混匀在室温暗处放置15min，加入450μl10%FACS溶血素，混匀在室温暗处放置15min，上机获取标本数据。⑷仪器校正：上机前使用BD公司专用的荧光校正微球对流式细胞仪进行校正，包括光电倍增管电压的调节、荧光补偿的调节，以及灵敏度的测试等，使流式细胞仪处于最佳的运行状态。⑸结果分析：应用Multi-SET软件测定淋巴细胞亚群包括CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD3-CD19+、CD3-CD16+56+的百分率和绝对计数及CD4+/CD8+比值；用CellQUEST Pro软件测定淋巴细胞活化指标CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数并分析结果。⑹质量控制：数据均由同一技术人员（本文第一作者）在同一标准下进行读取，数据分析和离群值的剔除则由本文3名作者共同完成。

1.3统计学分析采用SPS 10.0软件进行统计学分析，检测结果用均数±标准差（x±s）表示，两组间均数差异比较采用t检验，多组间均数比较采用方差分析，P<0.05为差异有统计学意义。以百分位数法确定95%可信区间建立正常值范围。

2　结果

2.1不同年龄组健康儿童淋巴细胞亚群及活化结果淋巴细胞亚群及淋巴细胞活化指标除CD3-CD16+56+绝对计数在各年龄组间无差异（P>0.05）外，其余各个指标在不同年龄组之间的差异均有统计学意义（P<0.05），但各年龄组各种免疫表型均数与合并年龄组后的总体差别无统计学意义（P> 0.05），结果见表1、表2。结果显示，CD3+绝对计数、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和绝对计数、CD4+/ CD8+比值随着年龄的增长呈降低趋势，CD4+Anti-HLA-DR+的百分率随着年龄的增长呈增高趋势。新生儿组CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和绝对计数及CD4+/CD8+比值明显高于其它年龄组，CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数明显低于其它年龄组。

表1　不同年龄组健康儿童T淋巴细胞亚群免疫表型结果（±s）

表1　不同年龄组健康儿童T淋巴细胞亚群免疫表型结果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年龄组　例数　百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋绝对计数（个/μl)新生儿组婴儿组幼儿组学龄前组学龄组少青组合计F值P值83 97 98 106 103 106 593 78.5±7.0 64.6±7.0 66.8±5.6 67.6±5.9 66.4±5.5 65.2±7.1 67.5±7.4 43.0 <0.05 4484±1130 4691±1741 3590±1093 2566±671 2178±715 2030±705 3053±1428 111 P<0.05 54.5±7.6 40.9±6.4 37.4±5.8 34.1±5.9 31.5±5.6 31.9±5.5 36.8±9.1 145 <0.05 3111±831 2970±1181 2006±681 1289±372 1037±426 993±368 1724±1031 175 <0.05 22.9±7.3 21.1±6.4 24.1±4.6 26.2±5.7 27.2±6.7 27.39±6.1 25.2±6.5 14.8 <0.05 1330±564 1549±887 1299±477 1008±363 879±335 850±325 1110±556 28.4 <0.05百分比（%）0.45±0.50 0.92±0.29 0.05±0.26 0.02±0.13 0.11±0.37 0.14±0.38 0.13±0.38 4.8 <0.05绝对计数（个/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl) 27.9±14.7 20.2±18.1 11.1±13.9 7.7±5.6 8.8±9.1 10.3±8.1 13.1±14.6 33.9 <0.05 2.61±0.99 2.16±0.91 1.63±0.49 1.39±0.54 1.20±0.34 1.24±0.40 1.60±0.80 74.7 <0.05 11.1±4.2 26.1±6.8 21.9±4.8 19.8±10.3 16.1±4.5 15.4±4.1 18.5±7.7 53.1 <0.05 641±255 1894±796 1165±395 726±284 548±310 489±212 872±615 148 <0.05 8.7±6.1 7.3±4.3 7.8±4.6 8.8±4.0 11.2±4.9 16.1±6.8 10.3±6.0 39.9 <0.05 542±515 557±508 431±316 330±178 376±218 513±281 443±340 2.2 >0.05

表2　不同年龄组健康儿童淋巴细胞活化结果（±s）

表2　不同年龄组健康儿童淋巴细胞活化结果（±s）

年龄组　例数　百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl) CD4＋CD38＋CD4＋Anti-HLA-DR＋新生儿组婴儿组幼儿组学龄前组学龄组少青组合计F值P值83 97 98 106 103 106 593 52.1±5.8 44.8±8.1 35.1±6.6 27.8±6.0 22.9±6.1 19.3±5.7 31.3±12.5 320.5 <0.05 3101±902 2824±1020 1777±659 1050±309 852±627 616±285 1506±1088 216 <0.05 2.09±1.88 2.17±1.40 2.19±0.97 2.18±0.82 2.31±0.80 2.73±1.11 2.30±1.16 4.2 <0.05 CD8＋CD38＋CD8＋Anti-HLA-DR＋126±121 128±76 110±65 87±59 88±102 87±46 101±80 5.1 <0.05 21.5±6.5 21.4±6.0 21.9±5.6 18.5±4.5 16.0±3.9 12.9±4.0 18.3±6.0 51.7 <0.05 1307±560 1341±656 1067±419 699±274 554±278 402±187 828±528 87.2 <0.05百分比（%）1.39±2.33 4.38±4.07 5.69±3.55 4.94±2.37 5.78±4.26 5.83±2.76 4.96±3.57 18.0 <0.05绝对计数（个/μl) 90±140 287±352 287±226 186±106 192±152 182±106 208±200 11.4 <0.05

2.2不同性别淋巴细胞亚群及活化结果CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和绝对计数在不同性别组之间的差异有统计学意义（P<0.05），表现为女童明显低于男童，但男女分别与合并性别后的总体差别无统计学意义（P>0.05），结果见表3、表4。

2．3福州地区健康儿童淋巴细胞亚群及活化指标参考值范围尽管性别和年龄对健康儿童淋巴细胞亚群及活化指标分布有差别，由于这种差别细微，可以建立统一的参考值范围。本研究以百分位数法，采用国际临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的95%可信区间确定参考值，结果见表5、表6。

2．4国内外不同地域健康人淋巴细胞亚群参考值比较本研究建立的健康儿童淋巴细胞亚群参考值与BD公司提供的欧美人以及国内外文献建立的正常成人或儿童的参考值比较，表现为各项目的百分率范围及CD4＋/CD8＋的比值均较一致，而绝对计数均高于文献中的成人范围，与以儿童为研究对象[9，18]的结果接近，结果见表7。

3　讨论

本研究采用美国BD公司的流式细胞仪及配套的四色淋巴细胞亚群分析试剂盒，该试剂盒具有良好的稳定性，并应用MultiSET软件以CD45-SSC点图设门（Gating）测定淋巴细胞亚群，应用CellQuest Pro软件以CD3-SSC点图设门测定淋巴细胞的活化指标。上机前使用专用的荧光校正微球对流式细胞仪进行校正，使仪器各项指标在质控允许值范围，保证了数据产生的一致性和可靠性。流式细胞术的发展使细胞免疫功能的检测迈上了一个新台阶，目前，临床使用流式细胞术检测淋巴细胞亚群灵敏度高、重复性好，是一种快速、准确的评估和检测机体免疫状态的方法[5]。

受生态环境、社会经济等多种因素影响，不同地区、不同种族、不同年龄、不同性别正常人群淋巴细胞亚群存在差异。Klose等研究比较发现，德国布基那法索地区、新加坡和坦桑尼亚地区正常成年人CD3+、CD4+及CD19+绝对计数有显著差异[6]；浙江省与北京地区健康成年人相比，CD3+绝对值有显著差异，这种差异也存在于国内其它地区

表3　不同性别健康儿童淋巴细胞免疫表型结果（±s）

表3　不同性别健康儿童淋巴细胞免疫表型结果（±s）

CD3＋CD3＋CD4＋CD3＋CD8＋年龄组　例数　百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）CD3＋CD4＋CD8＋CD3-CD19＋CD3-CD16＋56＋绝对计数（个/μl)男女合计308 285 593 t（男～女）值t（男～合）值t（女～合）值P（男～女）值P（男～合）值P（女～合）值67.9±7.6 67.1±7.1 67.5±7.4 1.33 3073±1476 2852±1349 3053±1428 1.90 37.5±9.2 36.0±8.9 36.8±9.1 2.02 1.08 1.24 <0.05 >0.2 >0.2 1845±1055 1590±988 1731±1044 3.03 1.54 1.57 <0.005 >0.1 >0.1 25.2±6.3 25.3±6.6 25.2±6.5 0.19绝对计数（个/μl) CD4＋/CD8＋百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl) 1178±525 1035±458 1110±556 0.002 >0.05>0.05>0.05百分比（%）0.14±0.38 0.11±0.39 0.13±0.38 0.97 14.6±6.6 14.5±5.5 13.1±14.6 0.2 1.63±0.79 1.57±0.71 1.60±0.75 0.5 9.8±6.0 10.7±5.9 10.3±6.0 1.84 449±352 437±328 443±340 0.29 >0.05>0.2 >0.2>0.5 19.2±8.7 17.7±6.1 18.5±7.7 2.44 1.19 1.67 <0.01 >0.2 >0.05 950±679 786±522 872±614 3.3 1.69 1.95 <0.01 >0.05 >0.05 >0.05>0.05

表4　不同性别健康儿童淋巴细胞活化结果（±s）

表4　不同性别健康儿童淋巴细胞活化结果（±s）

性别　例数　百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl)百分比（%）绝对计数（个/μl) CD4CD38CD4Anti-HLA-DR男女合计308 285 593 t（男～女）值t（男～总）值t（女～总）值P（男～女）值P（男～总）值P（女～总）值32.3±12.4 29.7±12.4 31.3±12.5 2.55 1.14 1.78 <0.05 >0.2 >0.05 1605±1093 1399±1074 1506±1088 2.32 1.29 1.38 <0.05 >0.1 >0.1 2.43±1.17 2.17±1.13 2.30±1.16 2.12 1.19 1.22 <0.0 >0.2 >0.05 CD8CD38CD8Anti-HLA-DR 108±85 93±73 101±80 2.34 1.25 1.45 <0.05 >0.2 >0.1 19.0±6.4 17.5±5.5 18.3±6.0 3.07 1.59 1.72 <0.05 >0.1 >0.05 884±556 767±489 828±528 2.7 1.45 1.68 <0.05 >0.1 >0.05百分比（%）5.17±3.95 4.73±3.09 4.96±3.57 1.71 1.10 1.27 >0.05 >0.2 >0.2绝对计数（个/μl) 220±219 194±176 208±200 1.60 0.84 1.02 >0.1 >0.2 >0.2＋＋＋＋＋＋＋＋

表6　福州地区0～18岁健康儿童淋巴细胞活化指标正常参考范围（百分位数法确定95%可信区间）

[7，8，11]。年龄和性别也存在差异，由于儿童处于生长发育阶段，其免疫系统经历逐渐成熟的过程，不同的生长发育阶段淋巴细胞亚群分布亦不同，国外研究表明[10]，淋巴细胞亚群分化及抗原表达与年龄紧密相关，婴幼儿期表达CD4+和CD3-CD19+的百分率与绝对计数高于成人，且随年龄增加而减低；而CD8+和CD3-CD16+CD56+的百分率与绝对计数高于成人，并随着年龄增加而增加。肖婧等报道[8]儿童淋巴细胞亚群分布存在明显年龄和性别的差异，男女儿童各年龄组间外周血淋巴细胞亚群分布总体上有显著差异，而男女性别间CD3+、CD3+CD4+和CD3-CD56+的百分率和绝对值比较差异均有统计学意义。因此不同地区的不同人群应建立本地区统一的正常参考值范围。但是由于使用流式细胞术调查外周血淋巴细胞亚群正常参考值的成本较高等因素，目前尚无中国健康儿童不同年龄外周血淋巴细胞亚群较为科学的参考范围，只有为数不多的实验室建立了自己的参考值[7-9，11，12]，大多数实验室使用的都是国外的参考值，显然不适合中国人的疾病诊断和治疗。T细胞活化是T细胞特异性识别抗原提呈细胞所提呈的抗原肽-组织相容性复合物分子，并被激活和发生增殖，进而分化为效应细胞的过程，与病毒感染有关，活化指标比常规使用的T细胞亚群更敏感，可用于监测抗病毒治疗后患者是否出现全面的免疫重建，健康儿童淋巴细胞活化指标的调查及正常参考范围国内未见报道。活化淋巴细胞的标志表达在T细胞活化的不同时期[13，14]，CD38表达在胸腺细胞、活化T淋巴细胞等免疫系统中，CD38分子通过对激活信号的转导，促进T细胞的激活，在T、B淋巴细胞分化的早期表达，在成熟中期丢失，在成熟晚期又出现，被认为是常用的活化淋巴细胞标志物；HLA-DR是MHCⅡ类抗原，表达在B细胞、单核细胞、巨噬细胞、活化T细胞、活化NK细胞和人祖细胞，HLA-DR是T细胞晚期活化的标志。文献报道[15，16]，在儿童常见感染性疾病中，EB病毒(EBV)感染后患儿急性期CD3+、CD8+、CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+和CD8+CD38+比例明显增高，CD3+HLA-DR+、CD8+HLA-DR+、CD8+CD38+比例与患儿体温呈负相关，巨细胞病毒(CMV)感染患儿CD8+CD38+比例显著高于肺炎支原体(MP)感染患儿，MP感染患儿急性期淋巴细胞CD3+细胞比例显著低于正常儿童，CD8+CD38+细胞比例显著低于柯萨奇病毒(COX)感染患儿。SARS患者CD4+CD38+的表达降低[17]，降低的水平与SARS病情严重程度相关，CD4+CD38+的表达的检测有助于SARS与肺炎支原体感染的鉴别。为此，本研究对593例健康儿童外周血淋巴细胞亚群及T细胞部分活化指标CD38、HLA-DR进行了检测，以建立福州地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化正常参考范围，以便为临床研究机体的免疫功能以及免疫相关性疾病提供可靠的诊断依据。

表7　国内外文献建立淋巴细胞亚群参考值比较

本结果显示健康儿童各年龄组之间淋巴细胞亚群及活化指标除CD3-CD16+56+绝对计数外，其余各项指标CD3+、CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD19+的百分率和绝对计数以及CD3-CD16+56+的百分率差异均有统计学意义，CD3+绝对计数、CD3+CD4+、CD4+CD38+百分率和绝对计数、CD4+/CD8+比值随着年龄的增长呈降低趋势，与国内报道[8，12]一致。本研究显示CD3＋CD8+、CD4+Anti-HLA-DR+的百分率随着年龄的增长呈增高趋势。本研究同时显示不同性别之间淋巴细胞亚群及活化结果，CD3+CD4+、CD3-CD19+、CD4+CD38+、CD4+Anti-HLA-DR+和CD8+CD38+的百分率和绝对计数的差异有统计学意义，表现为女童明显低于男童，与国内报道[8]一致，但男女分别与合并性别后的总体差别无统计学意义。CD3+、CD3+CD8+、CD3+CD4+CD8+、CD4+/CD8+、CD3-CD16+56+、CD8+Anti-HLA-DR+的百分率和绝对计数在不同性别组之间无显著性差异。本研究建立的健康儿童淋巴细胞亚群参考值与BD公司提供的欧美人以及国内外不同地区文献[7-12]建立的正常成人或儿童的参考值比较，表现为各项目的百分率范围及CD4+/CD8+的比值均相近，而绝对计数均高于文献中的成人范围，但与以儿童为研究对象的广州地区[9]及美国芝加哥Thomas[18]的报道一致，而少青组的绝对计数接近成人水平，我们认为主要与儿童期尤其是7岁以前淋巴细胞生理性增多有关，同时提示存在种族及地区差异，也与不同实验室使用流式细胞仪不同和选择参考值统计学方法不同有关。由于新生儿自身的免疫功能尚未完全的生理特点，本研究特色之处在于收集了83例新生儿分析淋巴细胞亚群及活化，国内未见此年龄组的相关报道。结果显示，新生儿组CD3+、CD3+CD4+、CD4+CD38+、CD8+CD38+的百分率和绝对计数及CD4+/CD8+比值明显高于其它年龄组，与国外报道[13]相似，但百分率的中位数（比国外）CD3+（78%比83%）、CD3+CD4+（55%比63%）均低于国外报道。而CD3-CD19+、CD8+Anti-HLA-DR＋的百分率和绝对计数明显低于其它年龄组，与Maurice[19]报道在新生儿和成人之间CD8+Anti-HLA-DR+水平及B淋巴细胞的比例没有差异不同。由于收集新生儿标本难度，本组虽然例数相对较少，但研究中产生的正常范围应该为新生儿淋巴细胞亚群及活化的变化的评估提供了一个有意义的新工具。

通过以上分析，本文认为不同地域、不同种族、不同性别、不同年龄间健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化指标存在着差异，由于这种差别细微，可以在同一种族同一区域建立统一的正常参考值范围。本研究所得结果基本能反映本地区健康儿童外周血淋巴细胞亚群及活化指标的水平，本研究成功建立福州地区健康儿童淋巴细胞亚群及活化的正常参考范围作为正常范围参考值，对监测和评价机体免疫功能，对疾病的诊断分期、治疗评价、和预后判断有重要指导意义。

参考文献

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中图分类号：R446.62

文献标识码：A

文章编号：1674-1129(2016)03-0298-06

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.03.013

基金项目：福州市科技计划项目（编号2013－S－127－4）

作者简介：林珊，1968年2月出生，女，主任技师，主要从事临床血液免疫学检验研究。

(收稿日期2016-03-10；修回日期2016-05-04)

Establishment of the reference ranges for normal values of peripheral blood lymphocyte subsets and the main related pa -rameters of activation for healthy children in Fuzhou areas

LIN Shan，GAO Hong，LI Jing，et al. Department of Clinical labo-ratory，Fujian Province Fuzhou Children Hospital，Fuzhou 350005，Fujian Province，China.

Abstract：Objective To establish the reference range of peripheral blood Lymphocyte subsets and the main related parameters of activation for healthy children in Fuzhou areas. Methods A total of 593 peripheral blood samples were collected from healthy children aged from 0 to 18 years in the study. The included children were divided into newborn group(0-28d)，infant group (28d-12m)，toddler age group(1-3y)，preschool age group(3-7y)，school age group(7-12y) and adolescence age group(12-18y). The percentages and absolute counts of lymphocyte subsets of T cell CD3+，CD3+CD4+，CD3+CD8+，B cell CD3-CD19+，NK cell CD3-CD16+CD56+and activated T cells CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+，CD8+CD38+，CD8+Anti-HLA-DR+were detected by flow cytometry with four-color fluorescent monoclonal antibody. MultiSET software was used to collect and analyze data，and statistical analysis was performed using SPSS 10.0. 95% confidence interval was used to determine normal reference values. Results Except for the absolute counts of CD3-CD16+56+，percentages and absolute counts of all the lymphocyte subsets and lymphocyte activation index showed significant differences between different age groups. Absolute counts of CD3+T cell，lymphocyte percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD4+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+were declined with age. CD4+Anti-HLA-DR+percentage was increased with age. The percentages and absolute counts of CD3+，CD3+CD4+，CD4+CD38+，CD8+CD38+and the ratio of CD4+/CD8+in newborn group showed significantly higher than those in other age groups，while the percentages and absolute counts of CD3-CD19+and CD8+Anti-HLA-DR+showed significantly lower than those in other age group. The percentages and absolute counts of CD3+CD4+，CD3-CD19+，CD4+CD38+，CD4+Anti-HLA-DR+and CD8+CD38+showed significant differences between males and females，and those in females were significantly lower than males. The absolute counts of lymphocyte in children were higher than in adults. Conclusions The distribution of immunophenotype of peripheral blood lymphocyte in healthy children showed slight differ-ence in gender and among different age groups，so the uniform reference range of Lymphocyte subsets and activated T cells in healthy children could be established in the same area and the same race. The reference ranges of lymphocyte subsets and activated T cells could be proposed by the present study for healthy children in Fuzhou Areas.

Key words:Lymphocyte subsets；Activated lymphocyte；Flow cytometry；Child；Normal reference value